INI

1. Asignatura de Inmunidad e Infección
ME208
Semana 1 - Laboratorio 2
2023-2
Facultad de Ciencias de la Salud

2. P2. Micropipetas y microdiluciones
M. Marzal y A. Paredes
MSc Inmunología, Dr(c) Ciencias
Facultad de Ciencias de la Salud

3. LOGRO
Al finalizar el laboratorio, el
estudiante explica el fundamento de
las micropipetas y de las buenas
practicas de pipeteo; y lo aplica en
la preparación y cálculos de
microdiluciones.

4. Temario
• Introducción
• Micropipetas
• Buenas prác3cas de laboratorio –BPL
• Buenas prác3cas de pipeteo – BPP
• Tipos de pipeteo
• Errores de pipeteo
• Ac3vidades
1. Buenas prác3cas de laboratorio
2. Partes de la micropipeta
3. Pipeteo estandar
4. Prac3ca virtual de pipeteo
5. Microdiluciones y diluciones seriadas
6. Diluciones seriadas
7. Buenas prác3cas de Laboratorio

5. Introducción

6. Buenas Prácticas de Laboratorio – BPL
Good Laboratory Practice - GLP
1. Instalaciones adecuadas: Cumplir con las
normas de seguridad según el 3po de
trabajo que se realiza.
2. Personal calificado: Capacitar
con3nuamente al personal para
garan3zar el conocimiento de los
procedimientos, uso de equipos y del
material.
3. Equipo adecuado y calibrado: Plan
regular de mantenimiento y calibración
para garan3zar su correcto
funcionamiento.
4. Procedimientos estándares de operación
(POE): Procedimientos escritos, claros y
precisos, para garan3zar reproducibilidad
de los procesos por cualquier personal.

7. Buenas prác,cas de pipeteo- BPP
Good Pipe4ng Prac,ce- GPP
“Principios para maximizar la precisión y la
reproducibilidad de pipeteo, organizados en
cinco componentes”
1. Evaluación previa y necesidades
2. Selección adecuada
3. Entrenamiento (capacitación)
4. Calibración certificada
5. Operación de rutina (verificación regular)
La micropipeta es un instrumento de
alta precisión empleado para absorber y
transferir pequeños volúmenes de
líquidos menores a 1 mL.

8. Tipos de micropipeta y las puntas
• La micropipeta usa puntas
(3ps) de plás3co, desechables
y estériles, para medir
dis3ntos líquidos sin tener que
lavar el equipo.
• La micropipeta y la punta
forman un sistema de pipeteo
integrado.
• Usa un sistema de
desplazamiento de aire, por
ello el ajuste entre la punta y
el eje de la pipeta debe ser
muy preciso para un sellado
firme.
• Se usan diferentes puntas para
diferentes volúmenes.

9. Actividades

10. ACTIVIDAD 1. Buenas prác;cas de laboratorio

11. ACTIVIDAD 2. Partes de la micropipeta

12. ACTIVIDAD 3. Volúmenes y puntas
Selección adecuada de micropipeta y puntas

13. ACTIVIDAD 4. Postura y errores con
micropipeta
Ángulo incorrecto
para absorber
Temperatura
de la muestra
Aspirar
aire

14. Errores de pipeteo
1 No valorar la viscosidad de la muestra
2 Dispensar los reactivos líquidos demasiado deprisa
3 Pipetear distintas muestras con la misma punta
4 No realizar un mantenimiento adecuado de las pipetas
5 No calibrar las pipetas en los plazos establecidos
6 Pipetear en un ángulo incorrecto
7 Aspirar aire en lugar de liquido
8 Sumergir excesivamente la punta que no deje aspirar la muestra
9 Almacenamiento incorrecto (posición horizontal) de micropipetas
10 No humedecer previamente las puntas
11 No considerar la temperatura ambiente y la temperatura de la muestra
Almacenamiento correcto e
incorrecto de las micropipetas

15. Tipos de Pipeteo
1. Pipeteo Estándar (forward pipe9ng)
Soluciones acuosas
2. Pipeteo Reverso (reverse pipe9ng)
Soluciones con gran viscosidad o que
formen espuma
3. Pipeteo Repe>>vo (Repe>>ve
Pipe9ng)
Varias veces el mismo volumen
4. Pipeteo de muestras heterogéneas
Homogenizar microdiluciones

16. ACTIVIDAD 5. Pipeteo estándar
1. Iden5ficar el primer y segundo tope de la
pipeta. Coloque la punta a la micropipeta.
2. Sumergir la punta en la muestra en forma
ver5cal* y presionar hasta el primer tope
3. Soltar el botón despacio para aspirar y esperar
unos segundos antes de re5rar la punta
4. Descargar el volumen en el vaso en un ángulo
de 10 a 40 grados, presionando el botón
suavemente hasta el primer tope.
5. Presionar el botón hasta el segundo tope para
expeler cualquier remanente de líquido
6. Liberar el botón y expulsar la punta
presionando el botón de eyección
Volumen (μl)
Profundidad óptima de
inmersión (mm)
0.1 - 1 1
1 - 100 2 - 3
101 - 1000 2 - 4
1001 - 10000 3 - 6
1 2 3
4 5 6
(*)

17. Video: Micropipeta y pipeteo (6 min)
https://youtu.be/xnlo2V3AHas
https://youtu.be/IPbqqPXFtFc
Otro:

18. Microdiluciones en diagnós;co inmunológico
https://youtu.be/jzuUDbPnid0?t=30

19. ACTIVIDAD 6. Diluciones seriadas
Diluciones seriadas
• Sucesión de diluciones con incrementos regulares y progresivos en los cuales
el factor de dilución es siempre el mismo.
• El factor de dilución puede ser: 1:2 (al medio), 1:5 (al quinto), 1:10 (al
decimo), etc
Ejemplo:
- Concentración inicial = 160 mg/ml
- Volumen final = 100 ul
- Factor de dilución = 1:2
50 ul de soluc.
Madre + 50 ul
de diluyente
1
50 ul de tubo 1 +
50 ul de diluy
50 ul de tubo 2 +
50 ul de diluy
50 ul de tubo 3 +
50 ul de diluy
50 ul de tubo 4 +
50 ul de diluy
2 3 4 5
1 1:2 1:4 1:8 1:16
1:2 1:2 1:2 1:2
Solución Madre

20. https://youtu.be/D3HPDoCaVNg
Videos. Preparación de diluciones
seriadas
https://youtu.be/YObbRy0kPww
Obligatorio ver los videos

21. ACTIVIDAD 7. PREGUNTAS INTEGRADORAS
1. ¿Por qué es importante el uso de micropipetas en el
laboratorio?
2. Explique que tipo de pipeteo usaría para preparar una
dilución de suero.
3. Si el volumen final de su solución es 240 µL ¿Cuál es el
volumen a transferir para realizar una dilución seriada
al medio?

22. ACTIVIDAD 5. Laboratorio virtual de
pipeteo
hdps://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:4eecf5fe:lx_simula5on:1

23. ACTIVIDAD 8
BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO
1. Ordenar el material usado en la
prác3ca.
2. Realizar maniobras de buenas
prác3cas de laboratorio para
eliminar objetos iden3ficados
como potencialmente peligrosos.
3. Desinfecte la mesa de trabajo
usando Hipoclorito de sodio (lejía)
y alcohol ealico 70%.
4. Ejecute la maniobra para el
descarte de los guantes de látex.
Prac3que varias veces este
procedimiento.
5. Realizar la maniobra universal para
el lavado y desinfección de manos

24. LOGRO
Al finalizar el laboratorio, el
estudiante explica el uso de las
micropipetas y las buenas practicas
de pipeteo; así como, los
fundamentos para la preparación y
cálculos de microdiluciones.

25. Lecturas recomendadas:
1. Guía de laboratorio
2. hdps://youtu.be/IPbqqPXFtFc
3. hdps://www.equiposylaboratorio.com/si5o/contenidos_mo.php?it=1031
4. MINSA. 2005. Serie de Normas Técnicas No 18. BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS DE
ENSAYO, BIOMÉDICOS Y CLÍNICOS. Comité de Bioseguridad del INS. Perú.
5. Fuentes A, Fernández I, Fuentes C. Consideraciones en el uso y mantenimiento de
micropipetas, Universidad Politécnica de Valencia. Disponible en:
hdps://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/145914/Fuentes%3bFern%c3%a1ndez
%3bFuentes%20-
%20Consideraciones%20en%20el%20uso%20y%20mantenimiento%20de%20micropi
petas.pdf?sequence=1&isAllowed=y
6. Manejo de micropipetas. Universidad politecnica de Valencia. Disponioble en:
hdps://m.riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/145895/Fuentes%3BFernández%3B
Fuentes%20-%20Manejo%20de%20micropipetas.pdf?sequence=1&isAllowed=y