1. CETIS 62
PRÁCTICA NO. 3
IDENTIFICACIÓN DE
CARBOHIDRATOS
MATERIA
BIOQUÍMICA
DOCENTE
IBQ Marta GabrielaAceves Morales
ESPECIALIDAD
LABORATORIO CLÍNICO
GRADO: 6° SEMESTRE GRUPO:“E”
EQUIPO
NUM.7
INTEGRANTES
Acosta Mendoza Edgar Guadalupe
Isaías Ojeda Arlette Guadalupe
Muñoz Gutiérrez Abigail del Rosario
Silva Lerma Sanjuana Ivette
Vázquez CelioAndrea
2. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
OBJETIVO: Realizar diferentes experimentos, donde se identifiquen, las
características de los carbohidratos.
FUNDAMENTO:
Los carbohidratos comprenden los azucares, los almidones, las celulosas y las
sustancias inmediatamente relacionadas con ellos. Es difícil formular una
definición del término “carbohidrato” que incluya todos los miembros de esta
familia de compuestos pero a partir de fórmulas estructurales. Deberá notarse que
un carbohidrato es un polioxiadehido una polioxicetona o una sustancia que
produce por hidrólisis cualquiera o ambas de estos tipos de compuestos. Ejemplo:
la glucosa y la arabinosa son polioxialdehídos, mientras que la fructuosa es una
polioxicetona.
NOMENCLATURA Y CLASIFICACION DE CARBOHIDRATOS
Los nombres de los carbohidratos se caracterizan por la terminación “osa”. Los
principales grupos de carbohidratos se designan como monosacáridos. Los
monosacáridos comprenden todos los carbohidratos sencillos que no se pueden
hidrolizarse en sustancias de menor estructura molecular. Los disacáridos incluyen
aquellos carbohidratos que pueden hidrolizarse en dos azucares simples. De la
misma manera, un trisacárido proporciona por hidrólisis tres moléculas de
monosacáridos y una molécula de polisacárido origina muchas moléculas de
monosacáridos. Todos los carbohidratos con excepción de los polisacáridos, se
disuelven en agua, poseen un sabor más o menos dulce y son llamados azúcares.
El metabolismo de los carbohidratos en el cuerpo animal es esencialmente el de la
glucosa y sustancias a fines de la misma en sus procesos metabólicos.
El azúcar característica de la sangre y líquidos titulares es la glucosa. L a digestión
de los alimentos ricos en carbohidratos, como almidón, sacarosa y lactosa,
produce los monosacáridos: glucosa, fructuosa y galactosa, que pasan al torrente
circulatorio. La galactosa y fructuosa son transformados en el hígado.
3. Hay pruebas en el sentido de que la mucosa del intestino pueda desempeñar
cierto papel en la conversión de glucosa a fructuosa a medida que la primera es
absorbida.
La glucosa de la sangre circulante y líquidos corporales llega a todas las células
de la economía y es utilizada para producir energía. En condiciones normales y
metabolismo de los carbohidratos suministra más de la mitad de los
requerimientos energéticos del organismo. De hecho, el cerebro depende en gran
medida del metabolismo de los carbohidratos como fuente de energía, y cesa de
funcionar rápidamente cuando disminuya muy por debajo de lo normal la
concentración de la glucosa sanguínea.
El glucógeno del hígado, músculos y otros tejidos se forman primariamente a partir
de la glucosa y actúa como fuente de energía inmediatamente disponible o como
reserva de la misma. Normalmente una buena parte de la reserva de la grasa de
los depósitos corporales se forman a partir de la glucosa; a modo análogo
partiendo de este monosacárido la glándula mamaria sintetiza lactosa y también
se forman de la glucosa los glucolípidos y mueopolisacáridos titulares.
El metabolismo de muchos aminoácidos de las proteínas progresivas por vía de la
glucosa, y algunos productores de la misma son utilizados por la economía, por la
síntesis de los aminoácidos.
Es por lo tanto evidente que la glucosa ocupe la posición el metabolismos de los
Carbohidratos, y también que este último está íntimamente relacionada con el de
lípidos y proteínas.
La concentración del azúcar de la sangre en el hombre durante el periodo de post-
absorción es de 12 a 14 horas después de la comida.
Varia normalmente de 60 a 90 mg % y puede alcanzar 130 mg % o más después
de comidas ricas en carbohidratos. Los valores para otros animales de sangre
caliente suelen ser del mismo orden.
Somogyi y Klinghoffer han demostrado que la glucosa en la sangre del hombre se
encuentra uniformemente distribuida en el agua de eritrocitos y plasma. Como los
primeros contiene mucho menos agua que el plasma, la concentración de volumen
por unidad de volumen en las células es inferior a la del plasma.
Solo en los antropoides se observan concentraciones iguales en el agua del
plasma y los eritrocitos. Los glóbulos rojos del cerdo y la rata carecen
prácticamente de glucosa.
EL HÍGADO EN LA REGULACIÓN DEL AZÚCAR SANGUÍNEO
En el hígado el órgano primeramente encargado de la regulación de las
concentraciones del azúcar sanguíneo por ser el único capaz de formar glucosa a
4. partir de fuentes ajenas a los carbohidratos, como ejemplo los aminoácidos, en
cantidades suficientes para cubrir las necesidades corporales.
LOS RIÑONES COMO FUENTES DE GLUCOSA SANGUÍNEA
Aunque el hígado desempeña el papel importante en la regulación de la glucosa
sanguínea, disponemos de un buen caudal de pruebas en el sentido de que los
riñones pueden formar glucosa sanguínea a partir de cierto número de
carbohidratos intermedios y también de aminoácidos. Rusell y Wilhelmi pudieron
demostrar que rebanadas de riñón forman carbohidratos a expensas del piruvato,
succinato, alfa cetoglutarato y de los aminoácidos: ácido glutámico y alanina. Si
bien todos los datos indican que los riñones poseen sin duda cierta capacidad de
glucogénesis y también para conservar la glucosa sanguínea, es también cierto
que dicha capacidad es muy inferior a la del hígado.
REACCIÓN DE LA BENCIDINA
La bencidina es una sustancia que cristaliza con una molécula de agua si se hace
la cristalización por debajo de 60° C, y anhidrasis porque el sulfato de bencidina
es insoluble. Se emplea también para investigar la adición de agua oxigenada a la
leche y para identificar la sangre en líquidos biológicos, empleada también en la
preparación de colorantes, para perfumar jabones baratos y en las cremas para el
calzado. Su constante criocóspica (6.9; agua 1.8) lo hace útil, junto con su poder
disolvente, en criometría
5. BENCIDINA (primaria)
Prueba específica para pentosas. Una pentosa está formada por 5 átomos de
carbono, por lo tanto cuando se habla de una aldopentosa se hace referencia a un
monosacárido que contiene 5 átomos de carbono y puede contener también el
grupo cetosa, por el cual toma el nombre de cetohexosa.
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo de ensayo colocar 0.5ml del reactivo de bencidina.
2. Añadir 1 ó 2 gotas de solución de carbohidrato.
3. Calentar en agua hirviendo durante varios minutos, inmediatamente
después enfriar con agua.
4. Si se forma un color rosa o rojo la prueba es positiva.
Esta prueba parece muy satisfactoria para pentosas, las hexosas comunes no
interfieren en esta prueba.
PRUEBA DE ANILINA
Esta prueba sirve para diferenciar las pentosas de los ácidos urónicos y de las
hexosas que no dan la prueba.
Por deshidratación de las pentosas, se forman furfural, que reaccionan primero
con una molécula de anilina dando un compuesto que es una base de Schiff, de
poco color
Con otra molécula de anilina, se parte del ciclo del furano dando un compuesto
que por tener doble enlace conjugador, tiene un color rojo intenso.
6. Dando también la prueba positiva los polisacáridos que por hidrólisis dan
pentosas.
PROCEDIMIENTO
1. Colocar 1 ml de carbohidrato.
2. Añadir 2 ml de ácido acético glacial y 3 gotas de anilina.
3. Calentar a hervir durante 1 minuto la coloración roja es positiva
Esta prueba la dan positiva las pentosas, puede servir para diferenciar las
pentosas de ácidos urónicos.
AZÚCARES REDUCTORES
(Tollens, Fehling, Benedict)
OXIDACIÓN
Aunque la oxidación de los aldehídos, y en algunos casos las cetonas pueden
emplearse como un método de preparación de ácidos carboxílicos, las reacciones
que se describen son principalmente como pruebas cualitativas que permiten
diferenciar los aldehídos y determinar acetonas de otras clases de compuestos
orgánicos.
La oxidación de los aldehídos a ácidos carboxílicos se efectúa muy fácilmente en
una solución alcalina. Estos reactivos alcalinos son agentes oxidantes moderados,
oxidan los aldehídos al mismo tiempo que ellos se reducen.
El reactivo Tollens se prepara por la adición de hidróxido de amonio en una
solución de nitrato de plata hasta que el precipitado de óxido de plata formado
7. inicialmente se disuelve nuevamente es conveniente considerar a este reactivo
como óxido de palta en lugar de
Ag + 2OH -H2O Ag2O +4NH3 2Ag (NH3)2OH
Una solución que contiene el ion plata amonicéo, y a menudo así es considerado
en sus reacciones como aldehído.
H O
CH3-C-C=O + Ag2O CH3-C-OH + 2Ag
La reacción conocida, la “prueba del espejo de plata” (Tollens), comprende en
realidad al aldehído, una pequeña concentración de ion plata y los iones oxidrilo.
La solución de Fehling consiste en dos partes:
a) Una solución de sulfato cúprico.
b) Una solución de hidroxilo de sodio y tartrato de sodio y potasio (sal de
Rochelli).
Cuando se mezclan cantidades iguales de estas soluciones, se forma un complejo
soluble de tartrato cúprico de color azul obscuro, el cual proporciona una pequeña
concentración de iones cúprico. Los aldehídos reducen la solución de Fehling y
forman un precipitado rojo de óxido cuproso.
OH OH
CH3-C=O + 2Cu + 5OH CH3-C=O + Cu2 + 3H2O
La solución de Benedict es semejante a la de Fehling con la modificación de que
se utiliza citrato de sodio en lugar del tartrato de sodio y potasio. Tiene como
ventaja sobre la solución de Fehling de que no es necesario dividirla en dos
reactivos separados.
Las 3 soluciones mencionadas nos sirven para distinguir los aldehídos de las
acetonas sencillas, porque las últimas no reaccionan. Pueden además indicarse
que la reducción de las soluciones permite diferenciar un aldehído de un alcohol.
Aunque los alcoholes pueden oxidarse por agentes oxidantes fuertes no son
atacados por estos reactivos moderados.
El benzaldehído puede oxidarse hasta ácido benzoico con el reactivo de Tollens,
pero no es atacado por las soluciones de Fehling o de Benedict.
8. Los aldehídos reducen con dificultad las soluciones neutras o ácidas de las sales
de plata o de cobre. Solo en soluciones alcalinas se observa la fuerte acción
reductora de los aldehídos, aunque no se conoce con certeza el papel que en ella
juega el ión oxidrilo.
PRUEBA DE TOLLENS
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en un tubo de ensayo 1 ml de carbohidrato.
2. Añadir 1 ml de reactivo de Tollens.
3. Agitar perfectamente.
4. Calentar a baño maría durante 5 minutos máximo. Observar la forma de
espejo que se forma en los positivos.
PRUEBA DE FEHLING
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en un tubo de ensayo 1 ml de carbohidratos.
2. Añadir 1 ml de Fehling “A” y 1 ml de Fehling “B”.
3. Mezclar bien y ponerlo a baño maría o en la flama del mechero durante
cierto tiempo.
4. Sí mira a marrón o rojo la prueba es positiva.
Esta prueba es una reacción de oxido-reducción, los alcoholes del azúcar se
oxidan a aldehídos y ácidos, el cobre se reduce de cúprico a cuproso por eso
cambia de color la solución y se forma el precipitado.
9. PRUEBA DE BENEDICT
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en varios tubos de ensayo 1 ml de solución de Benedict
2. Añadir 3 gotas de cada solución de carbohidratos en cada tubo.
3. Agitar y colocar los tubos al mismo tiempo en agua hirviendo durante 3
minutos.
4. Enfriar la solución y hacer comparaciones.
5. Obsérvese el precipitado formado. Un cambio de color NO indica reacción
positiva, solo el precipitado.
NOTA: Deberán darse los resultados comparativos de las 3 pruebas de
azúcares reductores.
PRUEBA DEL ÁCIDO PICRICO
TRINITROFENOL
Se puede obtener, pero con mal rendimiento, por acción de la mezcla sulfónica
sobre fenol.
Se obtiene mejor la acción sucesiva de los ácidos sulfúricos y nítricos.
O por nitración de coloro benceno, hidrólisis de nitrito cloro benceno obtenido a
dinitrofenol, y después nitración de este por mezcla sulfonítrica.
10. El ácido pícrico es un sólido cristalizado, amarillo pálido (p.f. 122°C), un poco
soluble en agua, con sabor amargo (picros-amarillo)
Su descomposición explosiva, desencadena por un detonador (fulminante de
mercurio) lo hace útil como explosivo (melenita), si bien tiene el inconveniente de
corroer el alma del cañón por su carácter ácido, por lo que tiene más empleo en
bombas de aviación.
El ácido pícrico es un ácido relativamente fuerte que ataca los metales dando
picratos metálicos muy inestables y explosivos, lo que requiere proteger el acero
de abuses con un barniz o vidriados.
Los picratos de
amonio
C6H2(NO2)3(ONH4) y
de potasio, son pocos
solubles en agua.El
picrato de amonio se
utiliza como explosivo.
El ácido pícrico se
emplea para teñir de
amarillo la lana, como
reactivo de alcaloides
y proteínas
(investigación de
albúminas en líquidos
biológicos: reactivo de
Esboch).
El ácido pícrico, como
otros nitrofenoles,
existe en dos formas:
la normal que da
cristales cuando se cristaliza
la ligroína.
11. Y la así, que da soluciones amarillas en agua y cristales amarillos de esta
solución, especialmente si es alcalina.
Así el 2,4, dinitrofenol se utiliza como indicador del pH en la escala de Michaelis,
debido a la mayor intensidad de coloración amarilla que presenta una solución
según variaciones pH del medio, se utiliza también para adelgazar, pero su
empleo es muy delicado, debido a su toxicidad.El grupo aldehído le da
característica reductora a monosacáridos.
El grupo aldehído de las aldohexosas se oxida con facilidad el carboxílico
correspondiente. Esto sucede con un pH neutro o poco alcalino, empleando
agentes oxidantes o enzimas.El ácido monocarboxílico que se produce se conoce
con el nombre de ácido aldónico (a partir de galactosa). En presencia de este
agente oxidante se oxidan tanto el grupo aldehídico como la función alcohólica
primaria.
PROCEDIMIENTO
1. A 3 ml de solución de carbohidratos añadir 1 ml de solución saturada de
ácido pícrico.
2. Agregar 0.5 ml de solución de carbonato de sodio al 10%.
3. Calentar en agua hirviendo durante 1.5 minutos.
*Un color café denota prueba positiva.
13. Fehling “B” Reactivo de Benedict Ácido pícrico saturado
Carbonato de sodios Carbohidratos
RESULTADOS:
PRUEBA REACCIÓN DE BENCIDINA
Prueba específica para las pentosas.
Color rojo resulta ser positiva a la prueba.
Carbohidratos que reaccionaron:
PRUEBA REACCIÓN DE BENCIDINA
CARBOHIDRATO POSITIVO/NEGATIVO COLORACIÓN
GALACTOSA Negativo Café claro
XILOSA Positivo Roja-rozada
GALACTOSA
ANHIDRICA
Negativo Café claro
MALTOSA Negativo Café claro
FRUCTOSA Negativo Café claro
SACAROSA Negativo Café claro
DESTROXA Negativo Café claro
14. MEIL Negativo Café claro
L-ARABINOSA Negativo Café claro
El resultado arrojado por esta prueba resulto ser positivo solo a las pentosas;
debido que al reaccionar la bencidina con el carbohidrato cambio por completo su
coloración tomando un color rojo-rosado; sin embargo, aunque esta prueba resulte
ser positiva para las pentosas hay algunos carbohidratos tales como la glucosa y
fructosa que son pentosas no reaccionan marcándolas como negativas en esta
prueba.
Imagen anexada:
PRUEBA DE ANILINA
Prueba utilizada para la diferenciación de las pentosas de los ácidos
irónicos y de las hexosas.
Coloración rojo intenso resulta ser positiva a esta reacción
Carbohidratos identificados:
PRUEBA DE ANLINA
CARBOHIDRATO POSITIVO/NEGATIVO COLORACIÓN
GALACTOSA Negativo Amarillo oscuro
XILOSA Positivo Rojizo
GALACTOSA
ANHIDRICA
Negativo Amarillo claro
MALTOSA Negativo Amarillo claro
FRUCTOSA Negativo Amarillo claro
SACAROSA Negativo Amarillo claro
DESTROXA Negativo Anaranjado
15. MEIL Negativo Amarillo oscuro
L-ARABINOSA Positivo Rojizo
El resultado arrojado por esta prueba solo resulto ser positivo en la xilosa y en L-
arabinosa cambiando su coloración a un color rojizo; generalmente esta prueba es
realizada para diferenciar como ya mencionado las pentosas de las hexosas y lo
ácidos irónicos.
Imágenes anexadas:
16. PRUEBA DE FEHLING
Prueba que consta de dos partes
Coloración marrón-rojo resulta ser positiva para la reacción
Carbohidratos identificados:
PRUEBA DE FEHLING
CARBOHIDRATO POSITIVO/NEGATIVO COLORACIÓN
GALACTOSA Positivo Marrón
XILOSA Positivo Marrón
GALACTOSA
ANHIDRICA
Negativo Azul
MALTOSA Negativo Verde
FRUCTOSA Positivo Marrón
SACAROSA Negativo Azul
DESTROXA Negativo Verde
MEIL Positivo Marrón
L-ARABINOSA positivo Rojo-marrón
Los resultados arrojados por esta prueba en algunos carbohidratos fueron su
cambio de coloración pues tomaron una tonalidad color rojo-marrón, esta es la
única prueba que se divide en dos partes que constan una en el sulfato cúprico y
la otra en la solución de hidroxilo y tartrato de sodio y potasio; al mezclar ambas
soluciones y al reaccionar con los carbohidratos tomaran una coloración azul, y
que al ser introducidos en agua caliente, debido a una pequeña concentración de
iones de cúprico cambiaran los colores y se transformaran rojo-marrón lo cual es
positivo.
Imagen anexada:
17. PRUEBA DE TOLLENS
Esta prueba utilizada para identificar los azucares reductores
Un espejo de plata resulta ser positivo para esta reacción
Carbohidratos identificados:
PRUEBA DE TOLLENS
CARBOHIDRATO POSITVO/NEGATIVO COLORACIÓN
GALACTOSA Positivo Espejo de plata
XILOSA Positivo Espejo de plata
GALACTOSA
ANHIDRICA
Positivo Espejo de plata
MALTOSA Positivo Espejo de plata
FRUCTOSA Positivo Espejo de plata
SACAROSA _ANULADO ANULADO
DESTROXA Positivo Espejo de plata
MEIL Positivo Espejo de plata
L-ARABINOSA Positivo Espejo de plata
18. El resulto de esta prueba resultó ser positivo para todos los carbohidratos, pues lo
se observó un cambio de coloración, pues se reflejó un espejo de plata, que en si
es la comprensión de aldehído, es decir la concentración de ion de plata y ion
oxidrilo.
Imágenes anexadas
PRUEBA DE BENEDICT
Esta prueba identifica los azucares reductores
En esta prueba el cambio de la coloración no significa que sea positivo,
cuando es positivo se formara un precipitado en el fondo del tubo de
ensaye
Carbohidratos identificados:
PRUEBA DE BENEDICT
CARBOHIDRATO POSITIVO/NEGATIVO COLORACIÓN
GALACTOSA Negativo Verde
XILOSA Negativo Verde-amarillo
GALACTOSA
ANHIDRICA
Negativo Azul turquesa
MALTOSA Negativo Verde-azulado
FRUCTOSA Positivo Marrón
SACAROSA Negativo Azul turquesa
DESTROXA Positivo Marrón
MEIL Positivo Café
L-ARABINOSA Negativo marrón
19. Esta prueba como mencionado es utilizada para la identificación de los azucares
reductores, su reactivo consta de sulfato cúprico, citrato de sodio, carbono anhidro
de sodio; esta prueba resulto solo ser positiva para tres carbohidratos que son;
fructosa, destroxa y la miel, los cuales al reaccionar cambiaron su tonalidad a
cafés-marrón, sin embrago solo fueron los únicos que se generó un precipitado en
el fondo , lo cual es resultado favorable a hacia la reacción
Imágenes anexadas
PRUEBA DE PICRICO(2-4-6-TRINITROFENOL)
El ácido pícrico es un sólido de tonalidad amarillenta que es de muy baja
solubilidad, a diferencia del dinitrofenol es el indicador de pH
El color café indica positividad a la reacción
Carbohidratos identificados
PRUEBA DE PICRICO(2-4-6-TRINITROFENOL)
CARBOHIDRATO POSITIVO/NEGATIVO COLORACIÓN
GALACTOSA Negativo Rojo
XILOSA Positivo Café
GALACTOSA
ANHIDRICA
Negativo Amarillo
MALTOSA Negativo Rojo
FRUCTOSA Positivo Café
SACAROSA Positivo Café
DESTROXA Negativo Rojo
MEILnegativo Negativo Rojo
L-ARABINOSA Positivo Café
20. Esta prueba resulto solo ser positiva en los carbohidratos de L-arabinosa,
sacarosa, fructosa y la xilosa, tomando una tonalidad color café.
Imágenes anexadas:
OBSERVACIONES
En esta práctica pudimos observar diferentes formas para identificar la presencia
de carbohidratos en una muestra mediante reacciones químicas con diferentes
reactivos, y evaluando los resultados positivos o negativos, identificamos los
diferentes tipos de sacáridos de acuerdo a la reacción que se refería, y
diferenciamos las distintas reacciones en base al fundamento en que se basan las
mismas.
Esta práctica fue sumamente interesante ya que para cada prueba tenia cada una
un procedimiento y desarrollo distintos y en cada una se pudo observar que
presentaban diferentes coloraciones de diferentes tonalidades cada reacción.
Se observó que es fácil poder identificarlos ya que cada una especifica la
tonalidad que va tener. Tanto en los carbohidratos que utilizamos cada reacción
nos identificaba los diferentes tipos de carbohidratos que hay y así poder realizar
la práctica correctamente observando lo que ocurría en el desarrollo de esta.
21. CONCLUSIONES
Los carbohidratos al poseer en su estructura aldehídos o cetonas, presentan un
comportamiento químico ligado a los grupos funcionales de estos, como por
ejemplo la capacidad de oxidarse con agentes oxidantes suaves como el reactivo
de fehling o de Tollens o la capacidad de formar osazonas, además esta clase de
reacciones permiten diferenciar monosacáridos de disacáridos como la sacarosa.
Los monosacáridos se diferencia de los disacáridos (sacarosa) por su poder
reductor, poder que es otorgado por el carbono libre que posee, los
monosacáridos a su vez se subdividen en aldosas y cetosas, y en pentosas o
hexosas, estos fueron identificados y diferenciados mediante la pruebas realizadas
en las que se evidencio la velocidad de deshidratación de las aldosas y cetosas, y
la formación de furfural o hidroximetil furfural, según provenga una pentosa o
hexosa.
Los reactivos que reaccionaban positivo (cambiaban de color) son los que
contienen carbohidratos.
Monosacáridos como la glucosa y disacáridos como la maltosa a excepción de la
sacarosa son azucares reductores. La maltosa presenta en su estructura el OH
hemiacetálico por lo que es un azúcar reductor, es decir tienen su OH anomérico
libre, y éstos son los que dan positivo en la prueba de Benedict.
22. BIBLIOGRAFÍAS:
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