CONCENTRACIÓN DE MICROORGANISMOS

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CONCENTRACION DE MICROORGANISMOS.
I. OBJETIVOS
Determinar el número total de microorganismos por el método de la
celda Sedwigth – Rafter y el método de la franja.
Determinar la concentración de microorganismos por el método de la
celda Sedwigth – Rafter y el método de la franja.
Determinar el número de campos de la celda Sedwigth – Rafter y el
método de la franja.
II. FUNDAMENTO TEORICO
DEFINICIÓN DE ALGAS
Las algas difieren de los otros grupos de seres pequeños o microscópicos por
poseer sus pigmento internos llenos de clorofila, que a veces están ocultos
parcialmente o enmascarados por otros pigmentos, lo que las capacita en
presencia de la luz, combinar agua con anhídrido carbónico para formar
almidón o sustancias análogas y liberar oxígeno.
Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la
turbiedad.
MÉTODOS
CUALITATIVO
Nos proporciona información sobre las especies planctónicas presentes a
través de la diversidad y abundancia relativa.
CUANTITATIVO
Nos proporciona información sobre la densidad total de plancton a través del
número de microorganismos presentes por unidad de volumen de agua.
Examen para determinar la concentración de organismos en un ambiente,
aplicado especialmente a recuento de algas y protozoos. Puede realizarse
sobre muestra directa, concentrada o diluida.
Para expresar resultados se usan diferentes unidades. Las más comunes son:
a) Nº organismos por mL o por L
b) Unidad estándar de área (UEA) por mL

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Elementos necesarios: microscopio con objetivos calibrados; ocular de Whipple,
u otro ocular reticulado, cámara de Sedgwick-Rafter, de Nebauer, otras.
a) Determinación del Nº de Organismos por mL
Procedimiento: Introducir la muestra, previamente homogeneizada en la cámara
de recuento y cubrir con la lámina cubreobjeto, evitando la presencia de
burbujas de aire. Dejar reposar unos minutos. Colocar la cámara sobre la
platina del microscopio. Verificar la presencia del reticulado en el ocular.
Escoger el objetivo adecuado (generalmente 10x o 20x), enfocar y proceder a
contar el número de organismos por campo.
Se entiende por campo el área ocupada por el cuadrado del reticulado (Whipple
u otro) Dependiendo de la densidad de los organismos en la muestra, se cuenta
como mínimo 10 campos al azar.
b) Determinación de las Unidades Estándar de Área por mL
Una de las formas para estimar la densidad de algas en el agua es la
determinación de una unidad convencional conocida como "Unidad Estándar de
Área", que incluye la superficie ocupada por los microorganismos en el campo
del microscopio. Dicha área equivale a la ocupada por un cuadrado de 20 x 20
micrones por lado, o sea 400 micrones cuadrados.
1 UEA = 400
Procedimiento: Introducir 1 ml de muestra previamente homogeneizada en una
cámara de Sedgwick Rafter, cubrir con la lámina cubreobjeto, evitando dejar
atrapadas burbujas de aire.
Dejar reposar unos minutos, y colocar en la platina del microscopio.
Verificar que el objetivo del microscopio cuente con el reticulado de Whipple.
Escoger el objetivo adecuado (generalmente 10x o 20x), enfocar y proceder a
contar como unidades los cuadrados (1x100 del reticulado de Whipple)
ocupados totalmente por las algas y como fracción de unidad, los cuadrados
parcialmente llenos.
III. RESULTADOS
Método de la Celda.- La muestra usada fue del estaque de Arquitectura

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16 de abril de 2008; 10:00 a.m.
N°de
Campos
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
N° de
M.o.
26 46 41 29 35 26 19 9 7 8 4 6 9 11 7 7
Numero de campos: 16
Suma total de microorganismos = 290
Numero de campos a lo ancho de celda: 16
Numero de campos a lo largo de celda: 16×50/20=40
Números de campos en toda la celda: 15×40=640
Concentración de m.o. /mL =563×54 =30402 m.o. / mL
Promedio de algas x campos = X̅ =
(suma total de M. O. )
total de campos
=
290
16
= 18.13 ≈ 18
algas
campos
Concentracion =
(X̅)(total de campos)
1 ml
=
(18
algas
campos
) (640 campos)
1mL
11520
algas
mL
Método de la Franja.- La muestra usada fue del estanque de arquitectura, el
portaobjeto usado en la práctica fue de 22x22 mm.
16 de abril de 2008; 10:00 a.m.
165 gotas - 10mL
1 gota – Vgota Vgota= 0.0606 mL
N°de
Campos
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
N°de
M.o.
11 10 6 5 8 8 8 9 5 7 4 4 4 3

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Numero de campos: 14
Numero de campos en todo el cubre objetos: 142 = 196
Suma total de M.O. = 92
Promedio de algas x campos = X̅ =
(suma total de M. O. )
total de campos
=
92
14
= 6.57 ≈ 7
algas
campos
Concentracion =
(X̅)(total de campos)
1 gota
=
(7
algas
campos
) (92 campos)
0.0606 mL
= 22638
algas
mL
Microscopio
Método de la
celda
Método de la
franja
Muestra
1 14 720 m.o./mL 65 217 m.o./mL Estanque Faua
2 11 192 m.o./mL 35 100 m.o./mL Estanque Faua
5 11 520 m.o./mL 22 638 m.o./mL Estanque Faua
6 30 402 m.o./mL 55 519 m.o./mL Estanque Faua
11 18 620 m.o./mL 24 732 m.o./mL Estanque Faua
12 23 520 m.o./mL 25791 m.o./mL Estanque Faua

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IV. OBSERVACIONES
 Dependiendo de la toma de la muestra se obtendrá resultados ya sea
captada cerca de la superficie, cerca de las paredes o en el fondo.
 Se debe agitar la muestra antes de captarla mediante los instrumentos para
que la concentración de microorganismos sea uniforme.
 En el caso del método de la franja no se debe tener un uso excesivo de la
lámpara porque esta genera calor y hace que la muestra se evapore.
 En el caso del método de la celda no se debe dejar burbujas en la misma
porque varía la concentración de los microorganismos en las diferentes
zonas.
 En el método de la celda se debe agitar la muestra dentro de ella para tener
una concentración mas uniforme por todas las zonas de la celda.
V. CUESTIONARIO
1. ¿Porque es importante determinar la concentración de
microorganismos?
La concentración de microorganismos nos da una idea de cuan contaminada
esta una muestra o un cuerpo de agua, es un parámetro de polución del agua,
en base a ello se realizan los diferentes procesos para el tratamiento de agua
para eliminar o disminuir la posible contaminación por parte de los
microorganismos.
2. ¿Qué diferencia existe entre control preventivo y el control
correctivo de microorganismos?
Los causantes de problemas se podrían dividir en 2 grupos:

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 El primero introducido por excretas que son depositados por los
desagües hasta el agua.
 El segundo constituido por los organismos que se originan en la propia
fuente.
La diferencia sería en que el control preventivo conserva las condiciones del
agua sin alterarlas y el correctivo se somete a procesos de tratamiento de
filtración y cloración que son procesos físicos y químicos.
3. ¿Cómo se puede controlar el crecimiento de bacterias, hongos,
protozoarios y virus?
Prevención y control de bacterias y otros microorganismos: El mejor control de
microorganismos consiste en la desinfección periódica de los filtros y la
cloración continua del agua en base a inyecciones de compuestos como cloro
gaseoso, hipoclorito de sodio o hipoclorito cálcico, el cloro actúa inhibiendo la
actividad enzimática de las células evitando su proliferación.
La efectividad de la acción del cloro está condicionada por algunos factores
externos como pH y temperatura, a su vez el tiempo de contacto entre
desinfectante y agua también influye en el poder biocida de los compuestos
clorados. A mayor temperatura, el poder desinfectante del cloro es mayor, sin
embargo, es menos estable, perdiéndose con mayor rapidez. Con respecto al
tiempo de contacto entre los compuestos clorados y el agua de riego, depende
en gran medida del contenido de materia orgánica ya que la oxidación es lenta,
por lo que con aguas ricas en materia orgánica necesita incrementar la
cantidad de cloro a aplicar o aumentar la duración del contacto. En general, es
aconsejable que el tiempo de contacto no sea inferior a 30 minutos.
De cualquier forma, ya sea, gaseosa, líquida o sólida, la aplicación de cloro en
una instalación de riego produce reacciones con los compuestos presentes en
el agua, lo que gasta o consume determinada cantidad de cloro. Parte del cloro
empleado oxida la materia orgánica del agua (cloro combinado), siendo el
fenómeno más importante de la cloración por el que se forman compuestos
orgánicos clorados a los que genéricamente se les denomina cloro residual
combinado (CRC), de tal forma que:

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Cloro residual total (CRT) = Cloro libre residual (CRL) + Cloro residual
combinado (CRC).
El empleo de cloro, para evitar la proliferación de algas limita su uso como
bactericida, por lo que en la mayoría de los casos se destina, exclusivamente,
al tratamiento de las instalaciones de riego localizado para prevenir la
formación de bacteria y otros microorganismos, además de los sedimentos
formados.
Control preventivo: Para la prevención y control de bacterias y
microorganismos se utiliza hipoclorito de sodio, a la dosis de 15-20 cc/m3 de
agua. También dan buenos resultados tratamiento frecuentes, cada 10 – 15
días, a dosis de 100 – 200 cc de hipoclorito sódico por metro cúbico de agua,
manteniendo la solución clorada en la instalación durante media hora, lavando
posteriormente.
4. ¿Cómo se controla el crystosporidium en el agua?
Como parasito del tracto intestinal, el cryptosporidium es un protozoario cuyo
control se realiza generalmente como lo hacen con los demás de su reino.
El control de los protozoarios en las aguas de abastecimiento se realiza a
través de la sedimentación que se verifica naturalmente en la fuente represada
, de la coagulación y sedimentación en los decantadores de la planta de
tratamiento y de la filtración.
Otro tratamiento posible es el uso de iodo pero en este ultimo hay que tener
mucho cuidado, ya que, su exceso en el agua puede causar hipertiroidismo al
5 mg’mL lo cual sus valores ideales deben ser inferior de 1 mg’L en la red para
evitar la formación de olor y sabor, también se debe tomar en cuenta la
sensibilidad alérgica del iodo a la población.

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5. ¿Que inconvenientes produce el crecimiento de algas en sistemas
de abastecimiento de agua y en zonas de recreación
(cianobacterias)?
En piscinas el problema seria que el agua obtendría una turbiedad verde y
generaría un cierto rechazo sobre los usuarios además que el agua no seria
buena para el aseo. El problema de las algas siempre aparecerá en depósitos
de agua se quiera o no, en pequeños lugares como esquinas o paredes
aparecen algas que hacen que la superficie sea jabonosa y resbaladiza lo cual
produzca un accidente.
ANEXOS
PROBLEMAS MAS COMUNES EN EL USO DE AGUA DE RIEGO BAJO
SISTEMAS DE
ASPERSION Y GOTEO, Y SUS MEDIDAS DE CONTROL
FERTITEC S.A.
a. SALINIDAD:
Problema: Alternación en el movimiento de sales y agua en el suelo. El
proceso de secado de la superficie (cerca al emisor) puede producir una
precipitación química de sales causando un taponamiento (parcial o total)
pero temporal. Control: Se hace en el próximo riego paulatinamente.
b. PRECIPITACION DE FIERRO POR BACTERIAS:
Problema: El cambio de fierro soluble (ferroso) a insoluble (férrico) puede
ocurrir dentro del sistema por acción de varios tipos de bacterias que
producen este tipo de oxidación ocurre hasta en concentraciones de 0.1
ppm de Fe, y el resultado es un precipitado rojo en forma de fango. Control:
El tratamiento en estos casos es la cloración del agua de riego para matar o
inhibir las bacterias, se hace aplicando cloro libre a razón de 1ppm en 30
minutos diarios.
c. PRECIPITACION AZUFRE POR BACTERIAS:

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Problema: Las bacterias pueden producir lodos de azufre orgánico, si el
agua contiene mas 0.1 ppm de sulfuros, produciendo masas algodonosas
blancas filamentosas que pueden bloquear los emisores. El problema
puede agravarse si hay interacción con el hierro. Control: Es similar al caso
anterior.
d. PRECIPITACION QUIMICA DEL HIERRO:
Problema: La solubilidad del hierro esta en función del pH, presión y
temperatura. Dentro del acuífero, el hierro está en forma soluble (ferroso)
pero, cuando el agua está dentro del sistema, particularmente entre riegos,
las condiciones se prestan para la precipitación (férrica), causando la
obstrucción de emisores. Control: Es preventivo, para este fenómeno es la
reducción de pH del sistema; en el proceso de fertirriego se puede lograr.
e. PRECIPITACION DE SALES DE CALCIO:
Problema: La precipitación de sales de calcio de los emisores es común en
algunas aguas y aparece como una película o capa blanca, en la superficie
interior del sistema. Ocurre generalmente cuando las aguas son duras y
cuando hay además de calcio, fósforo dentro del sistema. Control:
Preventivo, haciendo circular las soluciones ácidas dentro del sistema.
Cuando no es posible este proceso, el control puede ser reduciendo el pH
de la solución a menos de 4 en inyección, 5 ppm ácido clorhídrico en el
agua de riego por 10 a 20 minutos.
f. CRECIMIENTO DE ALGAS:
Problema: Las algas pueden desarrollarse dentro del sistema cuando existe
una alta concentración de nitratos y luz: las mismas que pueden obstruir los
emisores. Control: Se hace aplicando sulfato de cobre o cloro a razón d 1-2
ppm en cada caso.
g. PRESENCIA DE SÓLIDOS INSOLUBLES:

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Problema: (Arena fina, Limo y arcilla). Generalmente ocurre cuando, en
reservorio la precipitación no ha sido completa y, en pozos tubulares
cuando existe turbulencia generada por la bomba. En ambos casos, el
tamaño de los filtros de grava, anillo, etc. No detienen el paso de estas
materias. Control: Preventivo, disponiendo de filtros convenientes y
haciendo periódicas limpiezas. El control correctivo será determinado en
tamaño máximo de partículas.
VI. BIBLIOGRAFIA
 Apuntes de procedimiento en laboratorio de medición de
microorganismos – calibración del micrómetro ocular Ing. Jorge Tello
Cebreros.
 Hidrobiología sanitaria: Samuel Branco Murgel.
 Mervin C. Palmer - Editorial Interamericana años 1962 – páginas 8 y 9
 http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtual/Tesis/Basic/Marchand_P_E/discusi
on.htm