1. ANTÍGENOS FEBRILES
AGENTE DE DIAGNÓSTICO
SIGNIFICADO CLÍNICO
La infección causada por microorganismos de diversas especies produce
entre otros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la
fiebre tifoidea causa-d a p o r S a l m o n e l l a t y p h i , S .
e n t e r i t i s , a s í c o m o l a s paratifoideas causadas por S. paratyphi
A y B, y el tifo caus a d o p o r e l g é ne r o Ri cket tsi as . La i nfecci ón por
estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo hu-moral con la
producción de anticuerpos que pueden ser detectados con el antígeno específico.
Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, El antígeno
empleado para la determinación de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual
presenta una reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia
.La reacción de Huddleson es un método serológico que detecta anticuerpos
contra B. abortus, B. melitensis y B.S uis, agentes causales de la brucelosis;
también conocida como fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril
característico que se presenta.
FUNDAMENTO
La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos
y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación
macroscópica.
CONTENIDO
 Tífico “O” -
 Salmonella typhi; Antígeno somático,pH: 6.5 ± 1.0
 Tífico “H” -Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0
 Paratífico “A” - pH: 6.5 ± 1.0
 Paratífico “B” - pH: 6.5 ± 1.0
 Proteus OX-19 - pH: 6.5 ± 1.0
 Brucella abortus - pH: 6.5 ± 1.0

2. Suero control negativo:
Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningún antígeno, por lo que
no muestra ninguna aglutinación con los antígenos en suspensión.
Suero Control Positivo:
Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los antígenos febriles en
una suspensión.
MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS
•Pipetas serológicas
•Placa de Reacción
•Agi tador
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Ob t e ng a s a ng r e ve no s a y s e p a r e e l s ue r o e vi t a nd o l a
hemólisis.
MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté
usando.

3. NOTA:
El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para
comenzar la prueba.
1. Deposi tar en si tios di ferentes de la placa las siguientes cantidades del
suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL
SUERO DEBE ESTARTOTALMENTE CLARO).
2. Agi tar el antígeno a uti lizar para tener una suspensión uni forme.
3 . A ñ a d i r 3 0 μL de la suspensión de antígeno a cada una de las
di ferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas
(el gotero incluido proporciona una gota de 30-40μL).
4. Mezclar el ant ígeno y el suero ut i l i zando un apl i cador diferente
para cada una de las cantidades de suero.
5 . Gi r a r l a p l a c a ma nua lme nt e o ut i l i za nd o un a g i t a d o r
mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.
6. Realizar la lectura uti lizando una fuente de luz di recta y observar
la aglutinación macroscópica.
7. Se recomienda inclui r controles Posi tivo y Negativo.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El grado de aglutinación se registra como sigue:
4 + A g l u t i n a c i ó n d e l 1 0 0 % d e l o s o r g a n i s m o s
3 + A g l u t i n a c i ó n d e l 7 5 % d e l o s o r g a n i s m o s
2 + A g l u t i n a c i ó n d e l 5 0 % d e l o s o r g a n i s m o s
1 + A g l u t i n a c i ó n d e l 2 5 % d e l o s o r g a n i s m o s
- A g l u t i n a c i ó n d e l 0 % d e l o s o r g a n i s m o s
El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una
aglutinación del 50% de microorganismos (2+) Las diluciones del suero en la
prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones para prueba
en tubo como se muestra a continuación.
Volumen del suero titulo
0.08ml 1:20

4. 0.04ml 1:40
0.02ml 1:80
0.01ml 1:160
0.005ml 1:320
MÉTODO DE TITULACIÓN EN TUBO:
Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación suave; prepare una
dilución 1:20 del antígeno a utilizar en solución salina.
1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradi l la para cada
antígeno a probar, marcándolos del 1 al 6 y el tubo7 como control.
2. Añadi r al tubo 1, 0.9 mL de solución salina y 0.5 mL a los 6
tubos restantes.
3. Añadi r 0.1 mL del suero a probar al tubo número 1, mezcle bien y
transfiera 0.5 mL al tubo número 2.
4. Continúe esta operación hasta el tubo número 6, eliminar0.5 mL de esta
dilución. El tubo 7 (Control negativo) tendrá únicamente solución salina.
5. Añadi r 0.5 mL del antígeno di luido 1:20 a cada uno de los 7 tubos.
6. Agi tar bien la gradi lla para mezclar el antígeno y el suero e incubar en
baño de agua. El tiempo y temperatura recomendado es el siguiente.
antígeno temperatura Tiempo de incubación
Tífico “O” 48-50°C 18-24 HRS
Tífico “H” 37°C 2 hrs
s.paratyphi “A”, “B” 48-50°C 2hrs
Brucella abortus 37°C 48hrs
Proteus OX-19 37°C 18-24hrs
7. Después de la incubación, saque la gradi lla que contiene los tubos del
baño y observe la aglutinación. La utilización de una fuente de luz directa contra
un fondo negro dará mejores condiciones para la lectura.
8. Regi st rar los resul tados como si gue :
4 + T o d o s l o s o r g a n i s m o s 1 0 0 % a p a r e c e n
sedimentados en el fondo del tubo y el sobrenadante es totalmente claro.
3 + A p r o x i m a d a m e n t e e l 7 5 % d e l o s o r g a n i s m o s
se encuentran sedimentados y el sobrenadante es ligeramente turbio.

5. 2 + A p r o x i m a d a m e n t e e l 5 0 % d e l o s o r g a n i s m o s
se encuentran sedimentados y el sobrenadante es moderadamente turbio.
1 + A p r o x i m a d a m e n t e e l 2 5 % d e l o s o r g a n i s m o s
se encuentran sedimentados y el sobrenadante es turbio.
Ne g a t i vo No s e o b s e r va a g l ut i na c i ó n y l a s us p e ns i ó n
t ur b i a .
9. Registrar el título del suero en el cual la ultima di lución de una
aglutinación sea 2+.
PRECAUCIONES
1. Todos los sueros por probar deberán estar totalmente claros y
libres de contaminación bacteriana.
2. No cal i ente el suero antes de probar lo.
3. Agi te bien el antígeno antes de uti lizarlo para asegurar una
suspensión uni forme.
4. El antígeno se debe mantener en refrigeración a 2-8ºCcuando no se
utilice.
5 . N o c o n g e l a r . Se recomienda la uti lización de sueros control
Posi tivo y Negativo probados en paralelo con la muestra de suero para asegurar
al analista que el antígeno bacteriano en uso escapas de reaccionar con su
anticuerpo homólogo y mostrar cómo serán los resultados esperados en
muestras de suero positivas y negativas.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Algunos sueros normales pueden dar un ti tulo de 1:20 a1:40 y hasta
1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No
siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.
2. Se pueden produci r reacciones cruzadas de aglutininas debido a
vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir
aglutininas contra antígenos Proteus.
3. En la reacci ón de Huddleson, t í tulos de 1:80 pueden
considerarse ya de significado clínico.

6. Nota:
El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el
laboratorio clínico y el médico, ya quel a e l e v a c i ó n d e l t í t u l o e n
l a m u e s t r a d e s u e r o c o n s i nt oma t o l o g í a r e c i e nt e y l a
mue s t r a d e s ue r o e n f a s e convaleciente indicará la exactitud del
diagnóstico