Este documento describe varios métodos para la identificación de bacterias, incluyendo pruebas bioquímicas, sistemas comerciales, y técnicas de biología molecular. Explica cómo identificar bacterias gram negativas comunes como Salmonella, Shigella, E. coli y otras causantes de enfermedades diarreicas. También cubre métodos para identificar Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Campylobacter jejuni y otros patógenos.

1. Depto.Microbiología
ENCB-IPN Silvia Giono
Laboratorio de Bacteriología
Importancia de las enfermedades infecciosas
sgiono@yahoo.com

3. •Identificación
• Bioquímica
• Serotipificación
•Reporte
• Presuntivo
• A nivel laboratorio
• Definitivo
• Después de enviarlo a
un laboratorio de
referencia

5. • Lineamientos generales
• Identificación y serología de
medios no selectivos.
• Pruebas de sensibilidad.
• Difusión en disco o CIM
• Probar cepas de
referencia
• Selección de
antimicrobianos
• Proporción oportuna de
la información
• Monitoreo constante

6. •Microorganismos
asociados.
• Salmonella
• Shigella
• Escherichia coli
• Aeromonas hydrophila
• Campylobacter
• Yersinia
• Vibrio
• Plesiomonas

7. •SENSIBILIDAD A
ANTIMICROBIANOS

8. • Aerobias
• Anaerobias
• Anaerobias Facultativas
• Microaerofílicas
Clasificación de Bacterias en Base
a Requerimientos de Oxigeno

9. • Aerobias (BNF, Familia
Vibrio)
• Anaerobias facultativas
(Enterobacterias)
• Microarofílicas
(Haemophilus, Neisseria y
Campylobacter)
Identificación de Bacterias Gram Negativas

10. • Tinciones
• Placas (Medios de cultivo)
• Condiciones ambientales
• Pruebas Bioquímicas
Identificación del patógeno
con Pruebas Convencionales

11. • Kits rápidos
• Métodos semiautomatizados
• Pruebas convencionales
(Microorganismos fastidiosos)
• Pruebas serológicas
• Técnicas de Biología
Molecular
Metodología Actual

12. • Deben utilizarse los mismos procedimientos y
medios en los que se basan las tablas.
• Las reacciones presentes en la tabla deben estar
en un intervalo de confianza arriba del 90%
para que sean significativas.
• Las pruebas deben estar dentro de un estricto
control de calidad.
Métodos Convencionales
para Identificación de Bacterias
Para lectura de Pruebas Bioquímicas

13. Factores que dificultan su identificación:
• Bacterias poco frecuentes.
• El personal no esta familiarizado con BNF.
• Algunos BNF desarrollan lentamente.
• Algunos BNF tienen reactividad débil
bioquímicamente.
• Algunos BNF tienen requerimientos especiales
de cultivo.
Bacilos Gram Negativos no Fermentadores
(BNF)

14. Diferenciación de Bacilos Gram Negativos
Aerobios o Facultativos
Bacteria Reacción
A. Kligler
Gas Oxidasa Desarrollo
TCBS
Enterobacteriaceae A/A, A/Alc V - -
Vibrio A/Alc* - + +
Aeromonas A/Alc* V + -
Plesiomonas A/Alc - + -
BNF Alc/Alc - V -

15. Reacciones bioquímicas después de 24 h a 35ºC
Agar kligler
Prueba de oxidasa
Agar TCBS

16. • Fermentación de hidratos de carbono
• Utilización de hidratos de carbono
• Prueba de Indol
• Prueba del Rojo de Metilo
• Prueba de Voges Proskauer
• Descarboxilación de amoniácidos
• Producción de ácido sulfhídrico
• Desaminación de fenilalanina
• Reducción de nitratos
• Reacciones de oxidación-fermentación
Pruebas Bioquímicas

17. Medio de SIM Desc. de aminoácidos Utilización de Citrato
Fenilalanina
desaminasa
Medio de OFUtilización de malonato

18. • Adonitol
• D-Sorbitol
• Myo-Inositol
• Dulcitol
• D-Manitol
• Glucosa
• Lactosa
• L-Arabinosa
• Maltosa
• Sacarosa
• Trehalosa
• D-Xilosa
Fermentación de Hidratos de Carbono

19. • Oxidasa
• Catalasa
• DNAsa
• Ureasa
Pruebas Enzimáticas

20. Pruebas Bioquímicas
K U A L O K O/G O/M O/X C
Burkholderia cepacia

21. Pruebas Bioquímicas

22. • Oxidasa
• Indol (Prueba de la mancha)
• ONPG, Detección de b-galactosidasa
(o-nitrofenil-b-D-galactopiranosido)
• MUG, Detección de b-glucoronidasa
(metilumbeliferil-b-D-glucoronido)
Pruebas de Identificación Rápidas
Para Bacilos Gram negativos

23. • OMP, NGP, Weetaps (Enterobacterias, 8
pruebas enzimaticas, adicionando ureasa)
A partir de colonias en agar:
• El CPS ID 2 (Para IVU, se puede realizar la
prueba de indol, detecta b-glucoronidasa y b-
galactosidasa).
• El Rainbow UTI System (Reac. Cromogénicas
con tiras de papel filtro).
Kits de Identificación Rápidos

24. • E. COLI SCREEN (Carr-Scarborough)
• Lyfo-Kwik OMI (MicroBiologics)
• MUG Disk (Remel Inc)
• MUG Plus (Difco Laboratories)
Estos métodos se basan en el hecho de que
la mayoría de cepas de E. coli son
rápidamente positivas para indol, ONPG
(b-galactosidasa) y MUG (b-glucoronidasa).
Kits de Identificación Rápidos

25. • API 20E (Biomeriux)
• API Rapid 20E
• API NFT
• Enterotube II (BD)
• Minitek (BD)
• Oxi/Ferm II (BD)
• Micro ID (Remel)
• Rapid ID SS/u (Remel)
• Rapid ID ONE (Remel)
• Rapid ID NF/plus
(Remel)
Sistemas de Identificación Comerciales
RAPID ONE
Enterotube II
RAPID NF plus
Minitek
API 20E

26. • BBL Crystal (BD)
• Sistema Sceptor (BD)
• GN Microplate (Biolog)
Sistemas de Identificación Comerciales

27. Sistemas Automatizados
Sensititre ARIS
Vitek 2 Compact 30/60
Phoenix 100
MicroScan
WalkAway 40/96

28. Ventajas:
• Interfase con computadoras.
• Ahorro de tiempo.
• Minimiza errores de transcripción.
• Acceso a funciones computarizadas.
(Suma de resultados, reportes
epidemiológicos, antibiogramas…etc)
Sistemas Automatizados

29. Algunas desventajas:
• En Microorganismos fastidiosos o BNF.
• Microorganismos de lento crecimiento.
• Microorganismos que presentan
reacciones débiles.
• Algunos Microorganismos no están en la
base de datos.
Sistemas Automatizados

30. • Ac inmunofluorescentes para E. coli O157.
• Premier EHEC (Toxina shiga VT1 y VT2).
• InmunoCard STAT E. coli O157 plus (cultivos)
• Detección de Ag de E. coli O157 (Antisuero,
ELISA, aglutinación en latex).
• E. coli ST IEA (ELISA, toxina termoestable,
Denka Seiken Co).
• VET RPLA (Aglutinación en latex, Toxina
Termolábil de E. coli y V. cholerae, Oxoid).
Métodos de Identificación Comercial
para bacterias productoras de Diarrea

31. Después de 3 días
• Fiebre elevada
• Diarrea con sangre
• Dolor abdominal
• Colitis ulcerativa
Complicaciones:
 Artritis reactiva (60%).
 Síndrome Guillain-Barré (38%).
 Síndrome urémico-hemolítico (5%).
Infección por Campylobacter jejuni

32. Tiene forma de espiral o
coma, Gram negativo
Requiere de medios especiales
(antibióticos y factores de
crecimiento)
Atmósfera de 5 - 10% CO2
Temperatura de 42°C
Identificación de Campylobacter jejuni

33. • Cultivo:
Agar CCDA, caldo Preston, 48h. 42 °C.
• Tinción débil al Gram
• Prueba de oxidasa y del Hipurato de
sodio positivas.
• No fermentan ni oxidan los
carbohidratos.
• INDX Campy y Campy Slide (Aglut.
En latex).
• ProSpect Microplate y RIM inmmuno
(Heces).
Identificación de Campylobacter jejuni

34. • Detección de ureasa (Biopsía)
• Cultivo especial a 37 °C, microaerofília
• Detección de Ac IgG, IgA, IgM (ELISA)
• Prueba del aliento (Urea marcada con C13 o C14)
• Detección de DNA o RNAr
Identificación de Helicobacter pylori

35. • Cocobacilos Gram
negativos, oxidasa +
• Biotipos I – VIII
(Urea, Ornitina e
indol, Kilian 1976)
• Serotipos capsulares
a-f
Identificación de Haemophilus influenzae

36. • Requiere de factores
V y X
• Cultivo en agar
sangre de caballo o
agar chocolate +
factor V
Identificación de Haemophilus influenzae

37. Prueba del satelitismo
para H. influenzae
H. influenzae H. Influenzae
Biotipo III Biotipo I
H. parainfluenzae H. aphrophilus H.ducreyi
H. influenzae
XV V
X

38. Identificación de Haemophilus sp
Bacteria Req.
Factor V
Req.
Factor X
Sacarosa Ribosa Xilosa
H. influenzae
Biotipo I-VIII + + - + +
H. aegyptius + + - + -
H. parainfluenzae
Biotipo I-VIII + - + - -
H. ducreyi - + - - -

39. Identificación de Neisseria sp

40. • Diplococos Gram
negativos, oxidasa +
• Requieren de Fe++ y
cisteína
• 5-10% de CO2
• Medios de cultivo:
Thayer Martin, Martin
Lewis, New York City
Identificación de Neisseria sp
N. meningitidis N. gonorrhoeae

41. Identificación de Cocos Gram Negativos
Bacteria OX A sangre T. Martin Glu Lac Mal DNAsa
Neisseria
meningitis
+ - + + - + -
Neisseria
gonorrhoeae
+ - + + - - -
Neisseria
lactamica
+ V + + + + -
Neiserias
comensales
+ + V V - V -
Moraxella
catarrhalis
+ + V - - - +

42. • Método rápido: SSB
(Sol. Salina balanceada
pH=7) + rojo de fenol +
gotas de carbohidratos al
20%, incubar a 35°C y
leer en 4 horas.
• Medio de CTA (Agar
cistina tripticaseina)
carbohidratos al 1%,
rojo de fenol , incubar a
35°C de 24 a 72 horas.
UtiIización Carbohidratos para Neisseria sp
CTR GLU MAL SAC LAC

43. Neisseria sp
N. elongata
N. flavescens
M. catarrhalis

44. Utilización de Carbohidratos
• RIM Haemophilus, RIM Neisseria
• API-NH (bioMerieux, 24h, Neisseria sp, Haemophilus sp y M.
catarrhalis)
• Gonobio test (IAF Production, rápido, N. gonorrhoeae)
• Neisseria –Kwik test (Micro-Bio-Logics, 4h, Neisseria sp)
• API Quad-Ferm+ (bioMerieux, 2h, Neisseria sp y
M. catarrhalis), serie de pozos: control, GLU, MAL, LAC,
SAC, DNAsa y b-lactamasa (Foto de N. gonorrhoeae).
Sistemas comerciales para
Identificación de Haemophilus sp y Neisseria sp

45. Pruebas con enzimas cromogénicas
• BactiCard Neisseria (Remel, 4h, Neisseria sp y
M. catarrhalis)
• Gonochek II (E-Y Laboratories, 30 min,
Neisseria sp y M. catarrhalis)
• Neisstrip (Lab M Ltd Rápido, Neisseria sp)
Sistemas comerciales para
Identificación de Haemophilus sp y Neisseria sp

46. Pruebas inmunológicas:
• Ac fluorescentes test (Syva, N. gonorrhoeae)
• Coaglutinación (Phadebact, Haemophilus
influenzae, N. Meningtidis y N. gonorrhoeae)
• GonoGen I y II test (New Horizons
Diagnostics, N. gonorrhoeae)
• Gonozime (Abbot Laboratories, ELISA,
N. gonorrhoeae)
Sistemas comerciales para
Identificación de Haemophilus sp y Neisseria sp

47. • MicroScan (HIND)
• Vitek (NHI Card)
Sistemas Automatizados para
Identificación de Haemophilus sp y Neisseria sp

48. Utilidad:
• Proporcionan al médico un diagnóstico
presuntivo
• Se puede iniciar un tratamiento antimicrobiano
Frotis de Gram y Coaglutinación

49. MALDI TOF
At present MALDI-TOF MS is unsuitable for the
differentiationofShigellaandE. coli[65],Bordetella
pertussisandB. bronchio-septica,Achromobacter
xylosoxidansandA. ruhlandii, as well asBacteroides
nordiiandB. salyersiae. TheEnterobacter cloacaecomplex
is a group of six very closely related species
(E.asburiae,E. cloacae,E. hormaechei,E. kobei,E.
ludwigii, andE.nimipressuralis) with similar resistance
patterns, which are notyet differentiated