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200 o más macromoléculas comprenden  la maquinaria translacional ¤ RNAs: mRNA, tRNA y rRNA ¤ Proteínas, enzimas, ribosimas ¤ Factores: IF (eIF), EF (eEF), y TF (eTF) ¤ Cofactores como Mg ++ ¤ ATPs, GTPs
 
 
 
 
 
 
 
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Precisión (fidelidad) de una incorporación errónea /3000 aas Para una proteína de ≈ 500/300 aas, la fidelidad representa menos  de un error producido por cada 10 a 6 proteínas sintetizadas.  Velocidad de síntesis:  10 – 20 aas/seg/rib
 
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Factores de Traducción Función Eucariotas Iniciación IF-1, IF-2, IF-3 eIF-1, eIF-1A, eIF-2, eIF-2B, eIF-3, eIF-4A, eIF-4B, eIF-4E, eIF4G, eIF-5 Elongación EF-Tu, EF-Ts, EF-G eEF-1A, eEF-1B, eEF-2 Terminación RF-1, RF-2, RF-3 eRF-1, eRF-3
http://www.biostudio.com/demo_freeman_protein_synthesis.htm IF-3 IF-1 IF-2 GTP IF-2 GTP IF-2 GTP (8-13-pares de bases) Rico en pirimidinas IF-3 IF-1 IF-3 IF-1
El elemento Shine-Delgarno se encuentra en el lado 5' de cada codón iniciador AUG en los mRNAs procarióticos policistrónicos. Este elemento es complementario a las secuencias presentes cercanas al extremo 3' de los 16 S  rRNA del ribosoma procariótico.
IF-2 GTP IF-3 IF-1
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His
 
 
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RF 1  » UAG - UAA RF 2  » UGA - UAA RF 3  » GTP
 
 
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eIF5 : PM. 48.9 kDa. Actividad GTPasa en eIF2  Interacción codón/anticodón entre Met-tRNA i  / AUG mRNA Interactúa con eIF3 eIF5
 
 
 
Selenocisteina
 
Fig.1.Mecanismo de inserción de Sec en eucariotas . El selenocysteil-tRNA(rojo con Sec en amarillo) se muestra en un complejo con EFsec (factor de elongación específico de Sec, azul) y SBP2 (SECIS binding protein 2, verde) y el elemento SECIS (mostrado como una horquilla en negro). El complejo está listo para la donación de selenocysteil-tRNA al sitio A del ribosoma para ser decodificado por UGA (mostrado en el mRNA en negro). Una vez la SectRNA [Ser]Sec  es donada al sitio A, Sec tRNA [Ser]Sec  es transeferido al sitio peptídico y Sec es incorporado al selenopeéptido que se está formando el cual aparece mostrado como bolas en azul y amarillo. El mRNA (mostrado en negro con sus codones de inico y final) está unido a la más pequeña de las dos subunidades del ribosoma y el tRNA no acetilado se muestra dejando al sitio de salida del ribosoma 5
Pirrolisina Proteína de  unión putativa
 
Equivalente a CCA-3’ ataque nucleofílico Unión ester Unión al codón “ Anticodón” Unión al rRNA eRF1 Estructura RNP “ Pretzel-like”
Mitocondria Bacterias UGA y UAG Stop/SeCis Gusanos/Humanos UGA Stop/SeCis
 
No se une  al sitio P
Bloquea sitio A Tetracycline/streptomycin:  unión al 30S – 16S rRNA
Bloquea Peptidil transferasa M - C, Procariotes
Bloquea  Peptidil  transferasa Eucariotes
Error de  lectura Iniciación
Macrólidos:  unión al 50S –  exit tunnel
 
Cloranfenicol  Tetraciclina  Toxina de Difteria  Cicloheximida  Inhibidor  Comentarios  Cloranfenicol  Inhibe la petidil transferasa procariótica  Estreptomicina  Inhibe la iniciación de la cadena peptídico procariótica, también induce a la lectura errónea de mRNA  Tetraciclina  Inhibe la unión del aminoacil-tRNA procariótico a la subunidad pequeña del ribosoma  Neomicina  similar en actividad a la estreptomicina  Eritromicina  inhibe la translocación en procariotes a través de la subunidad grande del ribosom  Ácido Fusidico  similar a eritromicina solamente evitando que EFG se disocie de la subunidad grande  Puromicina  se asemeja a un aminoacil-tRNA, interfiere con la transferencia peptídica dando como resultado la terminación prematura en procariotas y eucariotas  Toxina de Difteria  cataliza la ribosilación-ADP de y la inactivación de eEF-2, el eEF-2 contiene un residuo His modificado conocido como  diftamida , es este residuo el que es el blanco de la toxina de difteria  Residuo de diftamida ADP-ribosilada Ricina  encontrado en habas de ricino, cataliza la ruptura de la subunidad grande de rRNA de los eucariotas  Cicloheximida  inhibe la peptidiltransferasa eucariótica
 

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  • 11.  
  • 12.  
  • 13.  
  • 14.  
  • 15.  
  • 16. tRNA Sec   tRNA Ser
  • 17.  
  • 18.  
  • 20.  
  • 21.  
  • 23.  
  • 25.  
  • 26. Función genética Función enzimática Función translocación DNA mRNA Aminoácidos Código genético Peptidil transferasa Cataliza reacción transpeptidación Elongación cadena peptídica Del ribosoma sobre el mensajero y la unión de los diferentes tRNAs Maquinaria Molecular
  • 28.  
  • 29.  
  • 30.  
  • 31. Ribosome S L E P A
  • 32.  
  • 33. Precisión (fidelidad) de una incorporación errónea /3000 aas Para una proteína de ≈ 500/300 aas, la fidelidad representa menos de un error producido por cada 10 a 6 proteínas sintetizadas. Velocidad de síntesis: 10 – 20 aas/seg/rib
  • 34.  
  • 35. 1 IF 2 EF 3 RF 200 o más macromoléculas comprenden la maquinaria trasduccional mRNA, tRNA/aa, rRNA/proteínas rib Mg++ (5 mM)
  • 36. Factores de Traducción Función Eucariotas Iniciación IF-1, IF-2, IF-3 eIF-1, eIF-1A, eIF-2, eIF-2B, eIF-3, eIF-4A, eIF-4B, eIF-4E, eIF4G, eIF-5 Elongación EF-Tu, EF-Ts, EF-G eEF-1A, eEF-1B, eEF-2 Terminación RF-1, RF-2, RF-3 eRF-1, eRF-3
  • 37. http://www.biostudio.com/demo_freeman_protein_synthesis.htm IF-3 IF-1 IF-2 GTP IF-2 GTP IF-2 GTP (8-13-pares de bases) Rico en pirimidinas IF-3 IF-1 IF-3 IF-1
  • 38. El elemento Shine-Delgarno se encuentra en el lado 5' de cada codón iniciador AUG en los mRNAs procarióticos policistrónicos. Este elemento es complementario a las secuencias presentes cercanas al extremo 3' de los 16 S rRNA del ribosoma procariótico.
  • 41. His
  • 42.  
  • 43.  
  • 44. Gly
  • 45. Gln
  • 46.  
  • 47. RF 1 » UAG - UAA RF 2 » UGA - UAA RF 3 » GTP
  • 48.  
  • 49.  
  • 51. eIF5 : PM. 48.9 kDa. Actividad GTPasa en eIF2  Interacción codón/anticodón entre Met-tRNA i / AUG mRNA Interactúa con eIF3 eIF5
  • 52.  
  • 53.  
  • 54.  
  • 56.  
  • 57. Fig.1.Mecanismo de inserción de Sec en eucariotas . El selenocysteil-tRNA(rojo con Sec en amarillo) se muestra en un complejo con EFsec (factor de elongación específico de Sec, azul) y SBP2 (SECIS binding protein 2, verde) y el elemento SECIS (mostrado como una horquilla en negro). El complejo está listo para la donación de selenocysteil-tRNA al sitio A del ribosoma para ser decodificado por UGA (mostrado en el mRNA en negro). Una vez la SectRNA [Ser]Sec es donada al sitio A, Sec tRNA [Ser]Sec es transeferido al sitio peptídico y Sec es incorporado al selenopeéptido que se está formando el cual aparece mostrado como bolas en azul y amarillo. El mRNA (mostrado en negro con sus codones de inico y final) está unido a la más pequeña de las dos subunidades del ribosoma y el tRNA no acetilado se muestra dejando al sitio de salida del ribosoma 5
  • 58. Pirrolisina Proteína de unión putativa
  • 59.  
  • 60. Equivalente a CCA-3’ ataque nucleofílico Unión ester Unión al codón “ Anticodón” Unión al rRNA eRF1 Estructura RNP “ Pretzel-like”
  • 61. Mitocondria Bacterias UGA y UAG Stop/SeCis Gusanos/Humanos UGA Stop/SeCis
  • 62.  
  • 63. No se une al sitio P
  • 64. Bloquea sitio A Tetracycline/streptomycin: unión al 30S – 16S rRNA
  • 65. Bloquea Peptidil transferasa M - C, Procariotes
  • 66. Bloquea Peptidil transferasa Eucariotes
  • 67. Error de lectura Iniciación
  • 68. Macrólidos: unión al 50S – exit tunnel
  • 69.  
  • 70. Cloranfenicol Tetraciclina Toxina de Difteria Cicloheximida Inhibidor Comentarios Cloranfenicol Inhibe la petidil transferasa procariótica Estreptomicina Inhibe la iniciación de la cadena peptídico procariótica, también induce a la lectura errónea de mRNA Tetraciclina Inhibe la unión del aminoacil-tRNA procariótico a la subunidad pequeña del ribosoma Neomicina similar en actividad a la estreptomicina Eritromicina inhibe la translocación en procariotes a través de la subunidad grande del ribosom Ácido Fusidico similar a eritromicina solamente evitando que EFG se disocie de la subunidad grande Puromicina se asemeja a un aminoacil-tRNA, interfiere con la transferencia peptídica dando como resultado la terminación prematura en procariotas y eucariotas Toxina de Difteria cataliza la ribosilación-ADP de y la inactivación de eEF-2, el eEF-2 contiene un residuo His modificado conocido como diftamida , es este residuo el que es el blanco de la toxina de difteria Residuo de diftamida ADP-ribosilada Ricina encontrado en habas de ricino, cataliza la ruptura de la subunidad grande de rRNA de los eucariotas Cicloheximida inhibe la peptidiltransferasa eucariótica
  • 71.