Revisión de artículo "Inmunogenicidad de Proteínas Terapéuticas" ("Immunogenicity of Protein Therapeutics"), de Anne S. De Groot y David W. Scott.

1. Manuel García Ulloa Gámiz

4. Anticuerpos anti-drogas (ADA’s)
Interferencia vía:
a) Opsonización
b) Neutralización
c) Agregación

5. Proteína
recombinante
Autóloga
Heteróloga
Interferones
Glucagón
Factores de
crecimiento
de colonias
Eritropoyetina
Toxina
botulínica
Antisueros
Factor de
coagulación
VIII

6. Auto-tolerancia
• El sistema inmune normalmente tolera las proteínas propias del
cuerpo.
• Producción de ADA’s (contra proteínas autólogas) = ruptura de
auto-tolerancia.
• Autoinmunidad: Disminución de célullas T reguladoras y aumento
de T efectoras.
Célula T-
efectora
Célula T-
reguladora
Autoinmunidad

7. Factores extrínsecos
involucrados en la producción de
ADA’s

8. “Señales de peligro”
• Contaminación mínima con ADN,
endotoxinas o lípidos.
– Estimulación de TLR’s (T-dependiente o T-
indpendiente) de células B.
• Reacción autoinmune.

9. Arreglos (proteínas de fusión)
• Acompamiento de proteína autóloga a
virus o partículas virales.

10. Agregados
• Proteínas solubles
• Proteínas particuladas:
Posible inducción
de la producción
de ADA’s

11. Endocitosis
• Proteínas cuyo blanco es normalmente
endocitado por células del sistema inmune son
más propensas a ser internalizadas también y
procesadas como antígeno.
*Por ejemplo:
anticuerpos contra
TNF de superficie
son más fácilmente
endocitados que
aquellos contra
TNF soluble.

12. Modificaciones en proteínas
• Homomerización.
• Desnaturalización (parcial o
total) / Replegamiento
alterno.
• Glicosilación alterna.
• Cambios en aminoácidos.
Posible
formación de
nuevos
epítopes.
Adquisición de
antigenicidad

13. Factores dependientes del paciente
• Variación alélica.
*No todos
tenemos las
mismas
proteínas.

14. Lixiviados
Factores
solubles en
tapa de goma
sin revestir
¿Seguro que
está pura,
doctor?
Seh

15. Problemas

16. ADA’s neutralizantes y de acción
cruzada
ADA
neutralizante
ADA de acción
cruzada
+
+
=
=
Pérdida de
actividad del
fármaco
Condición
autoinmune

17. Detección de ADA’s: ELISA
Proteína
autóloga
ADA
Anti IgG

18. Detección de ADA’s: células T
• Cultivar células T en
presencia de supuesto
antígeno.
• Analizar productos
activadores de células B
(citocinas: IL-2, INFg).
• FACS / citometría de
flujo.

19. Otros métodos de detección/predicción
• Ensayos de afinidad:
– Una proteína, muchos alelos de MHC II
– Competencia de proteína con ligando de MHC.
• Búsqueda de epítopes T in silico.
• Ruptura de tolerancia en ratones transgénicos:
– Inserción de gen humano para determinada proteína.
– Aplicación de fórmulas comerciales.
– Observación y evaluación de reacción inmune.
– Productos en los que se ha estudiado: htPA, insulina, INFa2.
– **En el caso del INFa2, agregados producidos por guardado de
producto liofilizado a temperatura ambiente produjeron alta
inmunogenicidad.

20. Estrategias contra la formación de
ADA’s
• Enmascaramiento / camuflaje de
producto:
Glicosilación de los
epítopes conocidos. Pegilación

21. • Fusión con anticuerpos IgG

22. • Remoción de epítopes T conocidos:
deinmunización:
– Riesgo: creación de neo-epítopes.

23. Perpectivas
• Necesidad de aplicar mapeo de epítopes T en
preclínicos antes de empezar clínicos.
• Tomar en cuenta que no todas las células T responden
igual ni a los mismos antígenos.
• ¿Cómo exactamente funciona la inmunidad innata?
• ¿Cómo funciona la señalización de células B?
• ¿Cómo ocurre y se mantiene la auto-tolerancia?
• ¿Cuál es el papel exacto de las células T reguladoras?
• ¿Cómo funciona la autoinmunidad?