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1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
CENTRO DE DESARROLLO DE PRODUCTOS BIÓTICOS
CONTROL BIÓLOGICO
MAESTRÍA EN CIENCIAS EN
MANEJO AGROECOLÓGICO DE PLAGAS Y ENFERMEDADES
PRESENTA:
MARCELO SANTIAGO HERNÁNDEZ
MARZO, 2016.

2. EL USO DE Pseudomonas PARA EL CONTROL BIOLÓGICO INTEGRADO
RESUMÉN
Pseudomonas spp. Se han estudiado durante décadas como organismos modelo para el
control biológico de las enfermedades de las plantas. En la actualidad, hay tres
formulaciones comerciales de Pseudomonas registrados en la Agencia de Protección
Ambiental de los Estados Unidos para la supresión de enfermedades de las plantas, Bio-
Save 10 LP, Bio-Ahorra 11 LP, y BlightBan A506. Bio-Save 10 LP y bio-Save 11 LP,
productos de Soluciones Jet cosecha, Longwood, FL, contienen cepas de Pseudomonas
syringae ESC-10 y ESC-11, respectivamente. Estos productos se aplican en plantas de
empaque para prevenir enfermedades causadas por hongos postcosecha durante el
almacenamiento de los cítricos, frutas de pepita, frutales de hueso, y las patatas. BlightBan
A506, producido por Nufarm Américas, Burr Ridge, IL, contiene P. fluorescens cepa A506.
BlightBan A506 se aplica principalmente a los árboles de peras y manzanas durante la
floración para suprimir el fuego bacteriano enfermedad bacteriana. Combinando BlightBan
A506 con el antibiótico estreptomicina mejora el control del fuego bacteriano, incluso en
zonas con poblaciones resistentes a la estreptomicina del patógeno. BlightBan A506
también puede reducir rojizo frutas y lesiones helada suave. Estos productos de control
biológico que consiste en Pseudomonas spp. Proporcionar moderada a excelente eficacia
frente a múltiples limitaciones de la producción, son relativamente fáciles de aplicar, y que
pueden ser integrados con los productos convencionales para el control de la enfermedad.
Estas características contribuyen a la adopción de estos productos por los productores y
empacadoras.
INTRODUCCIÓN
Para la represión de los patógenos del suelo como Pythium spp., Rhizoctonia solani,
Fusarium oxysporum y. P. aureofaciens Tx1 cepa también fue comercializadopor Sistemas
Ecosoil como Spot-Biofungicida menos. Este producto se destina a su aplicación a través
de sistemas de riego de campos de golf para controlar la mancha de dólar, antracnosis,
moho de la nieve rosa, y las enfermedades causadas por Pythium spp. Aunque ya no está
disponible comercialmente, estos dos productos siguen siendo los bioplaguicidas
registrados con la USEPA.
En 1992, Plant Health Technologies, Latham, CA, registró tres Pseudomonas en sus
productos llamados FrostBan: P. fluorescens cepa 1629RS, P. syringae 742RS, y P.
fluorescens cepa A506. Sólo P. fluorescens cepa A506 está disponible comercialmente y
ahora se vende como BlightBan A506 por Nufarm Americas, Burr Ridge, IL.
Otros dos Pseudomonas, P. syringae cepa ESC-10 y P. syringae cepa ESC-11, se
registraron en 1995 y EcoCiencia Corporation desarrolló estas cepas en la línea de
productos Bio-Save para la represión de enfermedades de postcosecha. Estos productos
se distribuyen ahora por Jet Cosecha Soluciones en Florida.
Bio-Guardar los productos. Bio-Save 10 LP y bio-Save 11 LP se utilizan para la represión
de enfermedades de postcosecha. ESC-10 es una cepa de P. syringae que fue aislado de
la manzana por científicos de EcoCiencia Corporation y es el ingrediente activo en los
productos comerciales se llama Bio-Save 10 LP, Bio-Reserva 100, y Bio-Reserva 1000.

3. Bio-Save 10 LP es eficaz para el control de enfermedades de postcosechade cítricos, frutas
de hueso, manzana y patatas. ESC-11 es una cepa de P. syringae aislado de la manzana
sale por Janisiewicz y Machi (12) y es el ingrediente activo en los productos comerciales
Bio-Save 11 LP y Bio-Reserva 110. La cepa ESC-11 fue originalmente llamado P. syringae
cepa L-59-66; el nombre fue cambiado por EcoCiencia (6,10, 12). Bio-Save 11 LP es eficaz
para el control de enfermedades de postcosecha de las peras y las patatas.
ESC-10 y ESC-11 se asignan a la especie syringae sin una designación patovar; se
consideran cepas saprofitas. En las primeras pruebas, la cepa ESC-11 no provocó
respuesta hipersensible cuando infiltrado en las hojas de tabaco, y no causar la formación
de lesiones en plántulas de pera, o la formación de exudado en un ensayo de fruta de la
pera inmadura. Smilanick et al. Confirmó que ESC-11 no produjo respuesta hipersensible
en hojas de tabaco, pero informó de que ESC-10 fue positivo en este ensayo. El uso de
ensayos de utilización de hidratos de carbono y los análisis de ácidos grasos-GC, se
determinó que las cepas eran distintos y que el ESC-10 estaba más estrechamente
relacionado con una cepa patógena de P. syringae pv. syringae que causa la explosión de
los cítricos . Las cepas ESC-10y ESC-11 no causaron necrosis o lesiones forman la difusión
de los cítricos inoculado, pero a gran inóculo las dosis a las cepas causaron pequeñas
lesiones en la fruta del limón persa. Ambas cepas también causaron lesiones pequeñas en
las hojas de varios cultivares de cítricos. No obstante, en cada ensayo, el daño causado fue
intrascendente y las cepas eran menos virulenta que la cepa patógena que causa la
explosión de cítricos. Llegaron a la conclusión de que estos antagonistas no representaban
una amenaza significativa para los cítricos, brotes, o follaje.
Millones de dólares se pierden cada año a enfermedades de postcosecha de frutas y
verduras. Las pérdidas anuales se estiman en 5 a 20% en los Estados Unidos y 50% de los
cultivos almacenados en los países en desarrollo (11). Pocos productos químicos están
registrados para su aplicación a los consumibles y la resistencia de los patógenos de
desintegración a esos productos químicos se ha convertido en un problema creciente. La
necesidad de medidas de control alternativas condujo al desarrollo de la línea de productos
Bio-Save con ESC-10 y ESC-11. Una revisión integral del control biológico de
enfermedades de postcosecha de la fruta fue publicada recientemente por Janisiewicz y
Korsten.
El control biológico es una estrategia de gestión atractivo para aquellas enfermedades de
postcosecha donde el patógeno infecta durante o después de la cosecha. Muchas
enfermedades de postcosecha de frutas de pepita y cítricos son causadas por patógenos
que requieren una superficie de la planta herido para ganar la entrada e iniciar la infección.
Contactos de frutas con equipos, buques de transporte, y otros frutos durante la cosecha,
la manipulación, el transporte y pueden dar lugar a contusiones, heridas punzantes, tallo,
tirones y abrasiones en superficies de frutas que pueden ser los sitios de infección por
patógenos. Por otra parte, un alto porcentaje de la fruta se coloca en almacenamiento
dentro de un entorno regulado. La temperatura, la humedad relativa y la composición
atmosférica pueden ser controladas de forma muy precisa. Esta combinación de momento
de la infección y un entorno regulado hace que los sistemas de post-cosecha cerca ideal
para la introducción de un agente de control biológico para prevenir la caries. Es posible en
los sistemas de post-cosecha para añadir un agente de biocontrol para el complejo
industrial en necesidad de protección, a una concentración necesaria para la eficacia, y
regulan las condiciones ambientales para mantener la protección.

4. El sistemade manejo de postcosechade frutas antes de su almacenamiento es susceptible
de aplicación de biopesticidas. Las bacterias en los productos BioSave son insensibles a
varios materiales utilizados durante el manejo postcosecha, como difenilamina utilizado
para la protección de escaldado y el imazalil y tiabendazol fungicidas utilizados para la
prevención de la caries. Hay muchas variaciones de cómo se manejan fruta antes del
envasado; en general, las frutas se limpian, ordenan para eliminar las frutas dañadas o
podridas, y luego se envasa en recipientes de almacenamiento. A menudo, las frutas se
limpian por flotando en los tanques de recepción o mediante pulverizadores en línea.
Después de la limpieza, la fruta se enjuaga con agua limpia o tratada con fungicidas. La
mayoría de las frutas se encerado antes de su clasificación o almacenamiento y fungicidas
se combina a menudo con las ceras. Estos tratamientos reducen la magnitud de la
descomposición postcosecha, a menos que los patógenos resistentes a los fungicidas son
frecuentes. Productos biopesticidas como Bio-Save se aplican a los cítricos y frutales de
pepita en el Packline antes de la depilación. Aunque Bio-Save productos se pueden aplicar
a las frutas de pepita (por ejemplo, peras y manzanas) y frutas de hueso como una poción,
encima de la cabeza de pulverización se recomienda para una eficacia óptima debido a la
amplia variación en los protocolos de poción comerciales y de gestión de la calidad del
agua. Para las patatas, Bio-Save se aplica como una ducha de cabeza antes de su
almacenamiento.
Formulación efectiva de agentes de control biológico es una preocupación persistente. Bio-
Save productos se formularon inicialmente en forma de polvos humectables o gránulos
congelados. Ensayos de eficacia preliminares con agentes de control biológico son a
menudo realizados con células bacterianas recogidas de medio de cultivo solidificado; las
células en un producto formulado no pueden comportarse de manera similar. Janisiewicz y
Jeffers encontraron que las células de ESC-11 en un polvo para rociar siempre la misma
dinámica de la población y eficacia de control como las preparaciones de células frescas
en las manzanas. Los Bio-Save productos se comercializaron como concentrados
congelados que contienen 3 x 1011 UFC / g envasada en recipientes parecidos a los
cartones de leche. Actualmente, el producto se formula como células liofilizadas en una
concentración de 9 × 1010 CFU/ g y sealmacena congelado. Los paquetes son más ligeros
y más fáciles de manejar que los concentrados congelados durante el transporte y
almacenamiento. En una planta de empaque, el producto se suspende en agua para
alcanzar concentraciones finales de 3 x 1011 UFC / ml. Se aplica en estas tasas a las frutas
heridos, P. syringae se recupera en aproximadamente 6 × 106 UFC por la herida, que es
adecuada para la protección (JP Pila, datos no publicados). La colonización de las frutas
por estos antagonistas es específico para sitios de la herida. Bull et al. Demostraron que el
ESC-10 y ESC-11 establecen poblaciones similares en las heridas de los cítricos. En las
superficies de frutas no heridos, las poblaciones de estas bacterias se reduzcan por debajo
de detección dentro de 1 a 2 semanas después de la aplicación. En los ensayos
comerciales, las poblaciones en las superficies de frutas no heridos descendieron por
debajo de los límites de detección de horas como resultado de la depilación con cera y
secado proceso (JP Pila, datos no publicados).
Se propone que el mecanismo de control para ser debido a la competencia por los sitios y
los nutrientes en las heridas. ESC-10 y ESC-11 deben ser aplicados a las heridas antes o
poco después de la introducción del patógeno para la eficacia óptima. Si las bacterias se
aplican 24 o más horas después de la inoculación, el control de la enfermedad es menos
eficaz. Al igual que con la mayoría de las bacterias de biocontrol, se necesitan grandes
poblaciones son obligatorios (> 106 CFU por herida) para la eficacia, y las poblaciones
metabólicamente activas del antagonista para lograr la supresión de la enfermedad. El

5. tratamiento de heridas con ESC-11 seguido de tratamiento con estreptomicina, que mató a
la bacteria, resultó en la pérdida de control del moho azul en la manzana. En una
investigación relacionada, la adición de 80 mM de L-asparagina o L-prolina a la preparación
de ESC-11 mejoró significativamente el control biológico del moho azul de manzana. Se ha
propuesto que el aumento de control de la enfermedad se debe a un mayor crecimiento del
antagonista con el suplemento de aminoácidos. Considerando que la competencia es
aceptado como el mecanismo de control de los hongos de pudrición por Bio-Save
productos, Bull et al. (2) encontraron que ESC-10 y ESC-11 produjeron el
lipodepsinonapeptide siringomicina E en cultivo bajo ciertas condiciones en cantidades
suficientes para inhibir el crecimiento de Penicillium digitatum in vitro. Además, la adición
de purificado siringomicina E a las heridas controlado moho verde a niveles similares a la
aplicación de las cepas. Sin embargo, en las frutas tratadas con heridos ESC-10 o ESC-11,
Bull et al. No pudo demostrar que siringomicina E se produce en concentraciones
suficientes para inhibir el crecimiento de patógenos. Siringomicina E u otros antibióticos no
se han detectado en la fruta tratada con ESC-10 o ESC-11. No hay compuestos inhibidores
son producidos por ESC-10 o ESC-11 durante el cultivo en los medios utilizados para la
producción comercial de Bio-Reserva productos (JP Pila, datos no publicados).
En seguir trabajando para determinar los mecanismos de acción, mutantes gacA de cepa
ESC-10 que eran deficientes en la producción de E siringomicina y una proteasa
extracelular se compararon con la cepa de tipo salvaje de la eficacia contra el moho verde
(CA Bull y JL Smilanick, personal comunicación). Mientras que las poblaciones de la herida
de los mutantes gacA y las cepas de tipo salvaje no fueron significativamente diferentes, la
eficacia de control biológico de las cepas mutantes se redujo en aproximadamente 50% en
comparación con el de tipo salvaje ESC-10 cepa. Una proteasa-competente, siringomicina
Edeficient mutante de ESC-11 se generó por mutagénesis intercambio de marcadores; el
mutante E-deficientes siringomicina era igual a la de tipo salvaje ESC-11 cepa en la eficacia
para el control contra el moho verde (CA Bull y JL Smilanick, comunicación personal).
Aunque es posible que siringomicina E contribuye a la supresión de los patógenos de
desintegración en algún nivel, antibiosis no parece ser el principal mecanismo de acción.
La eficacia de control de la caries en los ensayos de patógenos inoculados en cítricos y
frutas de pepita por ESC-10 y ESC-11 se resume en las Tablas 1 y 2. En los cítricos (Tabla
1), ESC-10 o Bio-Ahorra 10 LP superó ESC-11 para el control del moho verde y moho azul.
El control de la caries hongos por ESC-10 en limones era mejor que el control en naranja
(Tabla 1). ESC-11 se utiliza principalmente para el control de la caries en la pera y la
manzana, aunque ESC-10 también proporciona un control significativo de la pudrición en
manzana (Tabla 2). Efectos específicos del sistema principal se observan para el control
de enfermedades de postcosecha en las variedades de pera por ESC-11 (Tabla 2).
Excelente control del moho gris y moho azul fue visto con ESC-11 en Anjou pera
almacenados a temperatura ambiente o en frío, mientras que se obtuvo significativamente
menos control de la enfermedad en Bosc pera con ESC-11.
Los productos Bio-Reserva también se han probado en cultivos que no sean las de las
Tablas 1 y 2. ESC-10 era eficaz contra la podredumbre parda del melocotón causada por
Monilinia fructicola, pero no redujo la podredumbre de Rhizopus melocotón. Bio-Save 10
LP se ha registrado para su uso en cítricos (limón, naranja, pomelo y) para el control de P.
digitatum, P. italicum y Geotrichum candidum; de cerezas para el control de Penicullum y
Botrytis cinerea expansium; en manzanas y peras para el control de P. expansium, B.
cinerea y Mucor piriformis; y en las patatas para el control de F. sambucinum y
Helminthosporium solani. Bio-Save 11 LP se ha registrado para su uso en la patata dulce

6. por el control de Rhizopus stolonifer y por los mismos agentes patógenos de desintegración
en manzana, pera, y la patata como bio-Ahorra 10 LP.
En varios ensayos de laboratorio y comerciales, control de enfermedades por Bio-Save
productos ha demostrado ser independiente del estado de resistencia a los fungicidas del
patógeno (JP Pila, SN Jeffers, y L. Yourman, datos no publicados). Esto era cierto para la
prevención de la caries en los limones con las poblaciones de P. digitatum y P. italicum
resistentes a cualquiera de imazalil o prevención tiabendazol y la decadencia en las
manzanas con las poblaciones de P. expansum resistentes al tiabendazol. En Bosc pera,
ESC-11 proporcionan niveles similares de control de los aislamientos-tiabendazol sensibles
y resistentes de Penicillium expansum (Tabla 2). En los ensayos de empaque comerciales,
el tratamiento de pera Bosc con Bio-Save 11 LP combina con una baja dosis de tiabendazol
(100 ppm) proporcionó control similar para varias desintegraciones al igual que el
tratamiento sólo con tiabendazol a la dosis recomendada (569 ppm). En las plantas de
envasado comerciales con las poblaciones de patógenos resistentes a los fungicidas, la
aplicación de BioSave proporcionó aproximadamente un retorno económico de cinco a uno
(JP Pila, datos no publicados).
Janisiewicz y Korsten presentó un excelente resumen de las estrategias para mejorar el
control biológico de enfermedades de postcosecha de frutas y la incorporación de los
antagonistas con aplicaciones de fungicidas. Infiltración de presión de la manzana con
cloruro de calcio seguido de tratamiento con ESC-11 proporciona un mayor control del
moho azul que cualquier tratamiento aplicado individualmente. El tratamiento térmico o el
tratamiento en frío de las manzanas antes de la inoculación redujeron el número y tamaño
de las lesiones causadas por P. expansum.La aplicación de pseudomonas antes o después
del tratamiento térmico proporciona un control residual de la caries. La combinación de
ESC-10 con carbonato de sodio o bicarbonato de sodio superó las deficiencias de los
tratamientos individuales para el control de moho verde de los cítricos (Tabla 1). Sugirieron
que el agente de control biológico tolerado carbonatos residuales en las heridas y
proporciona protección contra la reinfección. Finalmente, la combinación de ESC-11 con el
Sporobolomyces roseus levadura mejoró el control del moho azul de manzanacomparación
con la de los tratamientos de deformación individuales.
Adopción constante de Bio-Save productos para el control de la caries post-cosecha se ha
producido desde su introducción en los mid1990s. En la actualidad, aproximadamente 1
millón de cajas de cítricos, de 4 a 8 millones de cajas de pera y manzana, aproximadamente
8 millones de orejetas de cereza, y 3 millones de sacos de patatas son tratadas con Bio-
Guarda anualmente. BlightBan A506.
BlightBan A506 es un biopesticida registrada para la represión de los daños por heladas en
cereza, almendra, melocotón, tomate, patata, fresa y frutas de pepita. El uso comercial
principal de BlightBan A506 es para la supresión del fuego bacteriano, lo que se refleja en
el cambio de nombre del producto de FrostBan B a BlightBan A506. Se estima que entre
7.000 y 10.000 libras de ingrediente activo de BlightBan A506 se aplicaron anualmente a
pera y manzana huertos en los Estados Unidos en la década de 1990 y hasta el 30% de la
superficie de huerta en California solamente se trató con tres aplicaciones de A506
(Departamento de Agricultura, Servicio Nacional de Estadísticas agrícolas de Estados
Unidos).

7. El fuego bacteriano es una enfermedad devastadora de peras y manzanas flores y los
brotes causados por el patógeno bacteriano Erwinia amylovora. El patógeno coloniza los
estigmas de las flores como epífita, y luego migra hacia el nectario donde invade los tejidos
del huésped a través de los orificios naturales de las células de secreción de néctar
llamados nectartodos. El patógeno causa la marchitez y necrosis de los tejidos florales y
ramas infectadas. Manejo de la enfermedad se centra en la prevención del crecimiento
epifita del patógeno antes de la infección, como no hay controles químicos son eficaces
después de la invasión de los tejidos. Los productores orgánicos y convencionales pueden
usar cobre o la oxitetraciclina antibióticos (registrada sólo para pera) o la estreptomicina
para suprimir la fase de crecimiento epífitas del patógeno en las flores. El cobre y el
antibiótico oxitetraciclina bacteriostática son sólo parcialmente eficaces para el control de
la enfermedad. La estreptomicina antibiótico bactericida ha sido el producto químico más
eficaz para el control del fuego bacteriano. Por desgracia, el patógeno ha desarrollado
resistencia a la estreptomicina en los estados occidentales y de Michigan. Resistencia a la
estreptomicina junto con aumento de las plantaciones de variedades de manzanas y
portainjertos sensibles al fuego bacteriano han dado lugar a varias epidemias de la
enfermedad en los estados occidentales y de Michigan y millones de dólares en daños a
los huertos. Estos factores aumentan la necesidad de medidas de control de enfermedades
tales como el control biológico.
El ingrediente activo en BlightBan A506 es la bacteria epifita P. fluorescens A506 cepa
(A506). Fue aislado de un árbol de pera en California por S. Lindow en la Universidad de
California, Berkeley. En las pruebas de la huerta, A506 reduce russet fruta por 25 a 40% y
la reducción de lesiones de escarcha de la pera por al menos 50%. En ensayos a gran
escala que dependen de las poblaciones de patógenos indígenas, también se observó que
la incidencia de esta enfermedad en los árboles tratados con A506 se redujo en un 60 a
80%. A partir de estos estudios, A506 surgió como un agente de control biológico potencial
para la supresión de la fruta rojiza, daños por frío, y del fuego bacteriano de pera.
El mecanismo de control del fuego bacteriano de A506 fue aclarada en los estudios
realizados por Wilson y Lindow realizados en las flores en los árboles de pera en macetas.
Demostraron que la A506 es una excelente colonizador de los tejidos florales, el logro de
las poblaciones de más de 106 UFC por flor en estigmas y 105 UFC por flor en los néctares.
E. amylovora logra poblaciones similares a estigmas como epífita, pero es un colono
superior de los nectarios, el desarrollo de las poblaciones de 107 UFC, ya que invade estos
tejidos. Cuando E. amylovora fue co-inoculado con A506, el crecimiento del patógeno no
fue influenciado por el crecimiento de A506. Cuando E. amylovora se inoculó 72 h después
del tratamiento con A506, el crecimiento de patógenos fue suprimido alcanzando sólo 103
UFC por el estigma que es poco probable que resulte en éxito de la infección de los tejidos
florales. Debido A506 no se conoce la producción se requiere un antibiótico y grandes
poblaciones A506 para la supresión del patógeno, Wilson y Lindow concluyeron que el
principal mecanismo de control del fuego bacteriano era la exclusión competitiva. Esta
información es esencial para el desarrollo de estrategias de gestión de base biológica para
el tizón de fuego.
El A506 BlightBan producto comercial está compuesto de células liofilizadas de A506 a una
concentración de 1 × 1010 a 1 × 1011 UFC / g. El material se diluye con agua en
Atomizadores a una concentración de 1 x 107 a 1 x 108 CFU / ml. Se recomiendan varias
aplicaciones de BlightBanA506 durante el período de floración para asegurar la exclusión

8. del patógeno en las flores recién abiertas. La etiqueta del producto recomienda aplicaciones
al inicio de la floración (20% floración), plena floración, y la caída posterior a la floración
pétalo o secundaria a cada fila o cada dos filas de árboles en un huerto. El método de
aplicación fila alternativo presume que la actividad de insectos y factores abióticos se
extenderá el agente de control biológico a los árboles sin fumigarlos en el huerto. En los
primeros estudios, se detectó E. amylovora en los huertos de California en plena floración,
pero no durante la floración temprana. Se recomiendan los aerosoles floración tempranos
de A506 a establecer grandes poblaciones del agente de control biológico antes de la
llegada del patógeno. Por otra parte, frutales de pepita flores son receptivos a la
colonización por bacterias durante aproximadamente 4 días después de la apertura. Si
A506 se establece en una flor, entonces las poblaciones persisten durante varias semanas
durante el desarrollo del fruto. Aplicaciones retardadas de A506 pueden dar lugar a la
colonización menos eficiente de flores mayores por el agente de control biológico. Incluso
si se aplica el agente de control biológico durante la floración temprana, Nuclo et al.
Señalaron que el establecimiento y la colonización pueden fallar. En ensayos posteriores,
Johnson et al. Encontraron que la temperatura y las precipitaciones son factores
importantes que median establecimiento con éxito y el crecimiento de agentes de control
biológico en las flores; las temperaturas medias diarias huerta por encima de 12 ° C condujo
al establecimiento con éxito por A506, mientras que a temperaturas más bajas que las
bacterias no prosperaron. Desarrollaron una decisión de ayuda para los productores para
determinar los tiempos de aplicación óptima basada en estado de floración y el tiempo
previsto.
Como se mencionó anteriormente, la exclusión competitiva se determinó que el mecanismo
de control de la enfermedad mediante el cual A506 proporciona un control del fuego
bacteriano en condiciones de presión ligera a moderada de la enfermedad. Control de
enfermedades por A506 disminuye con la mayor presión de la enfermedad, tales como los
ensayos de campo de patógenos inoculadas. Métodos para mejorar el control de
enfermedades por A506 en condiciones de mayor presión de la enfermedad están en
desarrollo. Por ejemplo, se descubrió que el hierro exógeno induce A506 para producir un
antibiótico potente con actividad contra E. amylovora (41). Hierro disponible en las flores
está presente en concentraciones demasiado bajas para la inducción de la producción de
antibióticos por A506. La combinación de A506 con el FeEDDHA quelato de hierro en 3 mM
proporcionó la bacteria con hierro exógeno y mejoró significativamente el control de
enfermedades. En pruebas de campo de patógenos inoculados, A506 reduce la incidencia
de esta enfermedad en un promedio de 22%, mientras que la combinación de A506 más
FeEDDHA redujo la incidencia de la enfermedad en un 52% (VO Stockwell, JE Loper, y KB
Johnson, datos no publicados). El mejor control del fuego bacteriano obtenido con el co-
aplicación de A506 y FeEDDHA es similar a los niveles obtenidos con otros antagonistas
que producen antibióticos. La práctica de combinar A506 con FeEDDHA ha sido adoptada
por algunos productores de frutas de pepita en Oregon. El descubrimiento del antibiótico
regulado por hierro proporciona otro método para mejorar el control del fuego bacteriano
por BlightBan A506.
Control del fuego bacteriano por BlightBan A506 se puede mejorar aún más por la
integración con la aplicación de antibióticos. A506 se puede aplicar con estreptomicina
debido a que la bacteria es resistente al antibiótico. En los ensayos de huerto a gran escala
con cepas resistentes a la estreptomicina y -sensibles indígenas del patógeno, la
combinación de A506 con antibióticos mejorado significativamente el control de la
enfermedad en comparación con cada tratamiento individual. Lindow et al. Sugirió que un
mejor control A506 con antibióticos mediante la reducción del crecimiento de E. amylovora

9. en las flores después de la erradicación parcial con antibióticos, que pierden la actividad en
las flores después de unos días. Se sugirió que la aplicación del agente de control biológico
puede sustituir algunas aplicaciones de antibióticos, pero como se ha señalado por Epstein
y Bassein, esto no se ha realizado. En una encuesta de cultivadores de pera de California,
se determinó que los productores que utilizan BlightBan A506 aplican el mismo número de
aerosoles antibióticos ya que los productores que no utilizaron BlightBan A506. Esto puede
ser debido a la investigación limitada sobre cómo los umbrales para los sistemas de alerta
de enfermedades u otras ayudas de decisión para aplicaciones de antibióticos pueden ser
modificados para tener en cuenta el uso de agentes de control biológico. Además, mientras
que la estreptomicina puede mezclar en tanque con A506, oxitetraciclina a 200 ppm ai
puede ser perjudicial para el crecimiento de A506. Por lo tanto, la oxitetraciclina se debe
aplicar varios días después de la aplicación de A506, permitiendo de ese modo la bacteria
para establecer poblaciones grandes. En los ensayos recientes de la huerta, la aplicación
de A506 BlightBan seguido de una sola aplicación de oxitetraciclina en la final de la floración
proporciona un mayor control del fuego bacteriano de dos pulverizaciones oxitetraciclina
(VO Stockwell, KB Johnson, y JE Loper, datos no publicados). La inclusión de hierro con el
A506 seguido de oxitetraciclina mejoró aún más el control de enfermedades. Mientras que
BlightBan A506 está bien establecida en los mercados de producción de fruta de pepita en
el oeste de Estados Unidos, estas modificaciones para el uso del producto puede mejorar
el control de la enfermedad para los cultivadores.
RETOS Y PERSPECTIVAS
¿Cuáles son las limitaciones para el uso de Pseudomonas para el control biológico?
Hay varios retos en el avance de un agente de control biológico de un modelo científico a
un producto comercial viable. Entre los retos no técnicos es el proceso de registro con las
agencias reguladoras, tales como la USEPA y agencias federales dentro de cada estado.
Pruebas de seguridad medioambiental Tier I se describen en la sección biopesticida de la
página web de la USEPA. Las pruebas pueden ser una inversión costosa, a menudo
requieren fondos del sector privado para cubrir los costes (5). Cepas de control biológico
prometedores identificados como Burkholderia cepacia (P. cepacia) o cara P. aeruginosa
obstáculos insuperables para el registro. Estas especies abarcan cepas asociadas a
plantas, así como cepas que son patógenos oportunistas de los seres humanos. Hasta que
las pruebas definitivas se desarrollan para distinguir cepas capaces de causar
enfermedades en los seres humanos de los que son inofensivos aislados del medio
ambiente, es poco probable que las cepas de estas especies serán registrados.
Fravel cita la tecnología de formulación de agentes microbianos como un área que requiere
investigación adicional para mejorar la eficacia de las estrategias de control de
enfermedades biológicas. Bacterias no forman esporas, tales como las Pseudomonas, son
sensibles a las tensiones potencialmente encontradas durante la formulación y un
almacenamiento prolongado. Productos de alta titulación se requieren para la rápida
introducción y establecimiento de poblaciones suficientes para afectar el control biológico.
Las células en un producto de alta titulación pueden perder rápidamente la viabilidad
durante el almacenamiento, especialmente en caso de manipulación durante el transporte
o la distribución. En la actualidad, los productos formulados contienen células liofilizadas de
Pseudomonas que deben ser almacenados en congeladores. Una formulación biopolímero
alto título de A506 demostró un buen tiempo de conservación a temperaturas de
refrigeración y una excelente colonización de flores. Este tipo de formulación puede ser más
económico de producir que las células liofilizadas, pero es poco probable que se

10. comercializado. La producción económica de formulaciones de alto título de Pseudomonas
que son Larga conservación a temperatura ambiente es una prioridad de investigación.
La producción y distribución de productos formulados pueden afectar el uso y adopción.
Epstein y Bassein ilustran este punto con el uso de BlightBan A506 en California durante la
década de 1990. Cuando la disponibilidad era limitada debido a la reducción de la
producción, se documentó una disminución correspondiente en el uso de BlightBan A506.
Afortunadamente los productores utilizan el producto de nuevo después de la línea de
productos fue comprado por Nufarm Américas y la producción y distribución estabilizado.
Por último, el agente de control biológico debe tener un nicho de mercado sostenible y el
registro debe asegurarse de que la infraestructura se utiliza efectivamente para enseñar a
los productores y manipuladores de postcosecha mejor manera de utilizar el producto. Las
manifestaciones de personal de extensión universitaria, investigadores, la industria, los
grupos de productos básicos,y consultores de cultivos pueden mejorar la adopción, ilustran
las expectativas razonables del producto, señalar el potencial incompatibilidad con otros
insumos agrícolas, y disminuir la incidencia de fallos para controlar la enfermedad por el
mal uso de bioplaguicidas.
Los factores que contribuyen al éxito de Bio-Save productos y A506 BlightBan. Además de
cumplir con los desafíos mencionados anteriormente, hay varios factores que han llevado
a la comercialización exitosa de Bio-Guarda y BlightBan A506. Ambos productos se aplican
fácilmente a los posibles sitios de infección que utilizan pulverizadores existentes o equipos
de la línea de empaque. Las enfermedades controladas por estos productos tienen sitios
de infección discretos. Respecto a las enfermedades de postcosecha, las heridas creadas
durante la cosecha y el manejo necesitan ser protegidos durante el almacenamiento en
condiciones controladas. Para el tizón de fuego, los estigmas de las flores de manzana y
pera necesitan ser protegidos de la colonización por el patógeno durante el período de
floración que se extiende por sólo unas pocas semanas. Cada producto se utiliza para
controlar una variedad de patógenos. Para Bio-Reserva productos, varios hongos de
pudrición post-cosecha pueden ser controlados en cítricos, frutas de pepita, frutas de
hueso, y tubérculos. BlightBan A506 ofrece un control significativo de esta enfermedad
causada por E. amylovora, rojizo causada por bacterias que producen IAA, y daños por frío
debido a las bacterias activas nucleación de hielo.
Otro factor que contribuye al éxito de estos productos es que se dirigen a los patógenos
para los que pocas alternativas efectivas. Fungicidas para el control de la pudrición post-
cosecha son limitados debido a los productos químicos se aplican directamente a los
consumibles. Para los fungicidas existentes, el desarrollo de la resistencia ha limitado su
efectividad. Para el tizón de fuego, la aparición de resistencia a la estreptomicina en E.
amylovora ha dejado a los productores con pocas opciones para el control eficaz de la
enfermedad. Estos agentes de control biológico también pueden ser de valor en la gestión
del desarrollo de fungicida o resistencia a los antibióticos en los patógenos diana. Un último
factor que contribuye al éxito de estos productos es que son aprobados para su uso en
sistemas de producción orgánica. La aprobación de estos productos para la agricultura
orgánica se abre nichos de mercado adicionales para estos agentes de control biológico.
Anticipamos que otras cepas de Pseudomonas prometedoras dirigidas a nichos de mercado
en las que existen pocas alternativas para el control de la enfermedad se comercializancon
éxito en el futuro.