1. MOLECULAR EPIDEMIOLOGY OF METHICILLIN-
RESISTANT STAPHYLOCOCCUS AUREUS IN
SPANISH HOSPITAL OVER A 4-YEAR PERIOD:
CLONAL REPLACEMENT, DECREASED
ANTIMICROBIAL RESISTANCE, AND
IDENTIFICATION OF COMMUNIT Y- ACQUIRED AND
LIVESTOCK- ASSOCIATED CLONES
Fabíola Menegotto, Sandra Gonzáles-Cabrero, Belén
Lorenzo, África Cubero, Williams Cuervo, María
Purificación Gutiérrez, María Simarro, Antonio Orduña,
Miguel Ángel Bratos
POR: Nataly Giraldo
Camila Jaramillo

2. INTRODUCTION
Genus: Staphylococcus
Gram-positive cocci
Catalase-positive It catalyzes the decomposition of hydrogen
peroxide to water and oxygen
with oxygen
facultative anaerobe
Immobile
without oxygen
They grows fast

3. INTRODUCTION
 Staphylococcus don´t release spores
 They are resistant to adverse environmental conditions
 They are part of the normal microbial flora skin and mucous in
humans

4. INTRODUCTION
Species: aureus
Coagulase-positive is a protein that enables the conversion
of fibrinogen to fibrin
They are heat resistant microorganisms
 Most strains coated by
protein A

5. INTRODUCTION
 Some strains may have mucoide capsule, called slime To
increase its adherence ability and antiphagocytic effect
 The peptidoglycan is about 50% by weight of cell wall
 Colonies are smooth and bright

6. INTRODUCTION
METHICILLIN:
Is a β-lactam antibiotic used in the treatment of bacterial
infections caused by organisms of the genus Staphylococcus. It acts by
inhibiting penicillin-binding proteins (PBPs) that are involved in
the synthesis of peptidoglycan, an essential mesh-like polymer that
surrounds the cell.

7. INTRODUCTION
 Methicillin required administration via intramuscular or
intravenous injection because it was inactivated by gastric acid
in the stomach when taken orally

8. INTRODUCTION
RESISTANT
Is a form of drug resistance whereby some microorganism are able
to survive exposure to one or more antibiotics.
There are 3 types of bacterial resistance:
NATURAL RESISTANCE Generated by different strain mechanism,
independent of antibiotic exposure
ENVIRONMENTAL Generated by exposure to physical and chemical
factors
RESISTANCE
ACQUIRED RESISTANCE Generated by changes in bacterial genome over
time

9. INTRODUCTION
BACTERIAL Depends on its ability to
RESISTANCE mutate and transfer of
genetic information
can become resistant to
Staphylococcus methicillin and other β- through
the expression of a
foreign PBP:
aureus lactam antibiotics
PBP2a
that
making the Is resistant to the
treatment more action of
difficult and methicillin
limited

10. OVERALL
OBJECTIVE
“Identify the changes in molecular epidemiology of methicillin-
resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates from Spanish third-
level hospital between 2005 and 2008, and to correlate the changes
in antibiotic resistance profiles (RPs) with the clonal nature of
MRSA in our institution”

11. MATERIALES Y
MÉTODOS
MUESTRAS CLÍNICAS:
189 MRSA sin repetir fueron obtenidas de muestras
clínicas recolectadas en 2005, 2007 y 2008 en el
Hospital Clínico Universitario Valladolid, España
105 de pacientes 1 por infección 4 de huesos y
con infecciones en 2 por del aparato articulaciones
tejidos blandos y bacteriemia auditivo infectadas
piel
37 por infección 39 por 1 de infección
de puntos infección del del tracto
quirúrgicos tracto urinario
respiratorio

12. MATERIALES Y MÉTODOS
EXAMEN DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
UTILIDAD Para determinar si un
microorganismo, como
el Staphylococcus aureus es
sensible, intermedio o
Elegir el
resistente a un agente
tratamiento mas
antimicrobiano.
efectivo contra la
bacteria

13. MATERIALES Y MÉTODOS
EXAMEN DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
MIC (concentración mínima inhibitoria):
Tubo con la menor concentración de antibiótico que ha inhibido la
bacteria.
Método de dilución de caldo: Muller Hinton
Medio preferido para pruebas de susceptibilidad de organismos
comúnmente aislados, aeróbicos o facultativos de rápido crecimiento.

14. MATERIALES Y MÉTODOS
EXAMEN DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
15 agentes antimicrobianos diferentes fueron diluidos en serie en
caldo Muller-Hinton con suplementación de Ca+2 y Mg.
Ciorofloxacina ,eritromicina ,tobramicina,
gentamicina, mupirocina, ácido fusídico, cloranfenicol,
tetraciclina, rifampicina, trimetoprima/sulfametoxazol,
teicoplanina, linezolida, daptomicina y vancomicina

15. MATERIALES Y MÉTODOS
 El MIC fue determinado al observar la menor
concentración antimicrobial mostrando inhibición o
crecimiento.
 La resistencia a la clindamicina también se detectó
usando test de aproximación de disco.

16. MATERIALES Y MÉTODOS
TIPIFICACIÓN DE SCCmec Y ccrABC:
PCR MÚLTIPLE: «Reacciones que consiguen amplificar
simultáneamente y, en un único tubo, diferentes secuencias
diana, permitiendo la detección e identificación simultánea de
distintos genes de interés…»

17. MATERIALES Y MÉTODOS
TIPIFICACIÓN DE SCCmec Y ccrABC:
La detección de genes de recombinación (ccrA, ccrB, ccrC) en el
elemento de SCCmec fueron realizadas por hibridación a un
conjunto de sondas en una matriz de DNA.

18. MATERIALES Y MÉTODOS
TIPIFICACIÓN DE SECUENCIAS MULTILOCUS
(MLST) Y spa:
MLST: Es una técnica para la caracterización taxonómica de
bacterias y microorganismos. Compara las secuencias de
nucleótidos directamente entre las cepas.

19. MATERIALES Y MÉTODOS
El software Ridom SraphType, versión 1.4, fue usado para el
análisis de los tipos de spa, y los tipos de secuencia (STs) donde
fueron asignados por medio de la base de datos MLST. Por
aplicación del algoritmo goelBURST, los ST’s se agruparon en
complejos clonales diferentes.

20. RESULTADOS
Aislados 189 91% agrupados en:
t067 (49.7%)
t109 (18.5%)
t002 (13.2%)
t008 (6.3%)
t1391 (2.6%)
ST2422 NUEVO
STs identificados ST125
ST5
ST146
ST228 Complejos
ST45 clonales:
ST8 CC5, CC8, C45,
ST239 CC97 y CC121
ST97

21. RESULTADOS
I (19%)
II
TIPOS DE SCCmec III (1%)
IV (80%) IVa (61%)

22. RESULTADOS
Complejo mec=B
crrA
crrB2
Complejo mec=B
crrA/B2
crrA4 y/o crrB4

23. RESULTADOS
ST125- ST125-MRSA-IV/VI
MRSA-IV

24. RESULTADOS
SEPA 2005 2007 2008
ST228 54% 14% 14%
ST125 32% 54% 55%
ST146 11% 11% 21%
ST125-IV/VI Resistentes a eritromicina y ciproflaxina+tobramicina
ST125IV Susceptibles a eritromicina

25. DISCUSSION
AUTHOR OPNION AGREE OR DESAGREE
M. Perez-Vazquez, A. Vindel, “In these studies, it was
C. Marcos, J. Oteo, O. revealed that the ST125-
Cuevas, P. Trincado MRSA-IV clone is currently
the most prevalent in Spain.”
M.L. Amorim, N.A. Faria, “Increase of infections caused
D.C. Oliveira, C. by nonmultiresistant MRSA
Vasconcelos, J.C. Cabeda and carrying SCCmec IV in
A.C. Mendes healthcare institutions was
observed”

26. DISCUSSION
AUTHOR OPINION AGREE OR DESAGREE
E.B. Nannini, E. Murray and “Worldwide, there are
C.A. Arias increasing numbers of reports
regarding heterogeneous
vancomycin-intermediate S.
aureus”
Cuny, F. Layer, B. “Similar ST130 strains have
Strommenger, and W. Witte been isolated from human
infection in the UK, Denmark,
and Germany at low
frequency”

27. PERSONAL CONCLUSION
It is very important this type of study, because
they show the dynamics of transformation over
time MRSA strains that are causing infections
of varying severity

28. PERSONAL CONCLUSION
e
n e mor
be do isks of
should r
this p ossible
Studi es like d y t he
to stu nvironments
fr e quently ospital e
h
i n fe ction in
n
s trains i
b acterial bility to
most f requent ne its
a
mi
Tr acking w s deter
gion allo ion to another
each re m one reg
o
spread fr

29. PERSONAL CONCLUSION
d
s shoul
tibiotic gency,
ce t o an emer ctive
an l
l resist a globa s effe
Ba cteria idered l es .
ons are ment
be c e there tions treat
s c
becau tics to infe
io
antib

30. Mapa Nataly

31. Mapa Camila

32. GRACIAS
THANKS