seminario de biología molecular

1. First description of PVL-positive
methicillin-resistant
Staphylococcus
aureus (MRSA) in wild boar
meat.
Manuela Valencia Botero
U.P.B
3rd semester
Molecular Biology

2. INTRODUCTION

3. Staphylococcus aureus
Generous: staphylococcus
Specie: Aureus
Characteristics:
• Principal agent of hospital infections but were also
described outside hospitals
• Is a pathogenic agent that cause infections of skin and
soft tissue infections, endocarditic, CNS infections and in
the genitourinary tract.
• Is gram positive
• one of the most heat resistant bacteria and salinity
• lives on the skin, skin glands and mucous membranes of
warm-blooded animals
• in 1992 considered the most frequent pathogen in
nosocomial infection and mortality associated with
infection

4. • The staphylococcal food poisoning (SFP) occurs after ingestion of
foods that are contaminated with Staphylococcus aureus.
• People can put the colonies of S. aureus in the food chain with
contant with animal meat, dairy products and salads.
• In Europe most of the MRSA belonged to CC398 and lack factor to
transcribe PVL and staphylococcal enterotoxins causing low
virulence.

5. Methicillin
• Methicillin is a beta-lactam antibiotic used to
treat infections such as Gram positive agents
producing beta-lactamase
• The walls of bacteria contain a lines crossed
between peptidoglycan chains links, methicillin
acts by inhibiting the synthesis of this wall by
competitive inhibition of transpeptidase enzyme
to avoid the formation of these crosslinks

6. Resistence
• Methicillin in 1959 (a semi-synthetic penicillin) was used as an
antimicrobial treatment and in 1961 the first case of resistance was
reported.
• staphylococcus has 3 methods of methicillin resistance:
hyperproduction of beta-lactamase, modification of PBPs and
intrinsic resistance to methicillin.
• Beta-lactamase is an enzyme that breaks the beta-lactam ring of
antibiotics

7. Panton-Valentine leukocidin
(PVL)
• Is one of the major exotoxins of the
staphylococcus aure, its creates pores in the
membranes of infected cells
• PVL is associated with increased virulence of
certain strains of Staphylococcus aureus.
• Is the cause of necrotic lesions involving the
skin or mucosa

8. MRSA
• Methicillin resistant Staphylococcus aureus is a
serious problem, since it is difficult to combat
and easy to acquire. MRSA has the ability to
offer resistance against the antibiotic causing
serious disease.
• Is a matter of concern the MRSA associated to
livestock (LA-MRSA) that affects people that is
related to pigs, poultry, cattle like vets and
farmers, because they are colonized..

9. GENERAL OBJETIVE
The purpose is the detection of MRSA non-CC398
in wild boar meat that encode the PVL. Showing
the probability to obtain diseases with more
severity

10. METODOS

11. Aislamiento
• Por medio de un programa de vigilancia en 2011
• Los staphylococcus de carne de jabalí con marcador de coagulasa
positivo fueron enviados a Alemania para el estudio.
• Se obtuvieron 28 muestras de 7 tiendas.
• La prevalencia fue de MRSA para la carne de jabalí fue del 4.8%

12. Tipificación de los aislamientos
Identificación bacteriana:
• Es la taxonomía bacteriana que nos permite construir
sistemas que permitan la clasificación de las bacterias.
• Aquí se utiliza Familia (géneros relacionadas entre si),
genero ( especies relacionadas entre si), especie ( cepas
relacionadas entre si) y cepa (aislamiento de una especie
en particular)
• Las pruebas deben hacerse con colonias unicas,
procedentes de cultivos puros.

14. • Esta practica se puede llevar a cabo por
medio de métodos convencionales,
semiautomatizados o automatizados.

15. Micro arreglo de DNA
• Superficie solida a la cual se une una colección de fragmentos de
DNA . Sirve para analizar la expresión diferencial de genes es decir
la variabilidad .
• Los aislamientos PVL-positivos se caracterizaron además mediante
un comercialmente disponible kit de microarrays que cubre 333
secuencias blanco que corresponden a aproximadamente 185 genes
distintos y sus variantes alélicas. Esto incluye, genes que codifican
para los determinantes de resistencia a los antibióticos pertinentes y
factores de virulencia. El análisis de los perfiles de matriz basada en
la presencia o ausencia de los genes investigados se realizaron
utilizando el software Bionumerics.

16. Análisis PFGE
• Separación de moléculas de gran tamaño en
función de su capacidad para moverse a través
de los poros de un gel cuando se someten a un
campo eléctrico pulsatil
• Preparación de agarosa para electroforesis en gel
de campo pulsado (PFGE).
• El ADN genómico en los tapones se digirió con
30 U de restricción
• Los fragmentos generados fueron separados
utilizando un 240 sistema

17. Susceptibilidad antimicrobiana
• Los aislamientos fueron probados por
microdilución en caldo según las directrices de CLSI.
• Los 19 antimicrobianos probados fueron cefoxitina,
cloranfenicol , ciprofloxacina, clindamicina,
eritromicina, fusidato, gentamicina, kanamicina,
linezolid, mupirocina, penicilina, quinupristina /
dalfopristina, rifampicina, estreptomicina,
sulfametoxazol, tetraciclina, tiamulina, trimetoprim
y vancomicina.

18. RESULTADOS

19. • De los 28, 20 MRSA estaban relacionados con el CC398, y los otros estaban
distribuidos en otros CC así: CC45 (1), CC93 (1),CC8 (6).
• Estos que no son CC398 están en carne y preparados de carne
• Los datos sobre la presencia de S. aureus y MRSA en el población de animales
salvajes y de caza son escasos hasta el presente
• Los 8 MRSA tuvieron un análisis mas profundo se detectaron genes (Luks-PV y LukF-PV)
para PVL en siete de los ocho aislados analizados
• Al igual que en estados unidos el CC fue el CC8
• Una proporción sorprendentemente alta de los aislados que albergan genes luk-PV
• (7 de 28 aislados; 25,0%)
• El código para CC45 no tenia genes para PVL ni mostro características diferentes de
virulencia

21. • a la kanamicina (tres aislamientos), ciprofloxacina (seis
aislamientos), eritromicina (tres aislamientos),
cefoxitina, y penicilina (todos los siete aislados).
• Ellos fueron asignados a tres diferentes patrones de
resistencia fenotípica.

22. • todos eran fenotípicamente resistente a por lo menos dos
antimicrobianos.
• Albergaban hasta ocho genes de resistencia diferentes.
• Es posible decir que la contaminación se da después de haber pasado
por los humanos pero esto lleva muchos factores que lo afectan para
ser una certeza por lo que se concluye que hay múltiples vías de
entrada a lo largo de la cadena alimentaria
• Es necesario enfatizar que el manejo correcto de la carne en todas
las etapas del procesamiento y cadena de comercialización, de la caza
a la comercialización, es un requisito previo para una alta calidad de
los alimentos .
• MRSA multirresistente que son positivos para PVL en los alimentos
tienen que ser considerados como un peligro más grave para la salud
pública que el típico LA-MRSA

23. DISCUSSION

24. PERSON DISCTHUEORTY ION
TRUE
OR
FALSE
Smith , T.C and Pearson Clonal complex CC398 is the
predominant clone livestock
TRUE
Hanson, B.M
pollution is given after passing for the
humans
FALSE
Atanassova,V
The correct handling of game meat at
all stages of the processing and
marketing chain from hunting to
marketing at retail is a prerequisite for
a high food quality
TRUE
Fall, C High proportion (58.9%) of MRSA
harbouring luk-PV genes compared to
industrialized contries
TRUE

25. PERSONAL CONCLUSION

26. • The result of the investigation with respect to others shows
that if there are patterns that are similar but yet the results
still vary from place to place, showing some environmental
and social factor.
• Is essential the proper handling of meat from the time the
animals are killed until they are put in the kitchen,
interruption in any point in the food chain, produce the
introduction the staphylococcus.
• All new techniques for bacterial differentiation make it more
possible the identification of the different types of resistance
in bacteria and give the opportunity to change treatment in
patients to one more efficient.
• the staphylococci is a major public health problem especially
in the hospitals, is real obligation keep clean and properly
sanitized hospitals to prevent the spread of this highly
infectious bacterial agent, which increasingly shows that can
go a little beyond us.