1. Reacciones de precipitación
• La interacción Ag-Ac puede dar lugar a una red
capaz de ser visualizada como un precipitado.
Grandes complejos inmunes (CI) formados por la
interacción Ag-Ac.
• A medida que la cantidad de Ag agregado aumenta,
la cantidad de precipitado se incrementa hasta
alcanzar un máximo, luego del cual declina.
• Al agregar grandes cantidades de Ag, los CI se
forman en exceso de Ag siendo pequeños.
2.
3. • La reacción de precipitación depende de la
VALENCIA del Ac y del Ag
4. 1- Inmuno Difusión Radial (IDR)
• Permite cuantificar inmunoglobulinas de isotipo o
antígenos solubles presentes en muestras biológicas.
• La técnica se basa en la difusión de la muestra
conteniendo el antígeno a medir en una matriz
semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac
específico.
• La muestra biológica se introduce en los orificios
cilíndricos excavados en el agar y a medida que el
antígeno difunde en forma radial, se alcanza la relación
Ag-Ac que permite la formación precipitados visibles.
• Se mide el radio (R) de los precipitados que es
proporcional a la concentración de antígeno (C).
5.
6. 2- Inmunoelectroforesis (IEF)
• Es una técnica cualitativa que permite la
identificación de diferentes componentes proteicos
presentes en distintas muestras biológicas (suero,
orina, etc) a través de arcos de precipitación.
• La técnica se realiza preferentemente en geles de
agarosa
7.
8. ELISA (Enzime Linked
ImmunoadSorbent Assay)
• La técnica de ELISA utiliza Acs marcados con una
enzima (generalmente la peroxidasa) para poder
visualizar la reacción Ag-Ac.
• Determinación de Ag por ELISA
• El modelo ELISA "Sandwich" directo. El Ac
específico para el Ag de interés, se encuentra
adsorbido en un soporte sólido (placa de petri),
sobre el que se añadirá la muestra biológica.
9. Quedará
capturado en la
placa y será
puesto en
evidencia tras la
adición de otro
Ac específico
conjugado con la
enzima.
Por último, se añade el
substrato que por acción
de la enzima, dará un
producto coloreado que
producirá un color
observable a simple vista
y cuantificable mediante
un espectrofotómetro.
10. Determinación de Acs por ELISA
• ELISA indirecto en donde el Ag de interés se
encuentra adsorbido en la placa de ELISA. Se
pueden utilizar como antígenos, proteínas virales o
bacterianas e incluso virus completos.
• Esta es una de las técnicas de elección para buscar
Acs contra proteínas del virus VIH en sueros de
pacientes.