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Universidad Inca Garcilaso de la Vega
Biotecnologia
OBTENCION DE ACIDO
CITRICO
Q.F. Carlos Chinchay Barragán
Wehmer indicó en 1893 que algunos
hongos (especies de Penicillium)
podían producir ácido cítrico cuando se
desarrollaban en soluciones
azucaradas y sales inorgánicas. En
1923, los hermanos Pfizer logran
obtener ácido cítrico a partir del hongo
Aspergillus Níger y la fermentación del
azúcar.
INTRODUCCION
El ácido cítrico es un ácido orgánico
tricarboxílico (ácido-2-hidroxi-
1,2,3propanotricarboxílico) muy soluble en
agua. Su nombre proviene del latín citrus que
significa limón. Su fórmula química es C6H8O7.
El ácido cítrico y sus sales (los citratos) son
muy utilizados porque no son tóxicos, se
puede manipular de forma segura, fácil,
además son biodegradables.
usos
El acido cítrico se aplica a los
alimentos para incrementar su
sabor, impedir su oxidación y
como conservante.
En la industria farmacéutica se utiliza el
citrato de hierro y el citrato de sodio
como preservante de sangre, o, en la
elaboración de tabletas, pomadas y en
algunas preparaciones cosméticas. En
la industria química el ácido cítrico se
utiliza como reemplazo de polifosfatos,
como agente antiespumante, como
reblandecedor y para el tratamiento de
textiles.
usos
MICROORGANISMOS
El 99% del ácido cítrico mundial es producido por
fermentación con algunas bacterias y hongos. Aspergillus
niger, A. wentii, A. clavatus, Penicillium citrinum y Mucor
piriformis son microorganismos típicos usados en su
producción (Ghassempour et al., 2003).
GHASSEMPOUR, A.; MASHKOURI, N.; AMIRI, A. 2003. Determination of citric acid in
fermentation media by pyrrolyis mass spectrometry. J Anal Appl Pyrrolysis 70: 251-
561.
Ventajas del A. niger
• Producción de gran diversidad de metabolitos
• Alta capacidad de excreción de metabolitos
(proteínas)
• Baja frecuencia de mutación
• Condiciones de cultivo fácilmente ajustables (T,
aireación y agitación)
• Sus productos son considerados seguros por la
FDA para consumo humano y animal
CABEZAS CONIDIALES CABEZAS CONIDIALES MOSTRANDO LAS COLUMNAS
Es importante conocer las características del grupo de Aspergillus
niger para su identificación, las cuales son: cabezas conidiales de
tonos negro a negro grisáceo, negro café, negro purpura o negro
carbón, son globosas, radiadas o divididas formando columnas de
cadena de conidios irregulares o bien definidas.
CARACTERIZACION DEL MICROORGANISMO
HIFAS Y CABEZAS CONIDIALES COLONIAS EN PLACAS PETRI CON ESPORULACION
CARACTERIZACION DEL MICROORGANISMO
Inóculo
El inóculo está constituido por
suspensiones de conidios, las
cuales se preparan tomando
tubos incubados durante cinco
días a 30°C en agar
Sabouraud, adicionándoles 5
ml de una solución estéril al
0,8% de tween 80 a cada uno.
METODO DE OBTENCION
• Preparación del medio
El hongo es cultivado en un medio
estándar que contiene por litro:
190 g de sacarosa, 2,3 g de
NH4NO3, 1,0 g de KH2PO4, 0,3 g
de MgSO4 (Jagnow, 1991).
Se esteriliza en autoclave a 120 °C
por 20 minutos, se ajusta el pH a
2,2
Fermentación
Para la fermentación se emplea cultivo en superficie. Se
inocula 0,5 ml de suspensión de conidios, los erlenmeyer, ya
inoculados se llevan a incubar a 30°C. Se muestrea cada
dos días y se mide biomasa, pH y acido cítrico de cada
erlenmeyer durante 16 días.
La fermentación se lleva a cabo a 150 - 120 rpm. El máximo
de concentración de acido cítrico se alcanza a los 14 días.
METODO DE OBTENCION
Separación del acido cítrico del
sustrato
La separación del ácido cítrico del sustrato se realiza por
precipitación al añadir hidróxido de calcio o cal apagada
(Ca (OH)2) y formar citrato de calcio. Después se añade
ácido sulfúrico que reacciona con el citrato de calcio y lo
hace precipitar en forma de yeso o sulfato cálcico,
permitiendo liberar el ácido cítrico presente.
METODO DE OBTENCION
Celdas primarias de carbón activado
En estas celdas son removidas las impurezas
solubles que producen color a la solución de acido
cítrico y en general sustancias orgánicas contenidas
en el licor. Debido que a lo largo del proceso se
añaden sustancias que aumentan la cantidad de
iones contenidos en la solución de acido Cítrico,
antes de cristalizarlo hay que retirar estos iones
(Ca++ y SO4
=) para estos se usan celdas de resinas
de intercambio iónico.
METODO DE OBTENCION
Cristalización
En este proceso se separan los cristales
formados del líquido saturado que se
denomina licor madre. Este licor se
recircula a la etapa de intercambio iónico
(celdas de carbón) o al tanque de
tratamiento por cal. Los cristales de ácido
cítrico húmedos se redisuelven y se
recristalizan al vacío. Luego pasan a la
centrifuga en donde es eliminado el licor
madre de los cristales formados.
METODO DE OBTENCION
Secado y clasificación
Se realiza en un equipo de lecho fluidizado, que
permite retirar humedad hasta cumplir con las
especificaciones.
Estos cristales son alimentados a un clasificador
con 4 mallas en el interior. Aquí se separan en
tres presentaciones (cristal, granular y granular
fino). Es rechazado cualquier material fuera de los
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  • 1. Universidad Inca Garcilaso de la Vega Biotecnologia OBTENCION DE ACIDO CITRICO Q.F. Carlos Chinchay Barragán
  • 2. Wehmer indicó en 1893 que algunos hongos (especies de Penicillium) podían producir ácido cítrico cuando se desarrollaban en soluciones azucaradas y sales inorgánicas. En 1923, los hermanos Pfizer logran obtener ácido cítrico a partir del hongo Aspergillus Níger y la fermentación del azúcar. INTRODUCCION
  • 3. El ácido cítrico es un ácido orgánico tricarboxílico (ácido-2-hidroxi- 1,2,3propanotricarboxílico) muy soluble en agua. Su nombre proviene del latín citrus que significa limón. Su fórmula química es C6H8O7. El ácido cítrico y sus sales (los citratos) son muy utilizados porque no son tóxicos, se puede manipular de forma segura, fácil, además son biodegradables.
  • 4. usos El acido cítrico se aplica a los alimentos para incrementar su sabor, impedir su oxidación y como conservante.
  • 5. En la industria farmacéutica se utiliza el citrato de hierro y el citrato de sodio como preservante de sangre, o, en la elaboración de tabletas, pomadas y en algunas preparaciones cosméticas. En la industria química el ácido cítrico se utiliza como reemplazo de polifosfatos, como agente antiespumante, como reblandecedor y para el tratamiento de textiles. usos
  • 6. MICROORGANISMOS El 99% del ácido cítrico mundial es producido por fermentación con algunas bacterias y hongos. Aspergillus niger, A. wentii, A. clavatus, Penicillium citrinum y Mucor piriformis son microorganismos típicos usados en su producción (Ghassempour et al., 2003). GHASSEMPOUR, A.; MASHKOURI, N.; AMIRI, A. 2003. Determination of citric acid in fermentation media by pyrrolyis mass spectrometry. J Anal Appl Pyrrolysis 70: 251- 561.
  • 7. Ventajas del A. niger • Producción de gran diversidad de metabolitos • Alta capacidad de excreción de metabolitos (proteínas) • Baja frecuencia de mutación • Condiciones de cultivo fácilmente ajustables (T, aireación y agitación) • Sus productos son considerados seguros por la FDA para consumo humano y animal
  • 8. CABEZAS CONIDIALES CABEZAS CONIDIALES MOSTRANDO LAS COLUMNAS Es importante conocer las características del grupo de Aspergillus niger para su identificación, las cuales son: cabezas conidiales de tonos negro a negro grisáceo, negro café, negro purpura o negro carbón, son globosas, radiadas o divididas formando columnas de cadena de conidios irregulares o bien definidas. CARACTERIZACION DEL MICROORGANISMO
  • 9. HIFAS Y CABEZAS CONIDIALES COLONIAS EN PLACAS PETRI CON ESPORULACION CARACTERIZACION DEL MICROORGANISMO
  • 10. Inóculo El inóculo está constituido por suspensiones de conidios, las cuales se preparan tomando tubos incubados durante cinco días a 30°C en agar Sabouraud, adicionándoles 5 ml de una solución estéril al 0,8% de tween 80 a cada uno. METODO DE OBTENCION
  • 11. • Preparación del medio El hongo es cultivado en un medio estándar que contiene por litro: 190 g de sacarosa, 2,3 g de NH4NO3, 1,0 g de KH2PO4, 0,3 g de MgSO4 (Jagnow, 1991). Se esteriliza en autoclave a 120 °C por 20 minutos, se ajusta el pH a 2,2
  • 12. Fermentación Para la fermentación se emplea cultivo en superficie. Se inocula 0,5 ml de suspensión de conidios, los erlenmeyer, ya inoculados se llevan a incubar a 30°C. Se muestrea cada dos días y se mide biomasa, pH y acido cítrico de cada erlenmeyer durante 16 días. La fermentación se lleva a cabo a 150 - 120 rpm. El máximo de concentración de acido cítrico se alcanza a los 14 días. METODO DE OBTENCION
  • 13. Separación del acido cítrico del sustrato La separación del ácido cítrico del sustrato se realiza por precipitación al añadir hidróxido de calcio o cal apagada (Ca (OH)2) y formar citrato de calcio. Después se añade ácido sulfúrico que reacciona con el citrato de calcio y lo hace precipitar en forma de yeso o sulfato cálcico, permitiendo liberar el ácido cítrico presente. METODO DE OBTENCION
  • 14. Celdas primarias de carbón activado En estas celdas son removidas las impurezas solubles que producen color a la solución de acido cítrico y en general sustancias orgánicas contenidas en el licor. Debido que a lo largo del proceso se añaden sustancias que aumentan la cantidad de iones contenidos en la solución de acido Cítrico, antes de cristalizarlo hay que retirar estos iones (Ca++ y SO4 =) para estos se usan celdas de resinas de intercambio iónico. METODO DE OBTENCION
  • 15. Cristalización En este proceso se separan los cristales formados del líquido saturado que se denomina licor madre. Este licor se recircula a la etapa de intercambio iónico (celdas de carbón) o al tanque de tratamiento por cal. Los cristales de ácido cítrico húmedos se redisuelven y se recristalizan al vacío. Luego pasan a la centrifuga en donde es eliminado el licor madre de los cristales formados. METODO DE OBTENCION
  • 16. Secado y clasificación Se realiza en un equipo de lecho fluidizado, que permite retirar humedad hasta cumplir con las especificaciones. Estos cristales son alimentados a un clasificador con 4 mallas en el interior. Aquí se separan en tres presentaciones (cristal, granular y granular fino). Es rechazado cualquier material fuera de los tamaños estándares, es decir, los terrones y el polvillo. METODO DE OBTENCION
  • 17. RESUMEN DE LA OBTENCION DE ACIDO CITRICO