Este documento describe la cromatografía de gases, incluyendo una introducción a la técnica y sus usos analíticos, una descripción del equipo básico requerido como la fuente de gas, columna, horno y sistemas de detección, y una discusión de diferentes sistemas de introducción de muestras como la inyección en columnas empaquetadas e inyección en columnas capilares.
La cromatografía de gases es una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.
Este documento describe la cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), incluyendo conceptos como la separación de componentes, la eficiencia de la columna, y la cuantificación y detección de analitos. La HPLC permite la purificación, identificación y cuantificación de compuestos mediante el uso de una fase móvil a alta presión y una fase estacionaria de pequeñas partículas. La eficiencia de la columna depende del número de platos teóricos y la altura equivalente de un pl
Cromatografía líquida de alta resolución (2)Jhonás A. Vega
El documento describe la cromatografía líquida de alta resolución. Se introdujo en los años 1960 y ha aumentado su importancia, convirtiéndose en la técnica cromatográfica más empleada. Requiere instrumental especial para trabajar con altas presiones y separar componentes de mezclas complejas de forma cualitativa y cuantitativa.
Cromatografía líquida de alta presión HPLCCindy Forray
Este documento presenta un trabajo práctico sobre cromatografía líquida de alta presión (HPLC). Explica los fundamentos y principios de HPLC, incluyendo los tipos de cromatografía como reparto, fase enlazada, adsorción e intercambio iónico. También describe la instrumentación básica de HPLC como bombas, columnas, detectores y software. Finalmente, resume las características y aplicaciones clave de HPLC en el análisis de alimentos.
Este capítulo describe los tóxicos volátiles y gaseosos más comunes que se analizan en un laboratorio de toxicología. Se clasifican los tóxicos en gaseosos, como el monóxido de carbono y cianhídrico, y volátiles, como alcoholes, cetonas y aldehídos. Se detalla el análisis de monóxido de carbono en sangre, incluyendo su mecanismo de toxicidad, métodos de detección espectroscópicos y ensayos cualitativos como la dilución
Este documento describe diferentes aspectos de la cromatografía de gases. Explica las modalidades de cromatografía, incluyendo la cromatografía gaseosa y la cromatografía líquida. También describe los componentes básicos de un cromatógrafo de gases como el inyector, la columna, el detector y el registro de señal. Explica conceptos como la eficiencia cromatográfica y las fases estacionarias líquidas y sólidas.
El documento trata sobre diferentes métodos de tratamiento de muestras, incluyendo extracciones líquido-líquido, extracciones en fase sólida, extracciones con fluidos supercríticos y extracciones con microondas. Explica los principios básicos de cada método y cómo se aplican para aislar analitos de interés de una mezcla compleja.
La cromatografía de gases es un método de separación física en el que los componentes de una mezcla volátil se distribuyen entre dos fases, una fase estacionaria sólida o líquida y una fase móvil gaseosa. Los tipos principales son la cromatografía gas-sólido y la cromatografía gas-líquido. El físico Keulemans definió originalmente el término cromatografía.
La cromatografía de gases es una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.
Este documento describe la cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), incluyendo conceptos como la separación de componentes, la eficiencia de la columna, y la cuantificación y detección de analitos. La HPLC permite la purificación, identificación y cuantificación de compuestos mediante el uso de una fase móvil a alta presión y una fase estacionaria de pequeñas partículas. La eficiencia de la columna depende del número de platos teóricos y la altura equivalente de un pl
Cromatografía líquida de alta resolución (2)Jhonás A. Vega
El documento describe la cromatografía líquida de alta resolución. Se introdujo en los años 1960 y ha aumentado su importancia, convirtiéndose en la técnica cromatográfica más empleada. Requiere instrumental especial para trabajar con altas presiones y separar componentes de mezclas complejas de forma cualitativa y cuantitativa.
Cromatografía líquida de alta presión HPLCCindy Forray
Este documento presenta un trabajo práctico sobre cromatografía líquida de alta presión (HPLC). Explica los fundamentos y principios de HPLC, incluyendo los tipos de cromatografía como reparto, fase enlazada, adsorción e intercambio iónico. También describe la instrumentación básica de HPLC como bombas, columnas, detectores y software. Finalmente, resume las características y aplicaciones clave de HPLC en el análisis de alimentos.
Este capítulo describe los tóxicos volátiles y gaseosos más comunes que se analizan en un laboratorio de toxicología. Se clasifican los tóxicos en gaseosos, como el monóxido de carbono y cianhídrico, y volátiles, como alcoholes, cetonas y aldehídos. Se detalla el análisis de monóxido de carbono en sangre, incluyendo su mecanismo de toxicidad, métodos de detección espectroscópicos y ensayos cualitativos como la dilución
Este documento describe diferentes aspectos de la cromatografía de gases. Explica las modalidades de cromatografía, incluyendo la cromatografía gaseosa y la cromatografía líquida. También describe los componentes básicos de un cromatógrafo de gases como el inyector, la columna, el detector y el registro de señal. Explica conceptos como la eficiencia cromatográfica y las fases estacionarias líquidas y sólidas.
El documento trata sobre diferentes métodos de tratamiento de muestras, incluyendo extracciones líquido-líquido, extracciones en fase sólida, extracciones con fluidos supercríticos y extracciones con microondas. Explica los principios básicos de cada método y cómo se aplican para aislar analitos de interés de una mezcla compleja.
La cromatografía de gases es un método de separación física en el que los componentes de una mezcla volátil se distribuyen entre dos fases, una fase estacionaria sólida o líquida y una fase móvil gaseosa. Los tipos principales son la cromatografía gas-sólido y la cromatografía gas-líquido. El físico Keulemans definió originalmente el término cromatografía.
Este informe presenta los resultados de un experimento para determinar la curva espectral y la ley de Beer para el permanganato de potasio. Se graficaron las curvas espectrales y de calibración, determinando las longitudes de onda máximas de absorción. La constante de absorción molar del permanganato fue calculada aplicando la ley de Beer, y se realizaron cálculos estadísticos para validar la linealidad de la curva de calibración.
El documento describe los diferentes tipos de equipos de tamizado utilizados a nivel industrial. El tamizado es uno de los métodos más sencillos para la clasificación granulométrica y consiste en pasar el material sucesivamente por una serie de tamices con orificios de diferentes tamaños. Entre los equipos se encuentran los tamices fijos, vibratorios, oscilantes, de vaivén y rotatorios, cada uno con características específicas para ciertas industrias y materiales.
La potenciometría es una técnica electroquímica utilizada para determinar la concentración de especies electroactivas en solución. Puede usarse para determinar iones inorgánicos y orgánicos, constantes de estabilidad de complejos, velocidades de reacción y más. Los electrodos comunes incluyen calomel saturado y plata-cloruro de plata. Los electrodos indicadores pueden ser metálicos, de membrana o de efecto campo. La titulación potenciométrica mide el potencial durante la adición de un
La cromatografía es un método ampliamente utilizado para separar, identificar y cuantificar los componentes de mezclas complejas. Involucra el uso de una fase estacionaria y una fase móvil. Los componentes se separan según su interacción diferencial con las fases y su velocidad de migración. La constante de distribución describe la partición de un soluto entre las fases. La cromatografía es útil para aplicaciones como HPLC y cromatografía de gases.
El documento describe la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), incluyendo su propósito de separar, identificar y cuantificar compuestos orgánicos e inorgánicos. Explica que la HPLC utiliza partículas pequeñas en la columna y una bomba de alta presión para forzar la fase móvil a través de la columna. También describe los componentes clave de un sistema HPLC como la bomba, el inyector, la columna y el detector.
El documento describe el coeficiente de distribución y sus aplicaciones. El coeficiente de distribución permite definir el grado de disociación o asociación de sustancias, las constantes de equilibrio, y se utiliza para procesos de extracción y en farmacología para diseñar fármacos.
Este documento describe los principios y procedimientos de la cromatografía en columna para separar pigmentos vegetales. Explica que los pigmentos como la clorofila y los carotenoides se pueden extraer de las plantas con solventes orgánicos y luego separar usando una columna rellena con sílice, alúmina u otro adsorbente. La muestra se aplica arriba y se eluyen los componentes individuales usando solventes de polaridad creciente. Esto separa los pigmentos basado en sus propiedades de polaridad.
Este documento describe un experimento de laboratorio para sintetizar ciclohexanona a partir de la oxidación de ciclohexanol con dicromato de sodio en medio ácido. El procedimiento incluye la preparación de los reactivos, el montaje del equipo de destilación, los cálculos estequiométricos y el porcentaje de rendimiento obtenido. El objetivo era obtener ciclohexanona y determinar su rendimiento, el cual resultó ser de aproximadamente 19%.
1. El documento describe los principios y aplicaciones de la cromatografía de gases y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). 2. La cromatografía de gases separa los componentes de una mezcla basándose en sus interacciones con la fase estacionaria dentro de una columna, mientras que la HPLC usa una fase móvil líquida de alta presión. 3. Ambas técnicas generan cromatogramas que pueden usarse para identificar compuestos puros o analizar la composición de mezclas
La polarimetría es una técnica que mide la rotación de la luz polarizada al pasar a través de sustancias ópticamente activas. Se basa en medir el ángulo de rotación del plano de polarización de la luz producido por estas sustancias. Se usa para determinar la concentración, contenido y pureza de sustancias como azúcares y compuestos químicos. Los polarímetros constan de un polarizador, un tubo de muestra y un analizador, y miden la rotación producida en grados angulares.
Tópicos esenciales para comprender el uso del triangulo de Gibbs para equilibrio con componentes parcialmente miscibles. Se estructuro de forma sistemática, es decir, se inician con temáticas de miscibilidad de líquidos, regla de las fases de gibbs, lagunas de inmiscibilidad, equilibrio líquido-líquido en sistemas ternarios, triangulo de gibbs, tipos de triángulos de gibbs, métodos de determinación de concentraciones a partir del triángulo y elaboración del mismo.
Este documento describe la estandarización de una técnica combinada de microdifusión y espectrofotometría para cuantificar etanol en muestras problema a través de una curva de calibración. Se prepararon soluciones de etanol de concentraciones conocidas entre 1-5% y se sometieron a microdifusión en celdas improvisadas, luego se midió la absorbancia usando un espectrofotómetro a 400nm para crear la curva de calibración. La técnica demostró ser confiable al cuantificar muestras descon
Determinación de alcoholes por cromatografía de gases.Jhonás A. Vega
Este documento presenta información sobre un curso de análisis instrumental de productos agroindustriales que incluye el uso de cromatografía de gases. Se describen los objetivos del curso, un marco teórico sobre cromatografía de gases y sus aplicaciones, y los principales compuestos volátiles encontrados en fermentaciones como bebidas alcohólicas. Finalmente, se describen brevemente los componentes básicos de un cromatógrafo de gases como el gas portador, el sistema de inyección de muestras y el detector.
El documento describe los conceptos básicos de la cromatografía. Define la cromatografía como un método de separación de componentes que involucra dos fases, una fija y otra móvil. Explica los tipos de interacciones entre las fases, como la adsorción y la absorción. También cubre el análisis cualitativo y cuantitativo mediante cromatografía y clasifica los diferentes métodos cromatográficos según el procedimiento y proceso de desarrollo.
Práctica 7 maneja el refractómetro de acuerdo con las instrucciones de opera...Jesus Martinez Peralta
Este documento describe cómo funciona y operar un refractómetro de acuerdo con las instrucciones. Explica que un refractómetro mide el índice de refracción de una sustancia para determinar su concentración, y fue inventado por Ernst Abbe a principios del siglo XX. Detalla las partes del refractómetro, el procedimiento de calibración y medición, y enfatiza la importancia de mantenerlo limpio para obtener lecturas precisas.
Este documento presenta los procedimientos para preparar y estandarizar soluciones de tiosulfato de sodio 0.1N y yodo 0.1N que se utilizarán en métodos yodométricos de oxidación-reducción. Describe los pasos para pesar los reactivos, disolverlos, aforarlos y titularlos contra una solución de permanganato o tiosulfato de sodio de concentración conocida para determinar la normalidad de las soluciones preparadas.
El documento introduce los conceptos básicos de la cromatografía, incluyendo que separa los componentes de una mezcla debido a la influencia de las fases estacionaria y móvil. Describe los tipos principales de cromatografía según la naturaleza de las fases, e introduce la cromatografía de adsorción, líquido-sólido y en capa fina como ejemplos clave.
Este documento describe los resultados de varios experimentos de cromatografía en capa fina realizados en un laboratorio de química orgánica. Los experimentos determinaron la polaridad de diferentes eluyentes y muestras, la pureza de sustancias, y proporcionaron un criterio parcial de identificación de compuestos en una muestra de medicamento. Los resultados incluyeron la determinación de valores de Rf y conclusiones sobre la selección de eluyentes óptimos.
La turbidimetría y la nefelometría son métodos de análisis cuantitativo que miden la luz transmitida o dispersada por una suspensión. La turbidimetría mide la luz transmitida y se utiliza para concentraciones altas, mientras que la nefelometría mide la luz dispersada y es más sensible para concentraciones bajas. Ambos métodos se usan comúnmente para analizar la calidad del agua y controlar procesos de tratamiento, así como para cuantificar proteínas y otros analitos.
1) El documento describe los componentes y características de la cromatografía de gases, incluyendo sistemas de inyección de muestra, configuraciones de columnas y detectores. 2) Explica que la cromatografía de gases separa componentes de una mezcla volátil mediante su distribución entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida o sólida. 3) Se describen varios métodos de inyección de muestra como inyección directa, bucle de inyección y muestreo de cabeza gaseosa
Este documento describe la cromatografía de gases, incluyendo sus características, equipos disponibles y aplicaciones. La cromatografía de gases se basa en la distribución del analito entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida inmovilizada, lo que permite la separación de componentes volátiles. Los equipos disponibles en el departamento de ingeniería química y servicios técnicos de la universidad incluyen varios cromatógrafos de gases con detectores como el de ionización de llama y el de
Este informe presenta los resultados de un experimento para determinar la curva espectral y la ley de Beer para el permanganato de potasio. Se graficaron las curvas espectrales y de calibración, determinando las longitudes de onda máximas de absorción. La constante de absorción molar del permanganato fue calculada aplicando la ley de Beer, y se realizaron cálculos estadísticos para validar la linealidad de la curva de calibración.
El documento describe los diferentes tipos de equipos de tamizado utilizados a nivel industrial. El tamizado es uno de los métodos más sencillos para la clasificación granulométrica y consiste en pasar el material sucesivamente por una serie de tamices con orificios de diferentes tamaños. Entre los equipos se encuentran los tamices fijos, vibratorios, oscilantes, de vaivén y rotatorios, cada uno con características específicas para ciertas industrias y materiales.
La potenciometría es una técnica electroquímica utilizada para determinar la concentración de especies electroactivas en solución. Puede usarse para determinar iones inorgánicos y orgánicos, constantes de estabilidad de complejos, velocidades de reacción y más. Los electrodos comunes incluyen calomel saturado y plata-cloruro de plata. Los electrodos indicadores pueden ser metálicos, de membrana o de efecto campo. La titulación potenciométrica mide el potencial durante la adición de un
La cromatografía es un método ampliamente utilizado para separar, identificar y cuantificar los componentes de mezclas complejas. Involucra el uso de una fase estacionaria y una fase móvil. Los componentes se separan según su interacción diferencial con las fases y su velocidad de migración. La constante de distribución describe la partición de un soluto entre las fases. La cromatografía es útil para aplicaciones como HPLC y cromatografía de gases.
El documento describe la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), incluyendo su propósito de separar, identificar y cuantificar compuestos orgánicos e inorgánicos. Explica que la HPLC utiliza partículas pequeñas en la columna y una bomba de alta presión para forzar la fase móvil a través de la columna. También describe los componentes clave de un sistema HPLC como la bomba, el inyector, la columna y el detector.
El documento describe el coeficiente de distribución y sus aplicaciones. El coeficiente de distribución permite definir el grado de disociación o asociación de sustancias, las constantes de equilibrio, y se utiliza para procesos de extracción y en farmacología para diseñar fármacos.
Este documento describe los principios y procedimientos de la cromatografía en columna para separar pigmentos vegetales. Explica que los pigmentos como la clorofila y los carotenoides se pueden extraer de las plantas con solventes orgánicos y luego separar usando una columna rellena con sílice, alúmina u otro adsorbente. La muestra se aplica arriba y se eluyen los componentes individuales usando solventes de polaridad creciente. Esto separa los pigmentos basado en sus propiedades de polaridad.
Este documento describe un experimento de laboratorio para sintetizar ciclohexanona a partir de la oxidación de ciclohexanol con dicromato de sodio en medio ácido. El procedimiento incluye la preparación de los reactivos, el montaje del equipo de destilación, los cálculos estequiométricos y el porcentaje de rendimiento obtenido. El objetivo era obtener ciclohexanona y determinar su rendimiento, el cual resultó ser de aproximadamente 19%.
1. El documento describe los principios y aplicaciones de la cromatografía de gases y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). 2. La cromatografía de gases separa los componentes de una mezcla basándose en sus interacciones con la fase estacionaria dentro de una columna, mientras que la HPLC usa una fase móvil líquida de alta presión. 3. Ambas técnicas generan cromatogramas que pueden usarse para identificar compuestos puros o analizar la composición de mezclas
La polarimetría es una técnica que mide la rotación de la luz polarizada al pasar a través de sustancias ópticamente activas. Se basa en medir el ángulo de rotación del plano de polarización de la luz producido por estas sustancias. Se usa para determinar la concentración, contenido y pureza de sustancias como azúcares y compuestos químicos. Los polarímetros constan de un polarizador, un tubo de muestra y un analizador, y miden la rotación producida en grados angulares.
Tópicos esenciales para comprender el uso del triangulo de Gibbs para equilibrio con componentes parcialmente miscibles. Se estructuro de forma sistemática, es decir, se inician con temáticas de miscibilidad de líquidos, regla de las fases de gibbs, lagunas de inmiscibilidad, equilibrio líquido-líquido en sistemas ternarios, triangulo de gibbs, tipos de triángulos de gibbs, métodos de determinación de concentraciones a partir del triángulo y elaboración del mismo.
Este documento describe la estandarización de una técnica combinada de microdifusión y espectrofotometría para cuantificar etanol en muestras problema a través de una curva de calibración. Se prepararon soluciones de etanol de concentraciones conocidas entre 1-5% y se sometieron a microdifusión en celdas improvisadas, luego se midió la absorbancia usando un espectrofotómetro a 400nm para crear la curva de calibración. La técnica demostró ser confiable al cuantificar muestras descon
Determinación de alcoholes por cromatografía de gases.Jhonás A. Vega
Este documento presenta información sobre un curso de análisis instrumental de productos agroindustriales que incluye el uso de cromatografía de gases. Se describen los objetivos del curso, un marco teórico sobre cromatografía de gases y sus aplicaciones, y los principales compuestos volátiles encontrados en fermentaciones como bebidas alcohólicas. Finalmente, se describen brevemente los componentes básicos de un cromatógrafo de gases como el gas portador, el sistema de inyección de muestras y el detector.
El documento describe los conceptos básicos de la cromatografía. Define la cromatografía como un método de separación de componentes que involucra dos fases, una fija y otra móvil. Explica los tipos de interacciones entre las fases, como la adsorción y la absorción. También cubre el análisis cualitativo y cuantitativo mediante cromatografía y clasifica los diferentes métodos cromatográficos según el procedimiento y proceso de desarrollo.
Práctica 7 maneja el refractómetro de acuerdo con las instrucciones de opera...Jesus Martinez Peralta
Este documento describe cómo funciona y operar un refractómetro de acuerdo con las instrucciones. Explica que un refractómetro mide el índice de refracción de una sustancia para determinar su concentración, y fue inventado por Ernst Abbe a principios del siglo XX. Detalla las partes del refractómetro, el procedimiento de calibración y medición, y enfatiza la importancia de mantenerlo limpio para obtener lecturas precisas.
Este documento presenta los procedimientos para preparar y estandarizar soluciones de tiosulfato de sodio 0.1N y yodo 0.1N que se utilizarán en métodos yodométricos de oxidación-reducción. Describe los pasos para pesar los reactivos, disolverlos, aforarlos y titularlos contra una solución de permanganato o tiosulfato de sodio de concentración conocida para determinar la normalidad de las soluciones preparadas.
El documento introduce los conceptos básicos de la cromatografía, incluyendo que separa los componentes de una mezcla debido a la influencia de las fases estacionaria y móvil. Describe los tipos principales de cromatografía según la naturaleza de las fases, e introduce la cromatografía de adsorción, líquido-sólido y en capa fina como ejemplos clave.
Este documento describe los resultados de varios experimentos de cromatografía en capa fina realizados en un laboratorio de química orgánica. Los experimentos determinaron la polaridad de diferentes eluyentes y muestras, la pureza de sustancias, y proporcionaron un criterio parcial de identificación de compuestos en una muestra de medicamento. Los resultados incluyeron la determinación de valores de Rf y conclusiones sobre la selección de eluyentes óptimos.
La turbidimetría y la nefelometría son métodos de análisis cuantitativo que miden la luz transmitida o dispersada por una suspensión. La turbidimetría mide la luz transmitida y se utiliza para concentraciones altas, mientras que la nefelometría mide la luz dispersada y es más sensible para concentraciones bajas. Ambos métodos se usan comúnmente para analizar la calidad del agua y controlar procesos de tratamiento, así como para cuantificar proteínas y otros analitos.
1) El documento describe los componentes y características de la cromatografía de gases, incluyendo sistemas de inyección de muestra, configuraciones de columnas y detectores. 2) Explica que la cromatografía de gases separa componentes de una mezcla volátil mediante su distribución entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida o sólida. 3) Se describen varios métodos de inyección de muestra como inyección directa, bucle de inyección y muestreo de cabeza gaseosa
Este documento describe la cromatografía de gases, incluyendo sus características, equipos disponibles y aplicaciones. La cromatografía de gases se basa en la distribución del analito entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida inmovilizada, lo que permite la separación de componentes volátiles. Los equipos disponibles en el departamento de ingeniería química y servicios técnicos de la universidad incluyen varios cromatógrafos de gases con detectores como el de ionización de llama y el de
La cromatografía de gases es una técnica cromatográfica donde la muestra se volatiliza e inyecta en una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de un gas inerte a través de la columna. La cromatografía de gases consta de un gas portador, un sistema de inyección de muestra, una columna dentro de un horno y un detector. La cromatografía de gases separa los componentes de una mezcla volátil y los identifica.
Este documento presenta una guía metodológica para determinar la emisión de partículas a través de un muestreo isocinético en fuentes fijas. Explica los requisitos básicos y equipos necesarios para realizar un muestreo, como determinar la velocidad del gas y el caudal a través de un tubo Pitot. Además, describe cuatro métodos clave para lograr un muestreo isocinético: 1) localización de puntos de muestreo, 2) determinación de la velocidad del gas y el caud
La cromatografía de gases es una técnica para separar compuestos orgánicos e inorgánicos volátiles y térmicamente estables. Consiste en un gas portador, un regulador de presión, una columna y un detector. Proporciona alta resolución y sensibilidad para el análisis de trazas en pocos minutos. Se usa ampliamente en industrias y para análisis ambientales y forenses.
Este documento describe los principios y componentes básicos de la cromatografía de gases. Explica que la técnica separa componentes de una mezcla basándose en las diferencias en la volatilidad y solubilidad de los solutos. Describe los componentes clave como la fuente de gas, el sistema de inyección, el horno y columna, y los sistemas de detección comunes como el detector de ionización de llama. También cubre temas como los volúmenes de retención, relaciones con la constante de distribución, tipos de
Este documento describe la técnica de espectrofotometría de absorción atómica con horno de grafito (GFAAS). Explica que la técnica convierte elementos en una muestra en átomos o iones por medio de un horno de grafito, permitiendo detectar niveles muy bajos de partes por billón. También describe los procesos de secado, calcinado y atomización de la muestra, así como los tipos de hornos de grafito y formas de controlar interferencias espectrales.
Este documento proporciona instrucciones para el manejo correcto del equipo HPLC Agilent 1200 y su software de control. Explica cada una de las partes del equipo como la bomba, el inyector, el horno y el detector. También describe los pasos para poner el equipo en línea, adecuar y lavar las columnas, incluyendo la sincronización de los reservorios de solventes y la configuración de parámetros como el flujo. El objetivo es indicar el procedimiento para la operación adecuada del equipo HPLC y obtener datos c
La nueva versión de la norma ISO 14644 introduce cambios en los procedimientos de muestreo y planes de vigilancia para salas blancas. Elimina los límites de partículas de 5 μm en ISO 5 y establece nuevos criterios para determinar el número mínimo de puntos de muestreo y los criterios de aceptación. Esto provocará que la industria farmacéutica deba adaptar sus normas a los cambios introducidos en ISO 14644.
FUENTES FIJAS PARA LA IDENTIFICACION DE CONTAMINANTES CRITERIOS QUE PERMITAN EL MUESTREO Y COMPARAION NORMATIVA COLOMBIANA PARA DIFERENTES USOS EN LA CALIDAD DE AIRE Y LA APLICACION DE CONCEPTOS BASICOS QUE PERMITAN INVESTIGAR A PROFUNDIDAD DE LA TEMATICA EN GENERAL La contaminación del aire proviene de una mezcla de miles de fuentes de emisión que van desde chimeneas industriales y vehículos automotores hasta el uso de productos de limpieza y pinturas domésticos. Incluso la vida animal y vegetal puede desempeñar un papel importante en la contaminación del aire. En general, las fuentes de emisión se agrupan en cuatro categorías principales: fuentes fijas, fuentes móviles, fuentes de área, y fuentes naturales; éstas últimas incluyen las fuentes biogénicas y las geogénicas.
Fuentes Fijas
Son aquellas que operan en un punto fijo, es decir, el foco de emisión no se desplaza en forma autónoma en el tiempo; ejemplo de este tipo de fuentes son las chimeneas industriales y doméstica.
En Colombia la resolución 909 de 2008 define fuente fija como la fuente de emisión situada en un lugar determinado e inamovible, aún cuando la descarga de contaminantes se produzca en forma dispersa (MAVDT, 2008).
Las fuentes fijas se pueden clasificar, de acuerdo a la envergadura y distribución espacial de las emisiones, en fuentes fijas puntuales y fuentes fijas difusas o dispersas. Las fuentes fijas puntuales se definen como aquellas que emiten contaminantes al aire por ductos o chimeneas y las fuentes fijas difusas son aquellas en que los focos de emisión de una fuente fija se dispersan en un área, por razón del desplazamiento de la acción causante de la emisión, como por ejemplo, en el caso de las quemas abiertas controladas en zonas rurales (MAVDT, 2008).
Este documento presenta un curso sobre la caracterización de fuentes fijas de contaminación atmosférica. Explica que la determinación de contaminantes requiere equipos adecuados debido a las bajas concentraciones. Describe los métodos de muestreo de emisiones, incluyendo el uso de un muestreador de chimenea y la importancia de realizar el muestreo de forma isocinética. También presenta tres métodos para la localización de puntos de muestreo, incluyendo dividir la sección transversal en áreas iguales y ub
Este documento describe el procedimiento para medir la viscosidad del asfalto utilizando un viscosímetro capilar al vacío a 60°C. Explica los equipos necesarios como el viscosímetro, termómetro, baño y sistema de vacío. Detalla los pasos para preparar la muestra, realizar la medición midiendo el tiempo de flujo a través del capilar, y calcular la viscosidad en poises usando el factor de calibración. Establece criterios para la precisión y repetibilidad de los resultados.
Este documento describe la cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE). Explica que la CLAE utiliza fases estacionarias con partículas muy pequeñas para lograr alta separación de analitos. También describe los componentes básicos de un cromatógrafo de líquidos como la bomba, el inyector, la columna y el detector. Finalmente, explica los diferentes tipos de cromatografía líquida clasificados según la naturaleza de la fase estacionaria.
Este documento describe la cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE). Explica que la CLAE surgió en la década de 1960 para superar las limitaciones de la cromatografía de gases. Luego describe los componentes básicos de un cromatógrafo de líquidos, incluidos los sistemas de suministro de fase móvil, mezcla de fase móvil, inyección e instrumentación. Finalmente, clasifica los diferentes tipos de cromatografía líquida y explica brevemente los mecanismos
La cromatografía de gases es una técnica de separación que involucra una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria. La muestra se inyecta y es transportada a través de una columna por un gas inerte, separándose los componentes basado en su interacción con la fase estacionaria. Tiene aplicaciones en análisis químico y de contaminantes debido a su alta resolución, velocidad y sensibilidad.
Columnas Capilares en Cromatografía de GasesMcAlejo
Existen suficientes diferencias entre el desempeño y la instrumentación relacionadas con las columnas capilares que ameritan que lo que mejor se conoce como CROMATOGRAFÍA DE GASES DE ALTA RESOLUCIÓN reciba un capítulo dedicado.
La cromatografía de gases es una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiliza e inyecta en una columna con una fase estacionaria sólida. La fase móvil gaseosa transporta los analitos a través de la columna donde se separan debido a diferencias en su distribución entre las fases. El documento describe el procedimiento experimental para determinar el contenido de metanol en piscos mediante la relación entre la concentración de metanol y la relación de áreas de los picos cromatográficos.
Este documento describe un método para determinar concentraciones de hidrocarburos aromáticos (benceno, tolueno, etilbenceno, p-xileno, 1,2,4-trimetilbenceno) en aire mediante adsorción en carbón activo y cromatografía de gases. El método implica la captación de muestras de aire en tubos de carbón activo, desorción de los compuestos con sulfuro de carbono, y análisis cromatográfico para cuantificar las concentraciones y evaluar la ex
Este documento describe el proceso analítico de espectrometría de absorción atómica para determinar la concentración de metales en una muestra. La espectrometría de absorción atómica permite medir las concentraciones de más de 70 elementos diferentes en solución o muestras sólidas. El proceso involucra atomizar la muestra en una llama de alta temperatura y medir la absorción de la radiación emitida por una lámpara del elemento que se está analizando. El documento explica los componentes clave del espectrómetro de absorción at
Este documento describe la cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE), incluyendo su historia, proceso, tipos, instrumentación y componentes. La CLAE se utiliza para separar compuestos disueltos mediante la interacción diferencial de cada compuesto con fases móviles y estacionarias. La instrumentación clave incluye bombas, inyectores, columnas, detectores y registradores.
Tendencias en radiologia imagenes de radiologiaguayacan87
Los próximos avances tecnológicos en imagen médica se centrarán en mejorar la calidad de las imágenes para permitir diagnósticos más precisos y tempranos, expandir las capacidades de imagen 3D y 4D, y reducir la radiación de los estudios para hacerlos más seguros para los pacientes.
Este documento resume las principales presiones que están afectando la forma de organizar y gestionar los servicios sanitarios, y algunas formas novedosas de organización que están surgiendo en respuesta. Las presiones incluyen las nuevas tecnologías, los cambios en las preferencias de los usuarios y el incremento de los costes. Algunas formas novedosas de organización son la sustitución de servicios, la creación de centros híbridos, la superespecialización para ganar eficiencia o afrontar la complejidad, y los program
Linac detectores y aceleradores que curanguayacan87
Los aceleradores y detectores utilizados en la investigación de física de partículas han servido durante más de 100 años para la detección y cura de enfermedades. Gracias al progreso en física experimental de partículas, se han desarrollado aceleradores más potentes y sistemas de detección más precisos que, junto con sistemas de cómputo modernos, han permitido aplicaciones médicas previamente impensables. Este documento describe brevemente la historia de estos instrumentos, sus principios de funcionamiento y ventajas para aplicaciones
El documento describe los equipos utilizados en radioterapia externa, incluyendo aceleradores lineales de electrones, unidades de cobalto y equipos de rayos X. Los aceleradores lineales funcionan acelerando electrones mediante ondas electromagnéticas para generar haces de fotones o electrones para el tratamiento. Las unidades de cobalto utilizan una fuente radiactiva de cobalto-60 para generar radiaciones. Estos equipos, junto con simuladores TC, permiten localizar tumores con precisión y administrar radiación de manera focalizada durante el
Medicina nuclear diagnostica pet y spectguayacan87
Este documento trata sobre medicina nuclear diagnóstica, específicamente sobre tomografía por emisión de fotones simples (SPECT) y tomografía por emisión de positrones (PET). Explica los fundamentos físicos de la medicina nuclear como la desintegración nuclear y la interacción de la radiación con la materia. También describe conceptos como radiofármacos, mecanismos de localización, metabolización e instrumentación utilizada como detectores de gas y cámaras de ionización.
Este documento describe los principios físicos de la ecografía, incluyendo el uso de ultrasonido, la reflexión, refracción y atenuación de ondas ultrasónicas. Explica que la ecografía se originó en radiología pero ahora se usa en otras especialidades como atención primaria. Finalmente, proporciona una breve historia del desarrollo de la ecografía y su uso creciente en diferentes campos médicos.
Ecografia dopler principios y aplicacionesguayacan87
El doppler es una herramienta importante para el diagnóstico vascular no invasivo que proporciona información sobre la permeabilidad arterial y venosa, sentido del flujo, presencia de estenosis y fístulas, y estado de la vasculatura distal y proximal. Tiene aplicaciones en la caracterización de tejidos sólidos normales y tumorales. El doppler mide el cambio en la frecuencia del sonido emitido y recibido por el movimiento de los glóbulos rojos, lo que permite calcular la velocidad del flujo sanguíneo. Esto pro
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2. INTRODUCCION
A pesar de que, como ya se ha indicado, la cromatografía es básicamente una técnica de
separación, su gran capacidad para resolver muestras complejas ha conducido a utilizarla cada
vez mas como técnica analítica. Esta utilización, ha conducido al desarrollo de una
instrumentación,queutilizandosiemprelaseparación por elución, puede operar en continuo, con
mayor eficacia en la separación y con un mayor control de las condiciones cromatográficas para
incrementar la reproducibilidad de los resultados.
Entre las técnicas cromatográficas utilizadas con fines analíticos, la cromatografía de
gases es probablemente la técnica de más amplia utilización; ninguna técnica analítica puede
ofrecer su capacidad de separación o su sensibilidad a la hora de analizar compuestos volátiles.
Por otra parte, el hecho de que con esta técnica las mezclas sean separadas en fase gaseosa,
establece los límites de su utilización, que estarán marcados fundamentalmente por la estabilidad
térmica de los compuestos a separar. Por lo general, la utilización de la cromatografía de gases
está restringida a la separación de compuestos con un peso molecular menor de 1000 a una
temperatura máxima de trabajo de aproximadamente 400 EC; dentro de estos límites, como ya
se ha mencionado, la única limitación existente será la estabilidad térmica de la muestra.
Para realizar una separación mediante cromatografía de gases, se inyecta una pequeña
cantidad de la muestra a separar en una corriente de un gas inerte a elevada temperatura; esta
corriente de gas, atraviesa una columna cromatográfica que separará los componentes de la
mezcla por medio de un mecanismo de partición (cromatografía gas líquido), de adsorción
(cromatografía gas sólido) o, en muchos casos, por medio de una mezcla de ambos. Los
componentes separados, emergerán de la columna a intervalos discretos y pasarán a través de
algún sistema de detección adecuado, o bien serán dirigidos hacia un dispositivo de recogida de
muestras.
DESCRIPCION DEL EQUIPO
El esquema general de un cromatógrafo de gases se muestra en la figura 1.
Los componentes fundamentales de un cromatógrafo de gases, son:
.- Fuente de gas.
.- Sistema de inyección.
.- Horno y columna cromatográfica.
3. .- Sistema de detección.
.- Sistema de registro.
Los gases portadores utilizados en cromatografía no afectan, en principio, a la separación
ya que no tienen ninguna influencia sobre los procesos de sorción-desorción o de partición que
se producen en la columna, por lo que no afectan a la selectividad de ésta; de cualquier forma,
los términos de difusión en la fase móvil de la ecuación de Van Deemter, sí dependen de la
naturaleza del gas portador, por lo que las curvas de AEPT (figura 2) serán ligeramente distintas
para cada tipo de gas, lo que a su vez influirá sobre la velocidad óptima de la fase móvil y, en
consecuencia sobre los tiempos de análisis.
Al margen del efecto que la naturaleza del gas portador puede ejercer sobre la altura de
plato, la elección de uno u otro tipo de gas, estará determinada fundamentalmente por el sistema
de detección utilizado. Como fuentes de gas portador se suelen utilizar cilindros de gas
comprimido de elevada pureza, capaces de suministrar una presión de gas adecuada y constante;
es de hacer notar que, en muchos casos, es necesario eliminar las trazas de impurezas que pueda
contener el gas (O2 y H2O fundamentalmente) que pueden afectar al sistema cromatográfico, por
medio de filtros adecuados. El control de la velocidad del gas portador a través de la columna,
se realiza por medio de válvulas que suministran un caudal constante (columnas empaquetadas)
o que mantienen constante la presión en cabeza de columna (sistemas capilares).
Figura 1. Esquema de un cromatógrafo de gases
4. El horno de un cromatógrafo de gases, tiene como misión el mantener la columna
termostatizada a una temperatura fijada con gran precisión (dentro de unos límites de ± 1 EC);
por otro lado, es necesario que el control de termostatización del horno permita incrementar la
temperatura de éste a una velocidad prefijada y constante (para trabajar con técnicas de
temperatura programada). Evidentemente, el primer requisito es fácil de cumplir, pero cuando
se requiere trabajar con temperatura programada, el horno debe cumplir una serie de requisitos
tales como tener escasa inercia térmica (particularmente si es necesario realizar rampas de
temperatura muy rápidas) y poseer un sistema de control de temperatura muy sofisticado que
incluya la posibilidad de programar las posibles variaciones de temperatura del horno así como
los tiempos a los que han de realizarse.
SISTEMAS DE INTRODUCCION DE MUESTRAS
En esencia, los dispositivos de inyección de muestras para cromatografía de gases tienen
la misión de vaporizar la muestra a analizar e incorporarla a la corriente de gas portador que se
dirige hacia la columna. La vaporización e introducción de las muestras en el sistema, debe
realizarse cumpliendo una serie de requisitos:
Figura 2. Curvas de AEPT para tres gases portadores de uso habitual
5. 1.- La vaporización de la muestra debe ser lo más rápida posible.
2.- La vaporización debe realizarse sin discriminar ningún componente de la muestra.
3.- La muestra debe llegar a la columna como una banda lo más fina posible.
Inyectores para columnas empaquetadas.
Lainyeccióndemuestrasencolumnasempaquetadasnopresentaproblemasparticulares;
este tipo de columnas admiten cantidades de muestra relativamente elevadas, y la inyección de
unos cuantos microlitros de muestra no conduce a una merma apreciable de la eficacia de la
columna.
La mayoría de los cromatógrafos comerciales utilizan cámaras de inyección
termostatizadas (figura 3).
Básicamente, un inyector está formado por un bloque metálico, buen conductor del calor,
provisto de un sistema de calentamiento, un termostato capaz de mantener su temperatura
constante y un aislamiento térmico adecuado; en el interior de este horno, se encuentra alojado
el sistema de inyección (figura 3). En éste, el gas portador, previamente calentado, pasa de forma
continua por el sistema; la muestra es inyectada en el interior de la cámara, por medio de una
microjeringa de precisión, a través de un diafragma perforable (septum) con capacidad de
autosellado en el momento en que se retira la aguja; una vez inyectada la muestra, ésta es
vaporizada de forma instantánea, mezclándose con el gas portador en una cámara de mezcla
(“liner”) construida de un material lo más inerte posible (acero inoxidable, níquel, vidrio o
Figura 3. Esquema de un inyector para columnas empaquetadas
6. cuarzo). La muestra, una vez vaporizada, es arrastrada rápidamente por la corriente de gas
portador en dirección a la columna.
El diseño de la cámara de inyección debe ser estudiado minuciosamente. El volumen de
la cámara ha de estar proporcionado con el tipo de columna a utilizar para evitar mezclas
incompletas o bandas de muestra excesivamente anchas; en lo posible, es preciso evitar la
formación de turbulencias en el paso de la cámara de inyección a la columna; se ha de evitar
cuidadosamente la existencia de volúmenesmuertos,nobarridosporlacorriente de gas portador,
dentro de la cámara para evitar deformaciones de labanda de muestra; el volumen existente entre
la cámara de inyección y la columna debe ser el menor posible para evitar ensanchamientos de
banda; la temperatura ha de ser homogénea en toda la cámara de inyección para evitar la
discriminación de alguno de los componentes de la muestra, etc. El sistema de inyección de un
cromatógrafo es un punto extremadamente crítico, y la utilización de una técnica de inyección
inadecuada o una mala elección del sistema de inyección pueden echar a perder completamente
la capacidad de separación de una columna.
Existen algunos tipos de inyectores que permiten utilizar uno de los extremos de la
columna cromatográfica como cámara de mezcla. La introducción de la muestra por medio de
este tipo de inyectores (inyección en columna), está libre de muchos de los problemas
mencionados anteriormente, además de ofrecer ventajas adicionales tales como permitir la
utilización de temperaturas más bajas para la vaporización.
Inyectores para columnas capilares
Lossistemasdeintroduccióndemuestras utilizados para trabajar con columnascapilares,
están basados sobre los mismos principios de los inyectores utilizados para columnas
empaquetadas, por lo que las consideraciones generales sobre ellos siguen siendo válidas.
La diferencia fundamental entre los sistemas que utilizan columnas empaquetadas y los
que utilizan columnas capilares, radica en que la cantidad de muestra que estas últimas pueden
separar es mucho menor que en el primer caso; por otra parte, las columnas capilares son muy
afectadas por los disolventes, de forma que los volúmenes que se pueden inyectar en ellas son
extremadamente bajos. Dado que no existen jeringas capaces de medir con precisión volúmenes
inferiores a 0,1 μl, los inyectores utilizados para trabajar con este tipo de columnas, además
vaporizar la muestra y mezclarla con el gas portador, deberán ser capaces de introducir en la
columna sólo una alícuota de la muestra total inyectada. Existen muchas más técnicas de
inyección para columnas capilares que para columnas empaquetadas, y de entre ellas, se
comentarán a continuación algunas de las más utilizadas.
7. 1.- Inyección con división de muestra
Este tipo de inyección (más conocida como inyección “split”), es el más sencillo de los
que se utilizan en cromatografía capilar. El inyector de “split” (figura 4), consta básicamente de
los mismos elementos que un inyector normal, con la única adición de un sistema de división de
flujo a la salida de la cámara de mezcla. Por medio de este tipo de inyector, el flujo de gas
portador que pasa a través del inyector (y por lo tanto también la muestra vaporizada), se divide
en dos; una parte es introducida en la columna y la otra escapa fuera del sistema a través de una
válvula de aguja que permite regular la proporción de gas que es introducido en la columna.
Dado que en este tipo de inyectores la mayor parte del caudal del gas portador se dirige
hacia la atmósfera, la válvula de “split” dispone de un sistema de apertura y cierre automáticos
para que únicamente permita la salida de gas hacia la atmósfera durante el proceso de inyección.
El control del flujo de gas portador que pasa a través de la columna, se realiza en este tipo de
sistemas manteniendo constante la presión en la cámara de inyección, lo que permite que el
caudal de gas que pasa a través del inyector pueda variar en función de que la válvula de “split”
esté abierta o cerrada.
Los inyectores de este tipo presentan dos inconvenientes; en primer lugar la división de
la muestra da lugar a que las cantidades de analito que son separadas y llegan al detector sean
muy pequeñas, por lo que los límites de detección aumentan bastante, lo que es un gran
inconveniente a la hora de realizar análisis de trazas. Por otra parte, los inyectores de “split”
pueden en algunos casos dar lugar a discriminación entre los componentes de la muestra.
Figura 4. Esquema de un inyector de “split”
8. 2.- Inyección “splitless”
En la técnica de inyección “splitless”, la totalidad de la muestra inyectada es dirigida
hacia la columna, que se mantiene durante la inyección a una temperatura inferior al punto de
ebullición del componente más volátil de la muestra. La totalidad de la muestra inyectada,
lógicamente condensa en la cabeza de la columna, actuando en este caso el disolvente
condensado en la columna a modo de trampa donde se concentran los componentes a analizar
(efecto solvente). Transcurrido un tiempo adecuado, se abre en el inyector una válvula de purga
con el fin de barrer a la atmósfera el disolvente vaporizado que pudiera quedar en el inyector;
al mismo tiempo, se comienza un programa de calentamiento de la columna para realizar el
análisis.
Las utilización de la técnica de “splitless” supone dos importantes ventajas. En primer
lugar, dado que no existe división de muestra, permite un aumento notable de la sensibilidad, por
lo que es muy adecuada para el análisis de trazas. Por otra parte, la reconcentración de la muestra
en la cabeza de la columna origina que las pérdidas de eficacia debidas a una inyección
inadecuada sean de mucha menor importancia que en otras técnicas de inyección.
El diseño de un inyector “splitless” es básicamente el mismo que el del inyector de “split”
(figura 4), pudiéndose realizar la purga del inyector bien a través de la válvula de split, bien a
través de una válvula de purga adicional situada cerca del septum. La mayoría de los inyectores
de “split” comerciales, están diseñados para poder trabajar también en modo “splitless”.
3.- Inyección en columna
Ya se ha comentado que uno de los principales problemas de los sistema de inyección
utilizados con columnas capilares, es la posibilidad de discriminación entre los componentes de
la muestra durante los procesos de vaporización de la muestra y paso de la muestra vaporizada
a la columna. Evidentemente, la única forma de asegurarse de que la muestra que alcanza la
columna se corresponde al 100 % con la muestra inyectada, es realizar la inyección directamente
en la columna.
Los sistemas de inyección en columna (normalmente conocidos por su nombre inglés de
“on-column”), han sido diseñados para posibilitar la introducción de muestras directamente en
el interior de columnas capilares.
Es evidente que la introducción de una muestra por medio de una jeringa directamente
en el interior de una columna capilar (de 0,23 mm de diámetro interno), requiere la utilización
9. de agujas extremadamente finas (suelen utilizarse agujas de sílice fundida de 0,15 mm de
diámetro) que, en consecuencia, son incapaces de perforar un septum; la característica básica de
un inyector “on-column” (figura 5), es la utilización de un sistema de válvulas y tubos de guía
que permitan la introducción en el sistema de una aguja extremadamente fina.
El método de trabajo utilizado en la inyección “on-column” recuerda en alguna forma al
utilizado en la inyección “splitless”; la muestra es introducida directamente en la columna,
manteniéndose ésta a una temperatura inferior alpunto de ebullición del componente más volátil
de la muestra. Una vez introducida la muestra, se inicia el programa de calentamiento de la
columna para proceder a la separación.
La gran ventaja que ofrece el sistema de inyección “on-column”, es que reduce la
discriminación entre los componentes de la muestra prácticamente a cero, obviándose además
todos los problemas que presentan las restantes técnicas de inyección.
Figura 5. Esquema de un inyector “on-column”
10. Otros sistemas de inyección
Hasta el momento, se han descrito los sistemas de inyección utilizados tradicionalmente
en cromatografía de gases, utilizado fundamentalmente para la introducción de muestras en
disolución. Existen además otras técnicas de introducción de muestras, algunas de las cuales son
de especial interés para el análisis de contaminantes ambientales; ejemplos de técnicas de
inyección no convencionales pueden ser:
1.- Válvulas de inyección de gases.
La inyección por medio de válvulas, es muy utilizada para el muestreo automático de
gases en sistemas dinámicos. Las válvulas muestreadoras utilizadas en cromatografía de gases
son del tipo de seis vías y pueden estar provistas de bucles de carga de capacidad variable. El
esquema de funcionamiento de este tipo de válvulas se muestra en la figura 6.
2.- Desorción térmica.
Básicamente, un equipo de desorción térmica (figura 7), consta de un horno donde la
muestra es desorbida de los tubos de muestreo a elevada temperatura bajo una corriente de gas
portador; una vez desorbidos los vapores de la muestra, estos son retenidos en una trampa
criogénica hasta la finalización del proceso de desorción, efectuándose la inyección en este
momento por medio de un calentamiento muy rápido de la trampa fría.
Figura 6. Esquema de una válvula de inyección de gases
11. Debe mencionarse que, al contrario de lo que sucede con la inyección de espacio de
cabeza, la técnica de desorción térmica si permite realizar buenas cuantificaciones, siempre que
se fijen unas condiciones adecuadas para asegurarse de que la desorción de la muestra es total.
3.- Inyectores de espacio de cabeza.
La técnica de análisis por espacio de cabeza es aplicable al análisis directo de
contaminantes volátiles en muestras sólidas o líquidas. El fundamento de esta técnica consiste
en analizar una alícuota de la atmósfera que se encuentra en contacto con la muestra con el fin
de determinar en ella la fracción vaporizada de los componentes que se encuentra en equilibrio
con la muestra sólida o líquida.
Para realizar un análisis por medio de esta técnica, la muestra se introduce en un vial
herméticamente cerrado y se somete a una temperatura previamente fijada durante un tiempo
suficiente para que las distintas fases de los compuestos a analizar alcancen el equilibrio, es
decir, hasta que la presión parcial de cada componente en la atmósfera del vial sea igual a su
presión de vapor a la temperatura de trabajo.
En esencia, un analizador de espacio de cabeza consta de un horno, convenientemente
termostatizado, donde se mantienen las muestras a una temperatura generalmente muy elevada,
y de un sistema de muestreo capaz de inyectar en el cromatógrafo una alícuota del vapor de
generado por la muestra que contiene el vial. En la figura 8, se muestran dos tipos de sistemas
Figura 7. Esquema de un inyector de desorción térmica
12. de muestreo: una jeringa automática termostatizada un sistema de desplazamiento por
presurización.
DETECTORES
Una vez que los componentes de la muestra han sido separados por la columna, se hace
preciso el disponer a la salida de ésta de un sistema de detección, capaz de señalar la elución de
un componente de la muestra y ofrecer, al mismo tiempo, una señal proporcional a la cantidad
de substancia que pasa a través de él.
Figura 7. Sistemas de inyección de espacio de cabeza
13. Los detectores utilizados en cromatografía de gases son de tipo diferencial, no ofrecen
señal cuando pasa por ellos sólamente el gas portador y responden ante alguna propiedad que
pueda variar cuando éste se encuentra mezclado con alguna substancia eluida de la columna.
Parámetros característicos de un detector
Señal del detector
Como ya se ha dicho, el detector mide una propiedad que diferencia el gas portador de
la mezcla gas portador/substancia eluida. El cambio medido por el detector, denominado señal
(S), es proporcional a la magnitud de la propiedad a la que responde (a), a una constante propia
del diseño del detector (k) y al número de moléculas de la substancia eluida que en un momento
dado están presentes en el detector (N); la expresión de la señal del detector será:
S = k a N
Evidentemente, la señal ofrecida por el detector en un momento dado, será la suma de
las señales de cualquier substancia eluida, del gas portador y de las impurezas de éste:
St = Sg + Si + S1 + S2 + ....
La señal medida por el detector en ausencia de substancias eluidas, se denomina señal
de fondo del detector.
Sensibilidad
La sensibilidad de un detector hacia una substancia eluida, puede definirse como el
cambio en la señal medida, ΔS, originado por un cambio en la concentración en el gas portador
de la substancia eluida, ΔNs. Es evidente, a partir de la ecuación de definición de señal, que la
sensibilidad de un detector puede expresarse por medio de la ecuación:
Es decir, la sensibilidad de un detector hacia una substancia estará dada por el producto
de la constante de diseño del detector y el valor de la propiedad analizada de la substancia eluida.
14. En consecuencia, la sensibilidad de cada detector será diferente, dependiendo de su diseño, y
para un detector dado, la sensibilidad será diferente para substancias diferentes.
Linealidad
La linealidad de un detector, l, se define como la constante de proporcionalidad de la
relación entre el logaritmo de la señal ofrecida por el detector y el logaritmo de la concentración
de la substancia eluida:
Representando esta ecuación (figura 9) se obtiene una recta cuya pendiente es l y cuya
ordenada en origen es log(k as), es decir, el logaritmo de la sensibilidad.
Es relativamente frecuente encontrar evaluaciones de la linealidad de los detectores en
coordenadas lineales; en estos casos, se denominan detectores lineales aquellos para los que l =
1, denominándose detectores no lineales los restantes. De cualquier forma, la utilización de
coordenadaslinealesnoescorrecta,ya que muchos detectores muestran dependencias de la señal
con la concentración de tipo exponencial, dejando al margen las desviaciones producidas por la
amplificación electrónica de la señal; en cualquier caso, es siempre preferible realizar la
evaluación de la linealidad del detector en términos de coordenadas logarítmicas.
Figura 9. Gráfico concentración respuesta de un detector
15. El intervalo de concentraciones para el que la linealidad no cambia, es conocido como
el rango dinámico lineal del detector.
Mínima cantidad detectable
La señal de fondo medida por un detector, fluctúa con el tiempo debido a la inconstancia
de los parámetros experimentales; estas fluctuaciones pueden ser consideradas como errores
aleatorios de la medida y son denominadas ruido. El nivel de ruido oscila continuamente
alrededor de una señal promedio, dando el conjunto de sus valores a lo largo del tiempo una
distribución que vendrá definida por su desviación standard. El valor de señal correspondiente
a la mínima cantidad detectable, podrá calcularse en base al valor del incremento de señal
necesario (ΔS) para ser siginificativamente diferente del resto de la distribución. Considerando
un número suficiente de medidas de señal de fondo, se puede calcular que una señal es
significativamente distinta del ruido, con un 95 % de probabilidad, cuando su valor es dos veces
superior al intervalo de ruido; de forma análoga, cuando se incrementa la probabilidad hasta un
99 %, la señal debe ser al menos 2,65 veces mayor que el nivel de ruido para ser
significativamente distinta.
Por supuesto, la evaluación del nivel requerido para que una señal sea significativamente
diferente del ruido, está realizado en base a considerar una señal instantánea; No obstante, la
situación es extrapolable a medidas reales haciendo la consideración de que la señal evaluada
corresponde al valor máximo del pico de elución (figura 10), siendo evaluable de forma
cuantitativa todo pico que cumpla estas condiciones.
Figura 10. Parámetros de la relación señal/ruido de dos
bandas cromatográficas
16. Tipos de detectores
Los detectores usados en cromatografía de gases, pueden dividirse de forma genérica en
detectores universales y detectores específicos; los primeros ofrecen la ventaja de responder
prácticamente ante cualquier compuesto que pueda eluir de la columna, no obstante, esta misma
propiedad puede convertirse en un serio inconveniente cuando se procede al análisis de mezclas
muy complejas; en este último caso, la utilización de detectores específicos resulta muy
ventajosa ya que, al responder únicamente frente a un grupo limitado de compuestos, los
cromatogramas que ofrecen resultan muy simplificados.
Detector de conductividad térmica
Uno de los primeros detectores utilizados para el trabajo de rutina en cromatografía de
gases, ha sido el detector de conductividad térmica o detector de hilo caliente. Este tipo de
detector responde a la diferencia de conductividad térmica existente entre el gas portador puro
y el gas portador mezclado con alguna otra substancia; la magnitud de la respuesta dependerá
de la diferencia de conductividad térmica entre el compuesto que eluye de la columna y el gas
portador.
En un detector de conductividad, el gas procedente de la columna pasa a través de una
cavidad termostatizada que contiene el elemento sensor, un hilo de metal calentado o un
termistor. Cuando pasa a través del detector gas portador puro, la pérdida de calor del sensor es
función de la diferencia de temperatura entre éste y la pared de la cavidad y de la conductividad
térmica del gas portador;
cuando eluye una substancia
mezclada con el gas portador, la
conductividad térmica varía, y
como consecuencia se produce
un cambio de temperatura en el
sensor; el cambio de
temperatura, se traduce en una
variación de una señal eléctrica
(resistencia o voltaje según sea
el elemento sensor), que es
convenientementeamplificaday
registrada. Un esquema de un
detector típico de conductividad
térmica, se encuentra en la
Figura 11. Esquema de un detector de conductividad térmica
17. figura 11.
El detector de conductividad térmica es universal y no es destructivo; por lo general se
utiliza para el análisis de gases permanentes, hidrocarburos ligeros y otros tipos de compuestos
que ofrecen una respuesta pobre en otros tipos de detectores. Su sensibilidad oscila entre 10-6
y
10-8
g, con un rango dinámico lineal de aproximadamente cuatro órdenes de magnitud.
Detector de ionización de llama
El detector de ionización de llama, es tal vez el más ampliamente utilizado en
cromatografía de gases. Este tipo de detector es en la práctica de respuesta universal, ya que es
selectivo hacia los compuestos que presenten enlaces C-H, por lo que son muy pocos los
compuestos que no dan señal en él.
En un detector de ionización de llama, el gas procedente de la columna se mezcla con
hidrógeno y esta mezcla se quema en una cámara con exceso de aire. Por encima de la llama, se
dispone un colector cilíndrico polarizado con el fin de recoger los iones generados; sobre este
dispositivo, se mide la corriente iónica que se establece entre la punta del quemador y el
electrodo colector. El esquema de un detector de ionización de llama se encuentra en la figura
12.
El mecanismo de generación de iones en este detector es complejo y no del todo
conocido, ya que la energía de la llama es demasiado baja para explicar la generación de iones;
Figura 12. Sección de un detector de ionización de llama
18. generalmente, se cree que éstos son generados por medio de un proceso de ionización química,
en el que la energía liberada por reacciones fuertemente exotérmicas es retenida por las
moléculas orgánicas, generándose iones a partir de las moléculas excitadas.
El detector de ionización de llama se polariza siempre con un voltaje de saturación; bajo
estas condiciones, la corriente de fondo es del orden de 10-13
- 10-14
A, que se incrementa hasta
un nivel de 10-12
- 10-9
A en presencia de un vapor orgánico.
Los detectores de ionización de llama ofrecen una elevada sensibilidad, gran estabilidad
y un rango dinámico lineal excepcionalmente elevado; todo ello, junto con una gran sencillez
de utilización ha hecho que este tipo de detectores, como ya se ha mencionado, sean con mucho
los de mayor utilización.
Detector de captura electrónica
El detector de captura electrónica ocupa probablemente el segundo lugar entre los
detectores de más alta utilización, debiéndose este hecho a su excepcional sensibilidad (el
detector de captura electrónica es probablemente el dispositivo analítico más sensible que se
conoce). Este hecho junto a su selectividad hacia compuestos de enorme interés
(fundamentalmente en los campos de medio ambiente y toxicología), hacen que sea
enormemente utilizado para la detección y cuantificación de trazas.
En un detector de captura electrónica (figura 13), se utiliza una fuente de radiación β-
para bombardear el gas portador que pasa a través de una cámara de ionización, generándose de
esta forma un plasma de iones positivos, radicales libres y electrones térmicos.
Figura 13. Detector de captura electrónica de tipo concéntrico
19. Por término medio, cada partículaβ puede producir entre 100 y 1.000 electrones térmicos
con un rango de energías de entre 0,02 y 0,05 eV; la aplicación de un potencial a la célula del
detector de captura, permite que los electrones térmicos sean recogidos en un electrodo colector,
estableciéndose de esta forma una corriente de fondo, en presencia de gas portador puro, que da
lugar a la línea de base del detector. Cuando un compuesto activo frente a este detector, penetra
junto con el gas portador en la célula de medida, puede capturar a los electrones térmicos para
generar bien iones negativos de menor movilidad que los electrones, bienfragmentos neutros por
recombinación con los iones positivos del plasma generado en el proceso primario; este proceso
de captura, origina una disminución de la corriente de fondo del detector, que puede relacionarse
de forma cuantitativa con la cantidad de analito que está pasando a través del detector.
Las fuentes de partículas β utilizadas en este tipo de detectores son emisores débiles, 3
H,
63
Ni, 55
Fe, o electrones emitidos por efecto termoeléctrico, aunque en la práctica sólamente son
asequibles detectores basados en fuentes de 63
Ni y en algunos casos de tritio. Como gases
portadores, el detector de captura electrónica puede utilizar únicamente hidrógeno, gases nobles
o nitrógeno, que deben estar libres, hasta niveles extremadamente bajos de trazas de oxígeno y
vapor de agua.
El detector de captura electrónica, responde de forma muy selectiva frente a compuestos
que presenten grupos con elevada afinidad electrónica, en particular halógenos y grupos nitro,
ofreciendo frente a este tipo de compuestos una respuesta 106
-107
veces superior a la que muestra
frente a los hidrocarburos.
En conclusión, el detector de captura electrónica ofrece unas características muy buenas
tanto por su sensibilidad como por su especificidad, no obstante, hay que resaltar que el manejo
de estos detectores no es sencillo, ya que su respuesta puede ser muy variable en función de las
condiciones experimentales (potencial de polarización, temperatura, caudal de gas portador,
etc.), viéndose afectadas no sólo su sensibilidad sino también su selectividad y su rango
dinámico lineal, que en ocasiones puede llegara a quedar muy reducido; a estas dificultades hay
que añadir su sensibilidad hacia cualquier tipo de contaminación y la gran dificultad que
representa su limpieza, por lo que en el trabajo con este tipo de detector deben tomarse siempre
las mayores precauciones.
Detector de nitrógeno-fósforo.
Eldetector de nitrógeno-fósforo(tambiénconocidocomodetectortermoiónicoodetector
de llama alcalina), está basado en el hecho de que la adición de una sal de metales alcalinos a la
llama de un detector de ionización aumente la respuesta de éste hacia determinados elementos
20. (fósforo, nitrógeno, azufre, etc.). La selectividad de este tipo de detectores es muy dependiente
de parámetros tales como la temperatura, la forma y el tamaño de la llama, la composición de
la sal alcalina, geometría del detector, etc.; debido a esta dependencia de muchos parámetros
experimentales, el manejo de este tipo de detector es difícil, la optimización de la respuesta es
tediosa y su estabilidad, debido a pérdidas por vaporización de la sal alcalina, es muy escasa.
Parte de los problemas mencionados, han sido solucionados en muchos detectores
comerciales en base a substituir la perla de sal alcalina del detector por un vidrio o una cerámica
alcalina calentada eléctricamente de forma independiente. En un detector de este tipo (figura 14),
una perla de un silicato de metal alcalino, calentada eléctricamente, se coloca entre el “jet” del
detector y el electrodo colector, manteniéndose la perla a un potencial negativo para reducir las
pérdidas de metal alcalino. En la región de la perla, se genera un plasma por medio de una
mezcla aire/hidrógeno, utilizándose un flujo de hidrógeno muy bajo (normalmente entre 1 y 5
ml/min), insuficiente para mantener una llama pero suficiente para mantener un plasma en el que
puedan darse los fenómenos de ionización.
El detector de nitrógeno fósforo ofrece una sensibilidad de aproximadamente 10-13
g/s de
nitrógeno y 5 x 10-14
g/s de fósforo, con una especificidad de 104
sobre compuestos que no
presenten estos átomos y su rango dinámico oscila entre 104
y 105
. El detector NPD es muy
utilizado en el campo de medio ambiente, fundamentalmente para la determinación de residuos
de plaguicidas, debido a su sensibilidad y a su especificidad, lo que permite minimizar la
limpieza de las muestras. El principal problema que presenta este detector es la inestabilidad de
su respuesta, debida fundamentalmente a contaminación o pérdida de actividad de la perla
alcalina, por lo que es necesario realizar calibraciones con relativa frecuencia.
Figura 14. Detector de nitrógeno-fósforo
21. Detector fotométrico de llama
El detector fotométrico de llama (FPD), utiliza una llama de hidrógeno para excitar a un
estado electrónico elevado fragmentos de moléculas que contengan átomos de azufre o fósforo.
Estos dos elementos son excitados de forma óptima por la llama de hidrógeno, y cuando retornan
a su estado fundamental emiten las líneas características de sus espectros; las líneas analíticas
de interés son seleccionadas por medio de un filtro (392 nm para determinar azufre y 526 nm
para fósforo) y la intensidad de las radiación emitida es medida por medio de un
fotomultiplicador (figura 15).
En este tipo de detector, el gas portador procedente de la columna es mezclado con aire
y quemado en una atmósfera de hidrógeno; la emisión de los átomos de azufre o fósforo se da
fundamentalmente en la zona superior, rica en hidrógeno de la llama, por lo que en ocasiones se
utiliza un diseño de doble quemador (figura 16) con una segunda llama para producir la
excitación; este diseño, ayuda a además a evitar el fenómeno de apagado de llama, que se da en
este tipo de detectores, cuando eluye de la columna un compuesto en gran cantidad (básicamente
el disolvente de inyección).
Figura 15, Esquema de un detector fotométrico de llama
22. La sensibilidad y selectividad de este tipo de detectores son variables, dependiendo de
su diseño y de las condiciones de trabajo, pero un valor de sensibilidad típico es 10-13
g/s para
fósforo y 10-12
g/s para azufre, con un rango dinámico lineal de aproximadamente 1.000. La
selectividad de estos detectores oscila entre valores de 5 x 105
para el caso del fósforo y 103
para
el caso del azufre.
Detector de fotoionización
Los detectores de fotoionización están basados en la utilización de los fotones generados
en una lámpara de descarga para ionizar los compuestos orgánicos que emergen, junto con el gas
portador, de una columna cromatográfica.
Este tipo de detectores, utilizan para generar la radiación un tubo de descarga que
contiene una mezcla de gases a baja presión; éstos son excitados por medio de una diferencia de
potencial elevada que se mantiene entre dos electrodos. La variación en las proporciones de la
mezcla de gases de la lámpara, permite obtener radiación ultravioleta de diferentes energías,
aunque la más utilizada es la lámpara de 10,2 Ev.
En este detector (figura 17), el gas portador pasa a través de una cámara de ionización,
separada físicamente del tubo de descarga por medio de una ventana transparente a la radiación
(generalmente de MgF2). Los compuestos que eluyen de la columna son ionizados por los
Figura 16. Detalle de un doble quemador
23. fotones de alta energía procedentes de la lámpara y los iones generados son recogidos por medio
de un electrodo polarizado adecuadamente.
Prácticamente la totalidad de los compuestos orgánicos dan algún tipo de respuesta con
estos detectores. La sensibilidad del detector de fotoionización es dependiente del potencial de
ionización del compuesto de que se trate; la respuesta del detector frente a los compuestos
orgánicos sigue el orden general:
Compuestos aromáticos > alquenos > alcanos > alcoholes > ésteres > aldehidos > cetonas
En general, el detector de fotoionización es entre 5 y 10 veces mas sensible que el
detector de ionización de llama frente a los alcanos, y del orden de 35 veces más sensible frente
a los hidrocarburos aromáticos; su rango dinámico lineal es, por término medio, de cuatro
órdenes de magnitud.
Detector de conductividad electrolítica
La utilización del detector de conductividad, está basada en la medida de las variaciones
de la conductividad que presenta una disolución de electrolitos; estos electrolitos se forman por
disolución en agua de los productos de las substancias eluidas; por supuesto, solo las substancias
que contengan grupos capaces de comportarse como electrolitos serán detectables por este
medio.
Figura 17. Detector de fotoionización
24. La descomposición de las substancias eluidas se lleva a cabo por medio de pirólisis o de
reacciones catalizadas en un horno de flujo de bajo volumen, formado normalmente por un tubo
de níquel o cuarzo de pequeño diámetro mantenido a una temperatura de 500 a 1.000 EC. Las
reacciones catalizadas de oxidación o reducción, se realizan mezclando el gas portador con
oxígeno, aire o hidrógeno a la salida de la columna y haciendo pasar esta mezcla por un
catalizador (normalmente un hilo de níquel) contenido dentro del tubo reactor. En ocasiones, a
la salida del horno de pirólisis se sitúa un filtro químico con objeto de retener de forma selectiva
alguno de los productos de pirólisis con objeto de aumentar la selectividad del detector. El
esquema de un detector de conductividad se encuentra en la figura 18.
El detector de conductividad electrolítica más ampliamente utilizado es el de Hall; la
célula de medida de este detector (figura 19), mide la conductividad del líquido en su primera
parte, y la conductividad del líquido más la de los productos de la pirólisis en la segunda,
sumándose después de forma diferencial las señales de las dos medidas, con lo que se minimizan
las fluctuaciones de respuesta debido a factores que puedan afectar a la medida (conductividad
de base del líquido, variaciones de temperatura, etc.).
Figura 18. Diagrama de funcionamiento de un detector de conductividad
Figura 19. Esquema de la célula de conductividad de un detector Hall
25. Los líquidos de base utilizados en estos detectores están formados normalmente por
alcoholes (metanol, isopropanol, etc.) solos o mezclados con agua; la utilización de este tipo de
disolventes en lugar de agua permite mejorar notablemente la sensibilidad, la selectividad y el
rango dinámico lineal del detector.
Los detectores de conductividad ofrecen una buena sensibilidad (entre 10-12
y 10-13
g/s
del elemento con el que se esté trabajando), una buena selectividad (entre 104
y 109
según
elementos) y un rango dinámico lineal que oscila entre 103
y 105
. De todas formas, la utilización
de este tipo de detectores no es fácil, ya que cualquier tipo de contaminación, un catalizador
desactivado, un filtro químico agotado, etc. se traducen con mucha facilidad en deformaciones
de los picos, ruido elevado y falta de linealidad en la respuesta.
COLUMNA CROMATOGRAFICA
Al igual que sucede en todas las técnicas cromatográficas, la columna es el corazón del
cromatógrafo de gases. Es necesario tener siempre presente que la columna es el auténtico
elemento de separación de los componentes de la muestra; así, una mala elección de la columna,
una columna deteriorada o unas condiciones de trabajo inadecuadas, nunca permitirán obtener
buenos resultados aunque se disponga del mejor equipo en el resto del cromatógrafo, siendo
además las causas citadas las responsables de la inmensa mayor parte de los problemas que se
encuentran a la hora de realizar un análisis por cromatografía de gases.
Una columna para cromatografía de gases, está formada por un tubo, que puede ser de
diversos materiales (preferiblemente inertes), dentro del cual se encuentra la fase estacionaria.
Esta puede ser un sólido activo (cromatografía gas sólido), o con mayor frecuencia un líquido
depositado sobre las partículas de un sólido portador (columnas empaquetadas o de relleno) o
sobre las propias paredes del tubo (columnas tubulares abiertas).
Columnas empaquetadas
Las columnas empaquetadas consisten, como ya se ha mencionado, en un tubo
(normalmente de vidrio o acero inoxidable) con un diámetro interno que varía entre 2 y 5 mm
y de una longitud que oscila entre 1 y 15 m, arrollado de una forma adecuada para poderse
introducir en el interior del horno del cromatógrafo (figura 20).
26. En el interior del tubo, se dispone la fase estacionaria bajo la forma de un líquido
soportado sobre un material adecuado finamente pulverizado; el diámetro de las partículas del
relleno debe ser, al menos, 10 veces inferior al diámetro del tubo, con el fin de conseguir una
buena uniformidad en su distribución. El relleno, se encuentra confinado en el interior del tubo
por medio de tapones del algún material poroso (generalmente lana de vidrio o lana de cuarzo)
situados en los extremos.
La longitud, y consecuentemente la eficacia, de las columnas empaquetadas se encuentra
limitada fundamentalmente por la caída de presión del gas portador entre cabeza y salida de
columna.
Columnas tubulares abiertas
Las columnas tubulares abiertas (conocidas normalmente como columnas capilares)
fueron descritas inicialmente por Golay en 1957, y se encuentran entre las más ampliamente
utilizadas debido a la gran eficacia de separación que proporcionan.
Básicamente, una columna tubular está formada por un tubo (normalmente de vidrio o
sílice fundida) de un diámetro comprendido entre 0,2 y 0,8 mm, en cuya pared interna se dispone
la fase estacionaria. Según sea la forma en que se dispone la fase estacionaria sobre la pared del
tubo, se distinguen básicamente dos tipos de columnas (figura 21):
Figura 20. Columnas empaquetadas para cromatografía de gases
27. a) Columnas WCOT (Wall Coated Open Tubular). En este tipo de columnas (que
son las de uso más frecuente), la fase estacionaria se encuentra depositada
formando una película líquida directamente sobre las paredes del tubo.
b) Columnas PLOT (Porous Layer Open Tubular. En estas columnas la pared
interna del tubo está recubierta por una capa de un soporte adsorbente; si a su vez
el soporte está impregnado con una fase estacionaria líquida, las columnas son
denominadas SCOT (Support Coated Open Tubular.
Es evidente que la permeabilidad de las columnas tubulares hacia los gases es mucho
mayor que la de las columnas empaquetadas (del orden de 100 veces mayor), por lo que este tipo
de columnas pueden tener una longitud bastante grande (son muy frecuentes columnas de 50 m)
sin provocar presiones excesivamente elevadas en cabeza de columna.
El enorme uso que se hace de este tipo de columnas es debido fundamentalmente a que
la elevada eficacia que ofrecen (son frecuentes valores de 30.000 a 50.000 platos frente a los
2.000 - 4.000 de una columna empaquetada) permite la separación de mezclas muy complejas
con relativa facilidad; por otra parte, la gran eficacia de este tipo de columnas permite conseguir
buenas resoluciones sin recurrir a fases estacionarias de gran selectividad, lo que simplifica
mucho el problema de la elección de la fase estacionaria (prácticamente todas las separaciones
se pueden realizar con tres o cuatro columnas diferentes).
El principal inconveniente de este tipo de columnas es su pequeña capacidad de carga,
lo que obliga a utilizar sistemas de inyección especiales para introducir pequeñas cantidades de
muestra y detectores de muy alta sensibilidad. No obstante, tanto las columnas SCOT como las
WBOT de diámetros mayores de 0,5 mm (columnas “Wide Bore”) ofrecen una capacidad de
Figura 21. Tipos de columnas tubulares abiertas
28. carga suficiente como para poder inyectar cantidades del orden de 1 μl sin utilizar un “splitter”
con una pérdida de eficacia relativamente pequeña. Las columnas de este tipo tienen una
utilización potencial muy alta en el campo del análisis de trazas.
Soporte sólido
La misión de los soportes sólidos utilizados en algunos tipos de columnas es la de
proporcionar una superficie sobre la que se deposita la fase estacionaria líquida en forma de
película uniforme.
Los soportes utilizados en cromatografía de gases deben reunir una serie de cualidades,
como son:
1.- Deben presentar una superficie específica relativamente elevada, con el fin de
que la fase estacionaria pueda distribuirse de manera uniforme y ofreciendo la
máxima superficie de contacto con la fase móvil para facilitar los procesos de
intercambio.
2.- Deben ser porosos, con el fin de no provocar caídas excesivas de presión
3.- Deben ser relativamente duros para que sus partículas no se rompan durante los
procesos de impregnación y llenado de las columnas.
4.- Deben ser térmicamente estables.
5.- La superficie de los soportes debe ser químicamente inerte y no debe provocar
fenómenos de adsorción que puedan influir en la separación cromatográfica.
Ninguno de los materiales probados hasta este momento cumple todas las condiciones
expuestas por lo que, en la práctica, es necesario elegir de entre los soportes existentes el que
mejor se adapte a cada separación concreta aunque sea a costa de sacrificar alguna de las
propiedades deseables.
Como soportes, se han utilizado sólidos inertes de todo tipo, microbolas de vidrio, carbón
grafitizado, metales, sílices, fluoropolímeros, polímeros porosos, etc. aunque los más utilizados
son los soportes preparados a base de tierras de diatomeas sinterizadas (Chromosorb, Gas
Chrom, etc.); la superficie de estos materiales se somete a diversos tratamientos químicos
(lavados ácidos o básicos, silanización de grupos silanol libres, ligado de pequeñas cantidades
29. de fases estacionarias, etc), con el fin de eliminar, en la mayor medida posible, los puntos activos
de la superficie del soporte que pudiesen interaccionar con los compuestos a separar. En la Tabla
1 se recogen las propiedades de algunos soportes diatomaceos típicos.
Tabla 1. Propiedades de algunos soportes diatomaceos
Soporte Color pH Superficie específica
m2
/g
Densidad
g/ml
Carga máxima de
fase estacionaria
Chromosorb P Rosado 6,5 4,0 0,47 30 %
Chromosorb A Rosado 7,1 2,7 0,48 25 %
Chromosorb G Blanco 8,5 0,5 0,58 5 %
Chromosorb W Blanco 8,5 1,0 0,24 20 %
Chromosorb 750 Blanco - 0,5 - 1,0 0,36 7 %
En lo que respecta al tamaño de partícula de los soportes, a pesar de que según la
ecuación de Van Deemter la eficacia de la columna aumenta al disminuir el tamaño de las
partículas de relleno, existe un límite inferior debido a la resistencia al flujo de gas que oponen
los lechos cromatográficos formados por partículas muy finas. En la práctica, los tamaños de
partícula utilizados varían entre 40 y 120 mallas A.S.T.M. (420 a 125 μm), siendo las
granulometrías más frecuentes las de 60 - 80, 80-100 y 100 - 120 mallas.
La fase estacionaria
La fase estacionaria tiene en cromatografía de gases un papel fundamental, ya que la fase
móvil es cromatográficamente inerte y las separaciones son debidas exclusivamente a las
interacciones específicas que se dan entre los componentes de la muestra y la fase estacionaria.
Como en casi todos los casos, las propiedades deseables de una fase estacionaria son con
frecuencia contradictorias, por lo que no existe la fase estacionaria ideal. Las propiedades que
debería cumplir una fase estacionaria son:
1.- Debería tener un rango de temperaturas de utilización lo más amplio posible
(idealmente entre -60 y 400 EC).
30. 2.- Debe tener una presión de vapor lo más baja posible.
3.- Debe ser térmicamente estable.
4.- Debe ser químicamente inerte.
5.- Debe tener baja viscosidad en las condiciones de trabajo.
6.- Debe mojar bien el soporte, presentando además una adherencia suficiente como
para que no sea arrastrada por la fase móvil.
Además de cumplir estos requisitos generales, la fase estacionaria debe ser selectiva
frente a los compuestos a separar. Evidentemente, no existe ninguna fase estacionaria que
cumpla todos los requisitos anteriores, aunque para realizar separaciones a temperaturas
elevadas, la utilización de polímeros “líquidos” de elevado peso molecular ofrece resultados
bastante buenos.
A nivel molecular, la retención de un soluto por parte de la fase estacionaria puede ser
debida a cualquier tipo de fuerzas intermoleculares:
1.- Fuerzas de dispersión (fuerzas de London). Este tipo de fuerzas son debidas a los
campos eléctricos producidas por dipolos instantáneos debidos al movimiento
relativo de núcleos y electrones. Las fuerzas de dispersión son las únicas que
actúan entre fases estacionarias y solutos no polares.
2.- Fuerzas de inducción (fuerzas de Debye). Este tipo de fuerzas son debidas a la
interacción electrostática que se produce entre dipolos permanentes y dipolos
instantáneos, formados en moléculas no polares aunque polarizables, inducidos
por los primeros.
3.- Fuerzas de orientación (fuerzas de Keesom). Son debidas a la interacción entre
dipolos permanentes, tanto de la fase estacionaria como del soluto.
4.- Fuerzas donador-aceptor. Son debidas a interacciones químicas de carácter débil
(un ejemplo puede ser el enlace de hidrógeno), en las que se produce una
transferencia no completa de electrones por parte del donador hacia el aceptor.
Para compuestos no polares, las únicas fuerzas de interacción entre el soluto y la fase
estacionaria son las dispersivas; este tipo de fuerzas no son selectivas, y en las separaciones
31. basadas en este tipo de fuerzas los solutos emergen de la columna, por lo general, en orden
correspondiente a sus puntos de ebullición.
Para compuestos polares, las interacciones de mayor importancia son las debidas a
fuerzas de inducción y orientación y en algunos casos a interacciones electrónicas específicas
de tipo donador-aceptor; este tipo de fuerzas dependen del momento dipolar y de las
polarizabilidades tanto de la fase estacionaria como del soluto.
La suma de todas las interacciones entre un soluto y una fase estacionaria es una medida
de la “polaridad” de la fase respecto al soluto, que marca las características generales de
retención, mientras que la magnitud de cada uno de los tipos de interacciones particulares
marcará la selectividad de la fase estacionaria, de gran importancia ya que puede permitir separar
en una fase estacionaria concreta solutos de igual polaridad.
Caracterización de las fases estacionarias
Las características de mayor interés a la hora de seleccionar una fase estacionaria
concreta son el rango de temperaturas de trabajo, la viscosidad de la fase dentro de este rango
y su capacidad para interaccionar de forma selectiva con diferentes solutos.
Como norma general, la temperatura más baja de utilización de una fase estacionaria
corresponde a su temperatura de fusión. El límite superior de temperatura de una fase
estacionaria es la temperatura más elevada a la que puede mantenerse sin que se produzcan
descomposiciones o sangrados significativos. Muchas fases estacionarias poliméricas presentan
una dispersión importante en su rango de pesos moleculares, por lo que los oligómeros que
puedan contener se evaporarán dejando la columna con una proporción de fase estacionaria
mucho menor de lo previsto; en estos casos, la máxima temperatura de uso se define como
aquella a la que se puede mantener la fase estacionaria durante 24 horas sin cambios apreciables
en las características de retención de la columna.
Las características de retención de una fase estacionaria (polaridad y selectividad) se
determinan mediante el método de McReynolds. El sistema de Rohrschneider/McReynolds está
basado en la aditividad de las fuerzas de atracción intermoleculares, que pueden ser evaluadas
a partir de las diferencias de los índices de retención de una serie de compuestos de prueba en
la fase estacionaria que se trata de caracterizar y en escualano (una fase apolar de referencia).
Las constantes de caracterización propuestas inicialmente por Rohrschneider (X', Y', Z',
U' y S'), se calculaban en base a la retención de benceno, etanol, 2-butanona, nitrometano y
32. piridina. En el método sugerido por McReynolds se utilizan 10 compuestos de prueba (Tabla 2),
aunque para la caracterización rutinaria se utilizan únicamente la cinco primeras constantes (X'
a S').
La determinación práctica de las constantes de McReynols se realiza midiendo para cada
uno de los compuestos de prueba el índice de retención de Kovats en la fase que se trata de
caracterizar y en escualano. El índice de retención de Kovats se define por medio de la ecuación:
I: índice de retención de la substancia x
t'R(x): tiempo de retención corregido de la substancia x
z: número de átomos de carbono de un n-alcano que eluye de la columna
antes que la substancia x
z+n: numero de carbonos de un n-alcano que eluye después de la substancia
x
t'R(z) y t'R(z+n): tiempos de retención corregidos de los dos n-alcanos
A partir de los índices de retención, cada constante de la fase estacionaria se determinará
por diferencia entre el índice de retención del compuesto de prueba en ella y en escualano; así,
por ejemplo, la constante X' de una fase estacionaria se calcula por medio de la ecuación:
La determinación de las constantes de McReynolds se realiza normalmente con una
temperatura de columna de 100 - 120 EC y con un recubrimiento de fase estacionaria de 10 - 20
%.
Las constantes de McReynolds pueden utilizarse no sólamente para caracterizar las fases
estacionarias, sino también como guía de selección de la fase a utilizar para la separación de un
compuesto determinado atendiendo a su funcionalidad; así, si se trata de separar una serie de
compuestos con una funcionalización común, en un primer intento se podría seleccionar una fase
estacionaria con un valor elevado de las constantes de McReynolds relacionadas con el grupo
funcional común a fin de que la fase estacionaria tenga una selectividad elevada. De cualquier
forma, debe tenerse siempre en cuenta que estas constantes caracterizan las fases estacionarias
I z n
t x t z
t z n t z
R R
R R
= +
−
+ −
⎛
⎝
⎜
⎞
⎠
⎟100 100
log ' ( ) log ' ( )
log ' ( ) log ' ( )
X I benceno I Ifase escualano
' ( )= = −Δ
33. en una primera aproximación, y que en ocasiones se pueden encontrar fases estacionarias con
selectividades muy diferentes a pesar de tener muy similares los valores de las constantes de
McReynolds.
Tabla 2. Compuestos utilizados y significado de las constantes de McReynolds
Símbolo Compuesto de prueba Interacción medida Grupo funcional implicado
X' Benceno
Fuerzas de dispersión y propiedades
débiles de aceptor de protones
Aromáticos y olefinas
Y' 1-butanol
Fuerzas de orientación y capacidad de
donar y aceptar protones
Alcoholes, nitrilos y ácidos
Z' 2-pentanona
Fuerzas de orientación y capacidad de
aceptar protones
Cetonas, éteres, aldehidos,
é s t e r e s , e p ó x i d o s ,
dimetilaminoderivados
U' Nitropropano Fuerzas de orientación Nitrilos y nitroderivados
S' Piridina
Fuerzas de orientación débiles y
capacidad aceptora de protones
Bases aromáticas
H' 2-metil-2-pentanol
Compuestos ramificados,
particularmente alcoholes
J' 2-iodobutano Compuestos halogenados
K' 2-octino
L' 1,4-dioxano
Fuerzas de orientación y capacidad de
aceptar protones
M' cis-hidrindano
Características de algunas fases estacionarias
En cromatografía de gases, pueden llevarse a cabo la mayoría de las separaciones
utilizando unos cuantos tipos de fases estacionarias de uso frecuente, sintetizadas
específicamente para este uso. Seguidamente, se describirán algunas tipos de fases estacionarias
de uso común.
34. 1.- Hidrocarburos.
Desde los principios de la cromatografía de gases, se han utilizado como fases
estacionarias apolares hidrocarburos de elevado peso molecular (escualano, grasas de apiezón,
etc.).
Las únicas fuerzas de interacción que se tienen con este tipo de fases son las de
dispersión, por lo que los compuestos cromatografiados eluirán de las columnas que utilicen este
tipo de fases en orden de volatilidad, y en el caso de algunos compuestos muy polares, en orden
inverso a su hidrofobicidad
Este tipo de fases estacionarias es muy utilizado como referencia para la caracterización
de otras fases estacionarias, utilizándose fundamentalmente con este fin el escualano:
El escualano presenta el inconveniente de tener una temperatura máxima de trabajo muy
baja (120 EC), por lo que en ocasiones se ha propuesto su substitución por el apiezón MH o por
el hidrocarburo de Kovats o apolano-87:
El principal inconveniente de este tipo de fases estacionarias es su facilidad de oxidación,
que lleva normalmente a una alteración de sus características de retención y, en casos extremos,
a un elevado sangrado por fragmentación de las cadenas hidrocarbonadas.
2.- Polisiloxanos.
Los polisiloxanos o siliconas son, con mucho, el grupo de fases estacionarias de más
amplia utilización debido a su elevada estabilidad térmica y a la posibilidad de modificar
químicamente la estructura de base para obtener fases con diferentes polaridades y
selectividades.
35. Los polisiloxanos presentan como base la estructura:
Donde R puede corresponder a grupos metilo, vinilo, fenilo, 3,3,3-trifluoropropilo,
cianoetilo, etc., pudiendo estar toda la estructura substituida por un único grupo o por mezclas
de cualquiera de los citados en cualquier proporción.
Los materiales de este tipo de utilización en cromatografía de gases deben ser
extraordinariamente puros, no debiendo contener restos del catalizador de polimerización o de
oligómeros; por otra parte los grupos terminales de los polímeros deben ser bloqueados
cuidadosamente para maximizar la estabilidad térmica. Aparte de estos requerimientos, los
polisiloxanos presentan una excepcional inercia, tanto térmica como química.
Lasgrandesposibilidadesdevariaciónestructuralquetienenestoscompuestoshacenque
sea posible obtener fases estacionarias enormemente selectivas. En este sentido, los fenil,
cianopropil y trifluoropropil polisiloxanos presentan muy buenas características de selectividad.
3.- Polifeniléteres.
Los polifeniléteres, cuya estructura base es:
Son fases estacionarias moderadamente polares, químicamente bien caracterizadas y de
utilidad para realizar muchas separaciones.
Su volatilidad es extraordinariamente baja dado su pequeño peso molecular (para valores
de n = 2 y 3, son estables hasta 200 y 250 EC respectivamente), por lo que los polímeros de este
tipo que presentan un valor promedio de 20 anillos tienen gran utilidad para realizar separaciones
a elevadas temperaturas (hasta 400 EC).
36. 4.- Poliésteres.
Los poliésteres son un grupo de polímeros resinosos formados por policondensación de
un ácido polibásico con un polialcohol. Los poliésteres utilizados con más frecuencia como fases
estacionarias son los adipatos y succinatos de etilenglicol, dietilenglicol y butanodiol;
particularmente, es muy utilizado el polietilenglicol succinato (PEGS):
Lospoliésteres sonfases estacionarias moderadamentepolares.Lascolumnaspreparadas
con este tipo de fases presentan el problema de su escasa estabilidad ya que los poliésteres son
fácilmente hidrolizables, pueden reaccionar con algunos componentes de las muestras (por
ejemplo aminas) y son muy sensibles a la oxidación; por estos motivos, la utilización de
poliésteres como fase estacionaria ha disminuido bastante.
5.- Polietilenglicoles.
los polietilenglicoles sonfasesestacionarias muy útiles para la separación de compuestos
polares y con posibilidades de formación de enlaces de hidrógeno. Este tipo de fases
estacionarias se preparan por polimerización del óxido de etileno, lo que da lugar a la estructura:
HO - (CH2 - CH2 - O)n - CH2 - CH2 - OH
Los polímeros así formados se separan en fracciones de diferente peso molecular
promedio, lo que da lugar a todo el rango de fases estacionarias de este tipo.
El factor fundamental que marca las características de retención de este tipo de fases es
la concentración de grupos hidroxilo, y en mucho menor grado, el peso molecular promedio de
la fase. Este último factor si tiene por el contrario una gran influencia sobre la estabilidad térmica
de la fase; así, el Carbowax 20M, con un peso molecular promedio de 14.000, tiene una
temperatura máxima de utilización de 225 EC, mientras que el Superox-4, con un peso molecular
promedio de 4 millones, es utilizable a temperaturas de hasta 300 EC. El principal inconveniente
que presenta este tipo de fases estacionarias es su facilidad de oxidación.
37. Fases estacionarias ligadas
En general, uno de los factores que influyen en la temperatura límite de utilización de las
fases estacionarias, particularmente en las de baja viscosidad, es la tendencia de éstas a ser
arrastradas por la corriente de gas portador a medida que la viscosidad de la fase va
disminuyendo por efecto del aumento de temperatura; este efecto tiene una particular
importancia en el caso de las columnas capilares dado que las paredes internas del tubo, que
carecen de irregularidades, no tienen buenas características estructurales para mantener una
película líquida.
Una solución a este problema, consiste en inmovilizar químicamente la fase estacionaria,
bien sea por anclaje químico de la fase líquida sobre la superficie del soporte o de la pared del
tubo capilar, bien por entrecruzamiento químico de las moléculas de la fase estacionaria para
formar un retículo tridimensional de escasa movilidad.
Estas fases estacionarias son conocidas como fases ligadas o fases inmovilizadas y
presentan una serie de ventajas sobre las fases estacionarias convencionales; en primer lugar, las
fases inmovilizadas ofrecen temperaturas de utilización más elevadas que las fases
convencionales, teniendo además un menor nivel de sangrado a temperaturas elevadas; por otra
parte, dado que las fases de este tipo son prácticamente insolubles, son mucho menos afectadas
que las fases normales por la inyección de elevados volúmenes de disolvente. Una ventaja
adicional de este tipo de fases es que las columnas contaminadas por componentes no volátiles
de las muestras pueden ser regeneradas mediante un lavado con disolventes adecuados.
La utilización de fases ligadas está particularmente extendida en las columnas tubulares
abiertas (en la mayor parte de las columnas de este tipo se utilizan fases inmovilizadas), pero es
frecuente encontrar también este tipo de fases,ligadassobresoportesdiatomáceososobresílices,
para su utilización en columnas empaquetadas (Ultra-bond, Durapak, Porasil, etc.).
Adsorbentes para cromatografía gas-sólido
La cromatografía gas sólido nunca ha alcanzado el mismo nivel de utilización que la
cromatografía gas líquido; este hecho es debido fundamentalmente a varios factores:
1.- Las isotermas de adsorción en cromatografía gas sólido no son lineales, lo que
da lugar a que los volúmenes de retención varíen con la cantidad de muestra, a
que los picos sean asimétricos y, con frecuencia, a que las muestras no eluyan
completamente de la columna.
38. 2.- La elevada superficie específica de los adsorbentes, junto con una energía de
interacción relativamente alta, dan lugar a tiempos de retención excesivamente
largos; además, muchos adsorbentes muestran acusadas propiedades de catálisis
a las temperaturas de trabajo de la columna.
3.- Los adsorbentes son bastante difíciles de estandartizar.
Por estos motivos,el uso de la cromatografía gas sólido se ha visto relegado a la
separación de gases inorgánicos, hidrocarburos de bajo peso molecular, pequeñas moléculas
polares, etc.
Como adsorbentes para cromatografía gas sólido se utilizan fundamentalmente sílices
esféricas, alúmina, carbón grafitizado y tamices moleculares (zeolitas).
Otro grupo de adsorbentes para cromatografía gas-sólido, es el formado por polímeros
porosos. Estos adsorbentes son preparados por polimerización en suspensión en un disolvente
inerte; se forman así estructuras de tipo esponja, con el disolvente llenando los poros de la
estructura y, tras un proceso de secado, la estructura porosa se mantiene, aunque con una rigidez
suficiente como para poder realizar el empaquetado de la columna. Existen numerosos tipos de
polímeros (Chromosorb serie 100, Porapak, etc.), con diferentes características de retención,
obtenidos por variación del monómero, del reactivo de entrecruzamiento, etc.
Este tipo de polímeros tiene su principal aplicación en la separación de compuestos que
dan lugar a adsorciones muy fuertes sobre los soportes diatomáceos clásicos (agua, alcoholes,
ácidos carboxílicos, etc.). El principal inconvenientedeestetipodeadsorbentessonsusmáximas
temperaturas de trabajo, que son relativamente bajas, y un elevado sangrado, lo que dificulta su
utilización con detectores de alta sensibilidad.
ELECCION DE LA COLUMNA
La elección de la columna para realizar una separación concreta por cromatografía de
gases, es normalmente la tarea más complicada del desarrollo de un método, pero es, por otra
parte, el factor principal del que dependerá el éxito o el fracaso del desarrollo.
La elección de la columna cromatográfica es normalmente un trabajo empírico; no
39. obstante, como norma general puede recomendarse el seguir en la elección una serie de pasos
que, de menor a mayor dificultad serán:
1.- Búsqueda de metodologías existentes.
Existe en la bibliografía una enorme cantidad de separaciones descritas y en muchos
casos es posible encontrar, incluso sin realizar una búsqueda exhaustiva, una metodología
adecuada para la separación que se desea realizar. En otros muchos casos, es relativamente fácil
el encontrar metodologías desarrolladas para compuestos de estructura similar a los que se trata
de separar, pudiéndose utilizar estas condiciones comopunto de partida del método a desarrollar.
2.- Utilización de columnas capilares.
Como ya se mencionó, las columnas capilares (o tubulares abiertas) pueden proporcionar
eficacias muy altas, por lo que es relativamente fácil que una columna capilar pueda realizar una
separación concreta únicamente en base a su eficacia. Las columnas capilares sólamente son
asequibles de forma comercial con una variedad muy limitada de fases estacionarias
(normalmente 6 ó 7), que cubren todo el rango de polaridades; la selección de una columna
concreta es fácil de realizar atendiendo a la naturaleza química de los compuestos a separar y a
las constantes de McReynolds de las fases estacionarias asequibles.
3.- Utilización de columnas empaquetadas.
En el caso de que la instrumentación disponible no permita la utilización de columnas
capilares, de que la muestra a separar no sea adecuada para trabajar con ellas (necesidad de
inyectar cantidades elevadas, problemas de discriminación en la inyección, etc.) o de que la
eficacia necesaria para realizar la separación (calculada en base a la ecuación de resolución)
sobrepase unos límites razonables, es necesario recurrir a la utilización de columnas
empaquetadas.
La utilización de columnas empaquetadas permite en muchos casos, a pesar de la escasa
eficacia que ofrecen, conseguir separaciones muy complejas en base a la selectividad de la fase
estacionaria, ya que en este caso existe una enorme variedad de fases con características
diferentes entre las que poder elegir una apropiada. La selección previa de una fase estacionaria
puede realizarse en base a la estructura de los compuestos a separar y a las constantes de
McReynolds de las fases, que darán una idea del tipo de interacciones en que estará basada la
40. separación así como de los grupos funcionales de las moléculas de soluto que pueden estar
implicados.
4.- Utilización de fases mixtas.
Un sistema de conseguir selectividades muy elevadas en cromatografía de gases es la
utilización de mezclas de dos o más fases estacionarias. La preparación de fases mixtas puede
realizarse de diferentes formas:
a) Fragmentos de empaquetado, cada uno con una fase estacionaria diferente,
dispuestos en serie a lo largo de la columna.
b) Columnas de lecho mixto, en las que cada una de las fases estacionarias, ya
depositadas sobre un soporte adecuado, se mezclan en proporciones apropiadas.
c) Rellenos propiamente de fase mixta, en los que las fases estacionarias son
mezcladas antes de depositarlas sobre el soporte sólido.
La utilización de fases mixtas adecuadas permite conseguir una enorme variedad de
propiedades de retención. En general las fases mixtas presentan unas propiedades de retención
que son intermedias entre las de las fases que componen la mezcla (existen métodos de cálculo
teórico para predecir el comportamiento de una fase mixta a partir de los datos de retención de
una mezcla en cada una de las fases estacionarias individuales), por lo que la utilización de fases
mixtas es muy utilizada para conseguir un “ajuste fino” de las propiedades de retención de una
fase estacionaria; no obstante, y tal vez sea este el caso más interesante, cuando se realiza una
mezcla de fases de polaridades muy diferentes, el comportamiento de la fase mixta es
absolutamente diferente del que muestran por separado cada uno de sus componentes
(comportamiento no ideal).
Evidentemente, la separación de una mezcla puede llegar a requerir, si es necesario
recurrir a la utilización de selectividades especiales, una cantidad inmensa de trabajo, por lo que
es preciso tener en cuenta que el desarrollo de una metodología de separación compleja sólo está
justificado cuando el número de muestras a analizar con ella sea suficiente como para justificar
el trabajo invertido o cuando exista una imposibilidad absoluta de realizar el análisis de una
muestra de gran interés por medio de cualquier otra técnica.
41. SELECCION DE LAS CONDICIONES DE TRABAJO
Aparte de la elección de la columna a utilizar, existen muy pocos parámetros
experimentales sobre los que se pueda influir a la hora de realizar una separación y,
normalmente, su optimización resulta muy sencilla. Básicamente, los parámetros a fijar en cada
caso serán:
1.- Naturaleza y velocidad del gas portador.
2.- Temperatura de detector.
3.- Temperatura de inyección.
4.- Temperatura de columna.
Como ya se ha comentado, el gas portador es básicamente inerte en la separación, por lo
que la elección de uno u otro dependerá en cada caso de las necesidades del equipo y, de forma
secundaria, de las necesidades de rapidez del análisis. Como norma general, en todos los casos
debe trabajarse con la velocidad lineal de gas que corresponda al mínimo de la curva de AEPT,
aunque en el caso de separaciones que no requieran grandes eficacias de columna puede
aumentarse la velocidad para acortar el tiempo de análisis a expensas de reducir la eficacia.
La temperatura del detector, aunque en algunos tipos de detectores puede influir sobre
la respuesta, no es normalmente un parámetro que requiera una optimización excesiva. La
temperatura del detector debe ser siempre más elevada que la máxima temperatura de trabajo (o
de limpieza) a que se someta la columna, con el fin de evitar que se puedan condensar en el
detector compuestos eluidos de baja volatilidad; aparte de este criterio, las únicas limitaciones
serán las que puedan venir determinadas por el tipo concreto de instrumento de que se trate.
La temperatura de inyección no suele ser tampoco un parámetro difícil de optimizar; en
general, debe ser lo suficientemente elevada como para volatilizar completamente todos los
componentes de la muestra, no debiéndose elevar más allá de este nivel para evitar posibles
descomposiciones térmicas de la muestra. Estos criterios son los únicos a tener en cuenta salvo
en el caso de sistemas de inyección especiales (inyecciones “splitless”, “cold on column”, etc.)
que ya se han comentado.
La temperatura de la columna, si se trabaja en condiciones isotermas, o su programa de
calentamientosonlos únicos parámetrosinstrumentalesquepuedenteneruna influencia decisiva
en la separación.
En condiciones de trabajo isotermas, los picos que aparecen a pequeños volúmenes de
42. retención se encuentran con frecuencia mal resueltos, mientras que los que presentan volúmenes
de retención elevados, aunque bien resueltos, aparecen a tiempos muy largos y presentan además
un ensanchamiento considerable (figura 22); es evidente, por tanto, que la temperatura de
columna debe elegirse de forma que los componentes de interés de la mezcla aparezcan con
volúmenes de retención medios, aún a costa de dejar retenidos en la columna los componentes
que presenten mayores tiempos de retención (figura 23). En estos casos, basta con realizar dos
o tres inyecciones de prueba para determinar una temperatura de trabajo adecuada.
En muestras complejas y con componentes que presentan volúmenes de retención muy
diferentes, es muy conveniente recurrir a técnicas de programación de temperatura (figura 24),
es decir, incrementar la temperatura de la columna según un programa de calentamiento
previamente establecido de temperatura en función del tiempo.
Figura 22. Cromatograma de una mezcla en condiciones isotermas
Figura 23. Condiciones isotermas adecuadas a los compuestos de interés
43. En estos casos, resulta muy conveniente realizar una prueba previa con una velocidad de
calentamiento relativamente elevada y cubriendo un rango de temperaturas muy amplio, con el
fin de estimar la temperatura a la que eluye cada componente y la resolución que presentan los
picos; a la vista de los resultados obtenidos, se podrá fijar mayor precisión el intervalo de
temperatura a utilizar, así como la velocidad de calentamiento, teniendo en cuenta que la mayor
separación entre los componentes se obtiene siempre con velocidades de calentamiento muy
pequeñas.
Figura 24. Cromatograma de una mezcla con programación de temperatura