Estas enzimas reciben su nombre por su especial actividad contra la cefotaxima, así como otros substratos betalactámicos como ceftazidima, ceftriaxona, o cefepime. Este genotipo es un buen ejemplo de betalactamasas cromosómicas, encontradas normalmente en especies de "Kluyvera", un grupo relativamente raro de patógenos comensales. Estas enzimas no están muy relacionadas con las TEM o SHV, ya que solo muestran un 40% de identidad con las mismas. Se conocen actualmente más de 80 tipos de CTX-M, de las cuales algunas son más activas contra ceftazidima que contra cefotaxima. Además, se han encontrado en cepas de Salmonella enterica serovar typhimurium y en E.coli, pero también han sido descritas en otras especies de Enterobacteriaceae y son la BLEE predominante en algunas partes de Suramérica, hallándose también en Europa del Este, siendo los tipos CTX-M-14, CTX-M-3, y CTX-M-2 los más habituales. CTX-M-15 es, desde el 2006 el tipo de BLEE con mayor prevalencia en aislamientos de E.coli en el Reino Unido.13

2. Jerónimo Buriticá González
Carolina Cardona Tobón
Third semester
Molecular biology

3. Introduction

4. Enterobacter Cloacae
It’s a oportunistic bacteria → in the human in digestive tract
Gender: Enterobacter
Species: E. Clocae
Gram negative Bacillus
Urinary tract infections, surgical wounds, bacteremia

5. May Result
Osteomyelitis
suppurative
arthritis
Intravenous
fluid
contaminant
Treatment
Carbapenem
(ertapenem,
imipenem and
meropenem)
Aminoglycoside
(gentamicin)
Resistant
cephalosporins
Enterobacter Cloacae

6. OXA - 48
Mechanism of pathogenic bacteria to
generate multi-resistance
A mutation in bacteria enables them
to produce an enzyme called BLA-
KPC
inactivates carbapenem antibiotics

7. OXA - 48
Usually found in infections → urinary tract, the respiratory tract and soft tissues
Symptoms
Sore
throat
Spread nausea
Fever sometimes reach up to 41 ° C
Vomiting Chills
Several
headaches

8. Beta-lactamase
Enzime responsable for the strength of
beta – lactam antibiotics
Penicilins, cephalosporins,
carbapenemases
Betalactam ring
The β-lactamase may be chromosomal
or plasmidic
Once kind of chromosomal is the CTX - M

9. CTX - M
Named for their
activity against
cefotaxime
ceftazidime,
ceftriaxone or
cefepime
More than 80 types
of CTX-M are
currently known
Salmonella enterica
serovar
typhimurium, E. coli,
Enterobacteriaceae

10. CTX-M-15
United
Kingdom
Prevalence
in E. Coli
2006

11. General purpose

12. General purpose
Report the
clinical and
genetic features
of 21 E. cloacae
isolates
producing CTX-
M-15, OXA-48
or both
which were
mainly
recovered
from critically
ill patients
in a Spanish
hospital
during a 1-
year period

13. Pacientes y métodos

15. MALDI - TOF
Matrix Assisted
Laser
Desorption
Ionization Time-
of-flight
Examina los
patrones de
proteínas
detectadas
directamente de
la batería intacta
Usado para la
confirmación
de la
identificación
bacteriana

16. MALDI - TOF
Procedimiento
Matriz → muestra analizada
Aplicada a una superficie de metal
Se irradia con luz láser
Matriz absorbe laser y vaporiza
durante ionización
Campos eléctricos guían iones y
separa por masas
Cantidad de cada ion determinada
→ detección

17. Concentración Mínima
Inhibitoria MIC
Concentración
mas baja de un
antimicrobiano
Inhibe
crecimiento del
microorganismo
después de su
incubación
confirmar la
resistencia de
microorganismos
a agente
antimicrobiano
monitorizar
actividad de
nuevos agentes
antimicrobianos

18. Usados para
determinación de los
“MIC" de ertapenem e
imipenem en
aislamientos
sospechosos de
producción de
carbapenemasas.
tiras de plástico, incorporan
un gradiente de
concentración de
antimicrobiano.
Se depositan sobre las placas
de agar inoculadas,
el antimicrobiano difunde en
el medio
en incubación, se determina
la CMI en el punto de
intersección de la elipse de
inhibición del crecimiento
Tiras de
Etest

19. Análisis de plásmidos PCR
Aumenta un
segmento especifico
con polimerasa y se
obtiene millones de
copias
Durante varios ciclos
repetidos en los que
la secuencia blanco
es copiado fielmente
Reacción enzimática
que amplifica
millones de veces
una secuencia de
ADN

20. PCR
Tiene tres pasos
Desnaturalización
Hibridación
Replicación
(síntesis)

21. PGFE
Pulsed Gel Field
Electroforesis
• Se usa corriente eléctrica controlada, con
la afinidad de separar biomoléculas según
su tamaño y carga eléctrica.
• Separa grandes fragmentos de DNA
induciendo su reorientación mediante
cambios periódicos en el campo eléctrico.

22. PGFE
Pulsed Gel Field
Electroforesis
• A mayor tamaño de los fragmentos a
separar, debe ser mayor la duración de los
campos aplicados.

23. PGFE
PGFE vs
Electroforesis
tradicional
• Su mayor diferencia radica en que los
fragmentos de DNA separados son de
mayor tamaño
Su diferencia
es por el
numero de
cámaras

24. MLST
Mide directamente los cambios en la secuencia de una serie de genes de
mantenimiento y caracteriza cepas mediante sus perfiles alélicos únicos.
Técnica consiste en amplificación mediante PCR seguida de la
secuenciación del ADN.
Se uso para aislamientos representativos con diferentes
perfiles de PFGE y para asignar tipos de secuencia (STS).

25. Resultados
Además de los Antibióticos B-Lactámicos, todos los aislamientos de
E.Cloacae fueron resistentes a otros grupos antimicrobiales.
Todos los aislamientos resistentes a Imipenem mostraron un plásmido.
La localización genética de blaCTX-M-15 y blaOXA-48 fue establecida por
análisis plasmìdico, hibridación y conjugación.

26. Tabla 2

27. Electroforesis
PFGE
Los plásmidos que hibridan
blaCTX-M-15 → flecha
blaOXA-48 → *
Λ Escalera PFG Marker
β ADN de Salmonella entérica
serovar Braenderup
9
15
15-CRO
15-ERT
15-ERT
15-ERT
10
8
10-ERT
10
6
9
8
3
5
7

28. Dendrograma de
similitud
Relación de los perfiles, aislados de cada perfil,
sala del hospital y edificio donde se
recogieron.
Genes relevantes y plásmidos portados por
cada aislado.
Clusters I y II comprenden ST74 (clon 1) ST78
(positivo para blaOXA-48) y ST66 (clon 2,
positivo para blaCTX-M-15 ± blaOXA-48).
X, XbaI perfil; ST, tipo de secuencia; UCI, unidad de cuidados intensiv|os; Inc, grupo de incompatibilidad; S,
coeficiente de Jaccard de similitud

29. Discussion
The ST74 clone consisted of carbapenem resistant isolates
carrying the blaOXA-48 gene.
Isolates belonging to clone 2 also carried the blaOXA-48
plasmid, producing Enterobacteria cloacae circulating in
the hospital.
None of these clones had been previously associated with
OXA-48 production.

30. Montero I, Fleites A,
Fernandez J, et al.
“Noticeably some isolates
belonging to clone 2 also
carried the blaOXA-48
plasmid, which could have
been acquired from other
OXA-48 producing
enterobacteriaceae
circulating in the hospital.

31. Adler A, Solter E, Masarwa
S, et al.
“This is the first outbreak
caused by OXA-48
producing E. Cloacae
reported in Europe, but a
previous outbreak has
been noticed in a neonatal
ICU in Jerusalem”.

32. Pasanen T, Jalava J, Horsma
J, et al.
“Additional outbreaks of E.
Cloacae producing CTX-
M15 have occurred in a
new born ICU in Spain as
well as in children`s
hospital in Finland”.

33. Girlich D, Poirel L, Izdebski
R, et al.
“Most E. Cloacae reported
in this study were assigned
to STs previously
associated with ESBL and
cambapenemase
producers and considered
as high risk international
clones (ST45, ST66, ST74
and ST78) with the latter
two belonging to the same
clonal complex”.

34. Personal conclusions
This investigation was necessary to let the people now more about intrahospital
infections caused by a Bacteria. It is a common reality we do not know much about;
That`s why it is so importante to find the reason of this situations through
investigation processes.
Understanding some of the mechanisms this bacteria related with nosocomial
infections use, give us information to implement a better control and treatment
strategy with the purpose of reducing associated complications in the future.
Carolina Cardona Tobón

35. Personal Conclusion
This type of research allows us to
know by an infectious agent,
bacteria, ways of how resistance
occurs and these can develop
through interaction with others of
the same species but are able to
fight other antibiotics, confirming
the existence of bacterial
resistance.
We must know what is bacterial
resistance that patients have. to
also avoid interacting with others
who may have other bacteria
capable of fighting other
antibiotics and not a bacteria
that can not be treated forms
Jerónimo Buriticá G.

36. Carolina Cardona Tobón

37. Jerónimo Buriticá G.

38. Bibliografía
• Andrews, J. M. Determination of minimum inhibitory concentrations. Journal of
Antimicrobial Chemotherapy 48 (Suppl. 1):5-16, (2001)
• Fernández J, et al. Disemination of multiresistant Enterobacter Cloace isolates
producing OXA-48 and CTX-M-15 in a Spanish hospital. Int J Antimicrob Agents
(2015), http://dx.doi.org/10.1016/j.ijantimicag.2015.07.003
• Martínez, L.M. Biología Molecular. Universidad Pontificia Bolivariana. 8va edición.
Medellín. 2015

39. ¡Gracias!