Este documento describe una estrategia para construir vectores que codifiquen una secuencia líder de la cadena liviana kappa para generar anticuerpos monoclonales quiméricos anti-TNF-α humano. Se clonará la secuencia líder kappa en vectores pcDNA y pIgCH-16 para permitir la inserción posterior de la región variable del anticuerpo monoclonal murino anti-TNF-α. Esto permitirá expresar un anticuerpo quimérico de bajo costo para tratar la artritis reumatoide.
La inmunofluorescencia es una técnica inmunohistoquímica que utiliza fluoróforos como sistema de detección bajo un microscopio de fluorescencia o confocal. Los fluoróforos emiten luz a una longitud de onda mayor después de ser excitados. Se pueden usar en muestras de células en cultivo, tejidos fijados e incluidos en parafina, y proporciona resultados rápidos aunque con baja sensibilidad.
El documento habla sobre diferentes tipos de bacterias que se pueden encontrar en muestras vaginales, incluyendo Lactobacilos, Bacilos de Döderlein, Mobiluncus spp., Gardnerella vaginalis y Fusobacterium spp. También menciona la presencia del gonococo.
Las infecciones por Campylobacter son zoonóticas y se contraen principalmente por el consumo de alimentos o agua contaminados, especialmente productos de aves de corral. Los síntomas incluyen diarrea, fiebre y dolor abdominal. En algunos casos puede causar el síndrome de Guillain-Barré o artritis reactiva. Su diagnóstico requiere el cultivo de muestras fecales en medios selectivos e incubación a 42°C.
Son icosadeltaedros regulares no envueltos.
Miden de 65-80 nm de diámetro
La cápside formada por 252 capsómeros se divide en 240 hexones que forman las caras triangulares equiláteras y 12 pentones ubicados en los vértices, de los cuales se proyecta una fibra.
La fibra es responsable de la unión a la célula diana.
E. Coli O157:H7 es una cepa de la bacteria Escherichia Coli que puede ocasionar enfermedades graves como el síndrome urémico hemolítico. Se encuentra principalmente en los intestinos de animales de granja y su transmisión a humanos ocurre a través de alimentos contaminados o agua no tratada. Los síntomas incluyen diarrea sanguinolenta o sin sangre, calambres abdominales y poca fiebre.
Los glóbulos rojos lavados con cloruro de sodio pueden ser usados cuando los hematíes pobres en leucocitos no son efectivos para prevenir reacciones febriles transfusionales no hemolíticas.
La tinción de Gram permite diferenciar bacterias en dos grupos principales mediante la observación microscópica después de la tinción. Las bacterias Gram-positivas retienen el colorante cristal violeta y se tiñen de azul, mientras que las bacterias Gram-negativas pierden el colorante durante el proceso y se tiñen de rosa. Esta diferenciación se debe a las diferencias estructurales en la pared celular de las bacterias.
El documento describe varios sistemas sanguíneos importantes clínicamente como Kell, Duffy y Kidd. Explica los antígenos y anticuerpos de cada sistema, incluyendo su descubrimiento, ubicación, importancia clínica y mecanismos. También cubre otros sistemas como MNSs, Lewis, Lutheran y P en menor detalle.
La inmunofluorescencia es una técnica inmunohistoquímica que utiliza fluoróforos como sistema de detección bajo un microscopio de fluorescencia o confocal. Los fluoróforos emiten luz a una longitud de onda mayor después de ser excitados. Se pueden usar en muestras de células en cultivo, tejidos fijados e incluidos en parafina, y proporciona resultados rápidos aunque con baja sensibilidad.
El documento habla sobre diferentes tipos de bacterias que se pueden encontrar en muestras vaginales, incluyendo Lactobacilos, Bacilos de Döderlein, Mobiluncus spp., Gardnerella vaginalis y Fusobacterium spp. También menciona la presencia del gonococo.
Las infecciones por Campylobacter son zoonóticas y se contraen principalmente por el consumo de alimentos o agua contaminados, especialmente productos de aves de corral. Los síntomas incluyen diarrea, fiebre y dolor abdominal. En algunos casos puede causar el síndrome de Guillain-Barré o artritis reactiva. Su diagnóstico requiere el cultivo de muestras fecales en medios selectivos e incubación a 42°C.
Son icosadeltaedros regulares no envueltos.
Miden de 65-80 nm de diámetro
La cápside formada por 252 capsómeros se divide en 240 hexones que forman las caras triangulares equiláteras y 12 pentones ubicados en los vértices, de los cuales se proyecta una fibra.
La fibra es responsable de la unión a la célula diana.
E. Coli O157:H7 es una cepa de la bacteria Escherichia Coli que puede ocasionar enfermedades graves como el síndrome urémico hemolítico. Se encuentra principalmente en los intestinos de animales de granja y su transmisión a humanos ocurre a través de alimentos contaminados o agua no tratada. Los síntomas incluyen diarrea sanguinolenta o sin sangre, calambres abdominales y poca fiebre.
Los glóbulos rojos lavados con cloruro de sodio pueden ser usados cuando los hematíes pobres en leucocitos no son efectivos para prevenir reacciones febriles transfusionales no hemolíticas.
La tinción de Gram permite diferenciar bacterias en dos grupos principales mediante la observación microscópica después de la tinción. Las bacterias Gram-positivas retienen el colorante cristal violeta y se tiñen de azul, mientras que las bacterias Gram-negativas pierden el colorante durante el proceso y se tiñen de rosa. Esta diferenciación se debe a las diferencias estructurales en la pared celular de las bacterias.
El documento describe varios sistemas sanguíneos importantes clínicamente como Kell, Duffy y Kidd. Explica los antígenos y anticuerpos de cada sistema, incluyendo su descubrimiento, ubicación, importancia clínica y mecanismos. También cubre otros sistemas como MNSs, Lewis, Lutheran y P en menor detalle.
Ensayos de las vias de inoculación del huevo fértil Víctor Bravo P
Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven como telaraña
venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se desplaza un punto negro intermitente (el ojo).
Este documento resume los conceptos básicos de inmunología e inmunofluorescencia y describe sus aplicaciones en pruebas diagnósticas como la detección de anticuerpos contra SARS-CoV-2 y el análisis de procalcitonina. También analiza la correlación entre un kit de prueba de inmunofluorescencia y un método estándar de oro y concluye que el kit de prueba cumple con los requisitos clínicos.
Este documento describe la taxonomía y características de Salmonella. Salmonella pertenece al reino bacteria, filo Proteobacteria, clase Gammaproteobacteria, y género Salmonella. Contiene varias especies patógenas como S. typhi, S. paratyphi, y S. typhimurium. Salmonella causa infecciones al invadir el intestino delgado y migrar a los ganglios linfáticos y órganos internos. Los síntomas incluyen fiebre, diarrea e inflamación intestinal. El diagnóstico se
The document discusses different types of vaccines, including live attenuated vaccines, inactivated vaccines, subunit vaccines, recombinant viral protein vaccines, synthetic peptide vaccines, anti-idiotype antibodies vaccines, and DNA vaccines. It provides details on how each type of vaccine is produced and advantages and disadvantages of each approach. Key points covered include methods used to attenuate viruses for live vaccines, challenges with developing inactivated vaccines, use of recombinant DNA technology to produce subunit and viral protein vaccines, and potential of DNA vaccines which directly inject DNA coding for antigens.
El documento proporciona una breve historia de la microbiología, desde los primeros estudios de Hipócrates y Avicena sobre enfermedades infecciosas hasta los descubrimientos más recientes en biología molecular. Detalla los principales hitos y descubridores en el campo, como Pasteur, Koch, Fleming y Gallo. Finalmente, aborda la automatización en microbiología y los desafíos actuales de la resistencia a los antimicrobianos.
Aislamiento e identificación de Bacillus y Clostridium.pdfDavidChavezEncalada
Este documento presenta los resultados de un experimento para aislar e identificar las bacterias Bacillus anthracis y Clostridium tetani a partir de muestras de suelo y estiércol. Se logró cultivar ambas bacterias y caracterizar sus colonias y morfología mediante tinción de Gram. Se realizaron pruebas bioquímicas como catalasa, fermentación de carbohidratos y reducción de nitratos para identificar cada bacteria. Los resultados coincidieron con las descripciones de los géneros en manuales, confirmando la identificación de B. anth
La prueba de Coombs se utiliza para detectar anticuerpos unidos a los glóbulos rojos. Fue descrita originalmente en 1908 y luego desarrollada en 1945 por Coombs, Mourant y Race para detectar anticuerpos no aglutinantes anti-Rh en suero. La prueba utiliza un suero policlonal o monoclonal que contiene anticuerpos contra IgG o complemento C3b para causar aglutinación si están presentes en la superficie de los glóbulos rojos, lo que indica enfermedades como la enfermedad hemolí
La proteína C reactiva (PCR) es una proteína producida en el hígado en respuesta a procesos inflamatorios o infecciosos. Tiene una estructura pentamérica que se une al calcio y le permite reconocer una amplia gama de patógenos. Los niveles elevados de PCR se usan como marcador de enfermedades inflamatorias o infecciosas agudas, así como de riesgo cardiovascular.
La bacteria Helicobacter pylori es una causa común de enfermedades gastrointestinales que se ha detectado en un alto porcentaje de la población del departamento de Boaco, Nicaragua. Si no se trata a tiempo, esta bacteria puede provocar úlceras pépticas, gastritis crónica e incluso cáncer gástrico. La investigación analiza los métodos de diagnóstico, factores de riesgo y consecuencias de esta bacteria con el fin de crear conciencia sobre sus efectos perjudiciales y la importancia de su detección y tratamiento tempranos
1) El documento describe las características de varios géneros de poxvirus, incluyendo orthopoxvirus, molluscipoxvirus, parapoxvirus, y avipoxvirus. 2) Explica cómo la viruela fue una enfermedad devastadora que llevó al desarrollo de una vacuna exitosa contra la misma, logrando su erradicación. 3) Señala que el conocimiento y herramientas desarrolladas para la vacuna contra la viruela han sido útiles para vacunas contra nuevas enfermedades.
Este documento presenta los procedimientos para determinar los niveles de triglicéridos y lipoproteínas de alta densidad (HDL) en suero a través de métodos colorimétricos enzimáticos. Incluye la introducción, objetivo, procedimiento, interpretación, cálculos y formatos para reportar los resultados para cada prueba. El procedimiento describe los pasos para extraer la muestra de suero, mezclarla con reactivos, medir la absorbancia, e interpretar y calcular los niveles de lípidos basados en las lecturas
Este manual proporciona instrucciones para la solución de problemas y el mantenimiento del analizador hematológico automatizado XN-L series XN-550/XN-450/XN-350. Incluye una lista de mensajes de error, causas y acciones correctoras, tareas de mantenimiento, procedimientos de calibración, e información sobre historiales.
Laboratorio Clínico en el Diagnóstico de Enfermedades ViralesMZ_ ANV11L
1) El documento describe varios métodos de laboratorio para el diagnóstico de enfermedades virales, incluyendo cultivos celulares, detección de antígenos y ácidos nucleicos, y serología. 2) Describe los virus que contienen ADN y ARN, así como varios virus específicos como el virus de la hepatitis C, dengue, fiebre amarilla e influenza. 3) Explica los procedimientos para la recolección y transporte de muestras, así como los métodos para el diagnóstico de estas enfermedades virales.
Este documento presenta información sobre técnicas de aglutinación y sus aplicaciones clínicas. Describe los materiales y métodos utilizados, incluidos los procedimientos para determinar factor reumatoideo y grupo sanguíneo. Los resultados muestran que una muestra tenía factor reumatoideo con un título mayor que 1/16 y que el grupo sanguíneo del autor era O Rh+. Concluye destacando la importancia de estas pruebas para el diagnóstico de patologías inmunológicas.
El documento describe dos métodos de inhibición de aglutinación. La inhibición de la aglutinación de eritrocitos recubiertos con antígeno por el antígeno homólogo soluble es un método para identificar pequeñas cantidades de antígeno en la sangre o tejidos. La hemaglutinación viral involucra la aglutinación espontánea de eritrocitos por ciertos virus y puede inhibirse específicamente con anticuerpos antivirales. Ambos métodos utilizan la inhibición de aglutinación para identificar la presencia de
Presentación de Microbiología, Antecedentes y Metodoligia para la práctica de Embrión de Pollo, Fes Zaragoza, UNAM.
Cualquier duda, aclaración , comentario y sugerencia favor de dejar su comentario .
Este documento describe el género Salmonella, un bacilo gramnegativo que causa salmonelosis. Pertenece a la familia Enterobacteriaceae y puede causar fiebre tifoidea, infecciones sistémicas y diarrea. Se transmite por alimentos o agua contaminados y sus síntomas incluyen fiebre, náuseas y diarrea. El tratamiento incluye antibióticos como ciprofloxacina. La prevención requiere higiene alimentaria y personal adecuadas.
El documento describe las pruebas de aglutinación, que permiten detectar la presencia de anticuerpos en la sangre mediante la aglutinación de antígenos y anticuerpos. Estas pruebas se utilizan para diagnosticar infecciones pasadas o presentes, investigar problemas del sistema inmunológico y determinar la compatibilidad sanguínea. Existen pruebas directas e indirectas que involucran la unión de partículas a antígenos o anticuerpos.
Compatibilidad De Grupos SanguíNeos En Banco De SangreArmonía Aguilar
El documento describe los sistemas de grupos sanguíneos más importantes (ABO y Rh) y las pruebas de compatibilidad realizadas en los bancos de sangre para asegurar que la sangre transfundida sea compatible con el receptor. Explica que los antígenos de los grupos sanguíneos son moléculas de carbohidratos en la superficie de los glóbulos rojos y que la presencia o ausencia de anticuerpos determina la compatibilidad. También resalta la importancia de realizar pruebas cruzadas para detectar
Escherichia coli es una bacteria Gram negativa que puede causar diversas enfermedades como diarrea. Existen diferentes cepas de E. coli como la enteropatógena, enteroinvasiva, enterohemorrágica, enteroagregativa y enterotoxigénica que se distinguen por su epidemiología, cuadros clínicos y métodos de diagnóstico. La clasificación, características y factores de virulencia de estas cepas se describen en el documento.
El documento describe la historia, estructura y aplicaciones de los anticuerpos monoclonales. Explica que los anticuerpos monoclonales son producidos por hibridomas resultantes de la fusión de linfocitos B con células tumorales, lo que genera células capaces de producir anticuerpos específicos contra un solo antígeno. Debido a su alta especificidad, los anticuerpos monoclonales se usan comúnmente en el diagnóstico médico y la detección de enfermedades. También se han empezado a utilizar
Este documento describe los anticuerpos monoclonales, incluyendo su descubrimiento por George Kohler y Cesar Milstein en los años 1970. Explica que los anticuerpos monoclonales son producidos por células híbridas llamadas hibridomas que fusionan células B con células de mieloma. También resume los diferentes tipos de anticuerpos monoclonales y sus aplicaciones en el diagnóstico de enfermedades, detección de tumores, trasplantes de órganos y tratamiento de enfermedades autoinmunes y cáncer
Ensayos de las vias de inoculación del huevo fértil Víctor Bravo P
Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven como telaraña
venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se desplaza un punto negro intermitente (el ojo).
Este documento resume los conceptos básicos de inmunología e inmunofluorescencia y describe sus aplicaciones en pruebas diagnósticas como la detección de anticuerpos contra SARS-CoV-2 y el análisis de procalcitonina. También analiza la correlación entre un kit de prueba de inmunofluorescencia y un método estándar de oro y concluye que el kit de prueba cumple con los requisitos clínicos.
Este documento describe la taxonomía y características de Salmonella. Salmonella pertenece al reino bacteria, filo Proteobacteria, clase Gammaproteobacteria, y género Salmonella. Contiene varias especies patógenas como S. typhi, S. paratyphi, y S. typhimurium. Salmonella causa infecciones al invadir el intestino delgado y migrar a los ganglios linfáticos y órganos internos. Los síntomas incluyen fiebre, diarrea e inflamación intestinal. El diagnóstico se
The document discusses different types of vaccines, including live attenuated vaccines, inactivated vaccines, subunit vaccines, recombinant viral protein vaccines, synthetic peptide vaccines, anti-idiotype antibodies vaccines, and DNA vaccines. It provides details on how each type of vaccine is produced and advantages and disadvantages of each approach. Key points covered include methods used to attenuate viruses for live vaccines, challenges with developing inactivated vaccines, use of recombinant DNA technology to produce subunit and viral protein vaccines, and potential of DNA vaccines which directly inject DNA coding for antigens.
El documento proporciona una breve historia de la microbiología, desde los primeros estudios de Hipócrates y Avicena sobre enfermedades infecciosas hasta los descubrimientos más recientes en biología molecular. Detalla los principales hitos y descubridores en el campo, como Pasteur, Koch, Fleming y Gallo. Finalmente, aborda la automatización en microbiología y los desafíos actuales de la resistencia a los antimicrobianos.
Aislamiento e identificación de Bacillus y Clostridium.pdfDavidChavezEncalada
Este documento presenta los resultados de un experimento para aislar e identificar las bacterias Bacillus anthracis y Clostridium tetani a partir de muestras de suelo y estiércol. Se logró cultivar ambas bacterias y caracterizar sus colonias y morfología mediante tinción de Gram. Se realizaron pruebas bioquímicas como catalasa, fermentación de carbohidratos y reducción de nitratos para identificar cada bacteria. Los resultados coincidieron con las descripciones de los géneros en manuales, confirmando la identificación de B. anth
La prueba de Coombs se utiliza para detectar anticuerpos unidos a los glóbulos rojos. Fue descrita originalmente en 1908 y luego desarrollada en 1945 por Coombs, Mourant y Race para detectar anticuerpos no aglutinantes anti-Rh en suero. La prueba utiliza un suero policlonal o monoclonal que contiene anticuerpos contra IgG o complemento C3b para causar aglutinación si están presentes en la superficie de los glóbulos rojos, lo que indica enfermedades como la enfermedad hemolí
La proteína C reactiva (PCR) es una proteína producida en el hígado en respuesta a procesos inflamatorios o infecciosos. Tiene una estructura pentamérica que se une al calcio y le permite reconocer una amplia gama de patógenos. Los niveles elevados de PCR se usan como marcador de enfermedades inflamatorias o infecciosas agudas, así como de riesgo cardiovascular.
La bacteria Helicobacter pylori es una causa común de enfermedades gastrointestinales que se ha detectado en un alto porcentaje de la población del departamento de Boaco, Nicaragua. Si no se trata a tiempo, esta bacteria puede provocar úlceras pépticas, gastritis crónica e incluso cáncer gástrico. La investigación analiza los métodos de diagnóstico, factores de riesgo y consecuencias de esta bacteria con el fin de crear conciencia sobre sus efectos perjudiciales y la importancia de su detección y tratamiento tempranos
1) El documento describe las características de varios géneros de poxvirus, incluyendo orthopoxvirus, molluscipoxvirus, parapoxvirus, y avipoxvirus. 2) Explica cómo la viruela fue una enfermedad devastadora que llevó al desarrollo de una vacuna exitosa contra la misma, logrando su erradicación. 3) Señala que el conocimiento y herramientas desarrolladas para la vacuna contra la viruela han sido útiles para vacunas contra nuevas enfermedades.
Este documento presenta los procedimientos para determinar los niveles de triglicéridos y lipoproteínas de alta densidad (HDL) en suero a través de métodos colorimétricos enzimáticos. Incluye la introducción, objetivo, procedimiento, interpretación, cálculos y formatos para reportar los resultados para cada prueba. El procedimiento describe los pasos para extraer la muestra de suero, mezclarla con reactivos, medir la absorbancia, e interpretar y calcular los niveles de lípidos basados en las lecturas
Este manual proporciona instrucciones para la solución de problemas y el mantenimiento del analizador hematológico automatizado XN-L series XN-550/XN-450/XN-350. Incluye una lista de mensajes de error, causas y acciones correctoras, tareas de mantenimiento, procedimientos de calibración, e información sobre historiales.
Laboratorio Clínico en el Diagnóstico de Enfermedades ViralesMZ_ ANV11L
1) El documento describe varios métodos de laboratorio para el diagnóstico de enfermedades virales, incluyendo cultivos celulares, detección de antígenos y ácidos nucleicos, y serología. 2) Describe los virus que contienen ADN y ARN, así como varios virus específicos como el virus de la hepatitis C, dengue, fiebre amarilla e influenza. 3) Explica los procedimientos para la recolección y transporte de muestras, así como los métodos para el diagnóstico de estas enfermedades virales.
Este documento presenta información sobre técnicas de aglutinación y sus aplicaciones clínicas. Describe los materiales y métodos utilizados, incluidos los procedimientos para determinar factor reumatoideo y grupo sanguíneo. Los resultados muestran que una muestra tenía factor reumatoideo con un título mayor que 1/16 y que el grupo sanguíneo del autor era O Rh+. Concluye destacando la importancia de estas pruebas para el diagnóstico de patologías inmunológicas.
El documento describe dos métodos de inhibición de aglutinación. La inhibición de la aglutinación de eritrocitos recubiertos con antígeno por el antígeno homólogo soluble es un método para identificar pequeñas cantidades de antígeno en la sangre o tejidos. La hemaglutinación viral involucra la aglutinación espontánea de eritrocitos por ciertos virus y puede inhibirse específicamente con anticuerpos antivirales. Ambos métodos utilizan la inhibición de aglutinación para identificar la presencia de
Presentación de Microbiología, Antecedentes y Metodoligia para la práctica de Embrión de Pollo, Fes Zaragoza, UNAM.
Cualquier duda, aclaración , comentario y sugerencia favor de dejar su comentario .
Este documento describe el género Salmonella, un bacilo gramnegativo que causa salmonelosis. Pertenece a la familia Enterobacteriaceae y puede causar fiebre tifoidea, infecciones sistémicas y diarrea. Se transmite por alimentos o agua contaminados y sus síntomas incluyen fiebre, náuseas y diarrea. El tratamiento incluye antibióticos como ciprofloxacina. La prevención requiere higiene alimentaria y personal adecuadas.
El documento describe las pruebas de aglutinación, que permiten detectar la presencia de anticuerpos en la sangre mediante la aglutinación de antígenos y anticuerpos. Estas pruebas se utilizan para diagnosticar infecciones pasadas o presentes, investigar problemas del sistema inmunológico y determinar la compatibilidad sanguínea. Existen pruebas directas e indirectas que involucran la unión de partículas a antígenos o anticuerpos.
Compatibilidad De Grupos SanguíNeos En Banco De SangreArmonía Aguilar
El documento describe los sistemas de grupos sanguíneos más importantes (ABO y Rh) y las pruebas de compatibilidad realizadas en los bancos de sangre para asegurar que la sangre transfundida sea compatible con el receptor. Explica que los antígenos de los grupos sanguíneos son moléculas de carbohidratos en la superficie de los glóbulos rojos y que la presencia o ausencia de anticuerpos determina la compatibilidad. También resalta la importancia de realizar pruebas cruzadas para detectar
Escherichia coli es una bacteria Gram negativa que puede causar diversas enfermedades como diarrea. Existen diferentes cepas de E. coli como la enteropatógena, enteroinvasiva, enterohemorrágica, enteroagregativa y enterotoxigénica que se distinguen por su epidemiología, cuadros clínicos y métodos de diagnóstico. La clasificación, características y factores de virulencia de estas cepas se describen en el documento.
El documento describe la historia, estructura y aplicaciones de los anticuerpos monoclonales. Explica que los anticuerpos monoclonales son producidos por hibridomas resultantes de la fusión de linfocitos B con células tumorales, lo que genera células capaces de producir anticuerpos específicos contra un solo antígeno. Debido a su alta especificidad, los anticuerpos monoclonales se usan comúnmente en el diagnóstico médico y la detección de enfermedades. También se han empezado a utilizar
Este documento describe los anticuerpos monoclonales, incluyendo su descubrimiento por George Kohler y Cesar Milstein en los años 1970. Explica que los anticuerpos monoclonales son producidos por células híbridas llamadas hibridomas que fusionan células B con células de mieloma. También resume los diferentes tipos de anticuerpos monoclonales y sus aplicaciones en el diagnóstico de enfermedades, detección de tumores, trasplantes de órganos y tratamiento de enfermedades autoinmunes y cáncer
Los anticuerpos monoclonales son proteínas producidas por un clon de células híbridas creadas mediante la fusión de linfocitos B y células tumorales. Se diseñan para atacar un antígeno específico y se usan para tratar enfermedades como el cáncer. Su producción a gran escala requiere cultivar células modificadas genéticamente en biorreactores para purificar y concentrar los anticuerpos. Han revolucionado el diagnóstico y tratamiento médico al sustituir a los sueros policlonales
Los anticuerpos monoclonales son proteínas producidas por linfocitos B que se unen de forma específica a antígenos. Se han aprobado 29 anticuerpos monoclonales por la FDA. Se producen mediante la hibridación de células mieloma con linfocitos B para generar clones que secretan un único anticuerpo. Existen técnicas para generar anticuerpos monoclonales completamente humanos usando bibliotecas de genes de fragmentos variables clonados en bacterias o producidos en ratones transgénicos.
Estas enzimas reciben su nombre por su especial actividad contra la cefotaxima, así como otros substratos betalactámicos como ceftazidima, ceftriaxona, o cefepime. Este genotipo es un buen ejemplo de betalactamasas cromosómicas, encontradas normalmente en especies de "Kluyvera", un grupo relativamente raro de patógenos comensales. Estas enzimas no están muy relacionadas con las TEM o SHV, ya que solo muestran un 40% de identidad con las mismas. Se conocen actualmente más de 80 tipos de CTX-M, de las cuales algunas son más activas contra ceftazidima que contra cefotaxima. Además, se han encontrado en cepas de Salmonella enterica serovar typhimurium y en E.coli, pero también han sido descritas en otras especies de Enterobacteriaceae y son la BLEE predominante en algunas partes de Suramérica, hallándose también en Europa del Este, siendo los tipos CTX-M-14, CTX-M-3, y CTX-M-2 los más habituales. CTX-M-15 es, desde el 2006 el tipo de BLEE con mayor prevalencia en aislamientos de E.coli en el Reino Unido.13
Moléculas del complejo principal de histocompatibilidad y
presentación del antígeno a los linfocitos T - Receptores
inmunitarios y transducción de señales
Este documento describe los mecanismos de la inmunidad humoral mediada por anticuerpos y la inmunidad especializada en las barreras epiteliales y tejidos. Explica que la inmunidad humoral involucra la producción de anticuerpos por las células B con la ayuda de las células T, y que estos anticuerpos ayudan a eliminar patógenos extracelulares. También describe que las barreras epiteliales como la piel y las mucosas tienen características inmunológicas especializadas, como células dendríticas
Tratamiento de las enfermedades genéticas y terapia genética. EdgarEmilioOrellana
Este documento resume diferentes aplicaciones de la terapia génica para tratar varias enfermedades. Describe cómo se ha utilizado con éxito la terapia génica para tratar la inmunodeficiencia combinada grave, la hemofilia, la fibrosis quística y otras enfermedades como el cáncer, las alteraciones hepáticas, la diabetes, las enfermedades neurodegenerativas, la ceguera, el SIDA, la insuficiencia cardíaca y la arterosclerosis. También explora posibles aplicaciones futuras de la terapia génica
1. La biología molecular y la ingeniería genética son herramientas clave de la biotecnología que permiten aislar, modificar y transferir genes entre organismos para producir nuevos organismos, proteínas y alimentos.
2. Se han logrado avances como plantas y animales resistentes al estrés, leche enriquecida con proteínas humanas, y arroz dorado y enriquecido con vitaminas que ayudan a combatir la desnutrición.
3. Estas técnicas permiten manipular el ADN de manera
El documento presenta información sobre PaCeRiZu, quien es Regente de Farmacia y docente de Química y Farmacia. Además, analiza y asesora en droguerías y farmacias. Ha publicado artículos sobre educación, química y farmacia. Luego, explica brevemente sobre la respuesta inmune del organismo y las células involucradas como linfocitos B y T, anticuerpos y macrófagos. Finalmente, describe los tipos de anticuerpos monoclonales, sus aplicaciones terapéuticas
Citosinas en diferentes perspectivas médicas.LadyMendoza9
Este documento presenta información sobre las citoquinas y su papel en diferentes procesos médicos como la inflamación, sepsis, cáncer y retinopatía diabética. También describe las células asesinas naturales y las células asesinas inducidas por citoquinas (CIK), las cuales tienen actividad citotóxica contra tumores y pueden usarse en inmunoterapia contra el cáncer.
El documento describe los principales descubrimientos y avances en el campo de la ingeniería genética, incluyendo el descubrimiento del código genético, las técnicas de clonación molecular como la PCR y la electroforesis, el mapeo y secuenciación del genoma humano, y las aplicaciones de la ingeniería genética como la obtención de proteínas recombinantes, el desarrollo de plantas y animales transgénicos, y el potencial de la clonación terapéutica. También se mencionan algunos problemas éticos y
El documento describe la estructura y funciones de los anticuerpos. Explica que los anticuerpos están compuestos de cadenas pesadas y ligeras que les permiten unirse a antígenos de manera específica. También describe los cinco isotipos principales de anticuerpos (IgG, IgA, IgM, IgE e IgD) y sus funciones y semividas respectivas. Finalmente, explica cómo los anticuerpos interactúan con antígenos de manera afín y con avidez gracias a la complementariedad entre sus estructuras.
El documento resume los alcances del Proyecto Genoma Humano, incluyendo la identificación de 80,000 genes humanos y el mapeo del genoma completo entre 1990-2003. También describe aplicaciones como el diagnóstico de enfermedades, la terapia génica y la ingeniería genética en plantas y animales. Plantea preguntas éticas sobre las pruebas genéticas, la patentabilidad de la vida y los límites de la modificación genética humana.
Este documento resume los avances en la reprogramación celular a partir de células diferenciadas. En 2006, Kazutoshi Takahashi y Shinia Yamanaka demostraron que las células madre pluripotentes podían inducirse a partir de células somáticas usando cuatro factores de transcripción: Oct3/4, Sox2, Klf4 y c-Myc. Esto condujo al desarrollo de las células madre pluripotentes inducidas (iPSC), que son fenotípicamente indistinguibles de las células madre embrionarias
Similar a Construcción de Vectores para Generación de Anticuerpos Monoclonales Modificados por Ingeniería Genética (20)
Amyloid–carbon hybrid membranes for universal water purification Antonio E. Serrano
This document summarizes a study on using amyloid-carbon hybrid membranes for water purification. The membranes consist of amyloid protein fibrils assembled onto porous activated carbon. They are able to remove various heavy metal ions and radioactive waste from water 3 to 5 orders of magnitude more efficiently than current technologies. The membranes maintain high removal efficiency even after multiple reuse cycles and can purify water contaminated with several pollutants simultaneously. Additionally, valuable metals captured by the membranes can be recovered as nanoparticles or thin films.
Este documento habla sobre los artrópodos y su relación con las enfermedades. Explica que los artrópodos pueden ser agentes etiológicos de enfermedades o productores de reacciones alérgicas a través de picaduras, contacto o inhalación. También detalla que algunos artrópodos actúan como transmisores mecánicos o biológicos de enfermedades.
Curso de Microbiología - 18 - Anaerobios No esporuladosAntonio E. Serrano
Este documento describe varios tipos de anaerobios no esporulados, incluyendo bacterias gram positivas como Actinomyces israelii, Propionibacterium acnes y Peptostreptococos, y la bacteria gram negativa Bacteroides fragilis. También discute sitios comunes de infección como la cabeza, el cuello y el abdomen, así como características de las infecciones como tejidos necróticos y formación de gases. Finalmente, resume tres tipos principales de espiroquetas: Treponema, Borrelia y Leptos
Curso de Microbiología - 19 - Salmonella y MicobacteriumAntonio E. Serrano
Este documento describe varias bacterias patógenas, incluyendo Salmonella, Shigella, Yersinia y Mycobacterium. Detalla las características, síntomas y formas de transmisión de las enfermedades causadas por estas bacterias como la salmonelosis, shigelosis, peste y tuberculosis. También cubre el Bacillus anthracis y explica cómo causa el carbunco o ántrax.
Este documento presenta una introducción a la virología. Explica que los virus son parásitos intracelulares obligados compuestos de material genético rodeado de proteínas. Se clasifican en tres grupos dependiendo de la célula que infectan y varían en tamaño desde 20 nm a 300 nm. Describen la estructura de los virus incluyendo el material genético, la cápside, la envoltura, y las proteínas. También explican el ciclo de vida de los virus que involucra la adsorción, penetración, decaps
Este documento trata sobre diferentes tipos de infecciones virales. Brevemente describe las infecciones localizadas, inaparentes, diseminadas, latentes, crónicas y de transformación. Luego clasifica diversos virus según su estructura y material genético, describiendo brevemente familias como Parvoviridae, Hepadnaviridae, Papillomaviridae, Adenoviridae y Herpesviridae. Finalmente, resume conceptos sobre diagnóstico y tratamiento de infecciones virales.
El documento describe los diferentes tipos de infecciones virales (aguda, latente, crónica y lenta), las fases de la respuesta inmune antiviral, los mecanismos de evasión viral de la respuesta inmune como la variabilidad antigénica, y los roles de las células y moléculas del sistema inmune como los interferones, células NK, linfocitos T citotóxicos y anticuerpos en la respuesta a las infecciones virales. También discute cómo los virus pueden suprimir la respuesta inmune a través de me
Este documento describe las características generales de los hongos. Explica que los hongos pertenecen al reino Fungi y que se reproducen tanto sexualmente como asexualmente mediante esporas. También describe las estructuras fúngicas como las hifas, micelios y levaduras, y los diferentes tipos de esporas como conidios, ascospores y basidiosporas.
Este documento trata sobre micología médica. Describe las diferentes categorías de hongos que causan infecciones, incluyendo hongos superficiales, subcutáneos y profundos. Explica los métodos de diagnóstico micológico como examen microscópico, cultivo e identificación. También cubre los principales géneros de hongos como Candida, Aspergillus y Cryptococcus, así como los cuadros clínicos y tratamiento de candidiasis.
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El documento resume los principales protozoos intestinales, incluyendo amebas como Entamoeba histolytica, flagelados como Giardia lamblia, coccidios como Cryptosporidium parvum e Isospora belli. Describe las formas de vida, transmisión, manifestaciones clínicas, diagnóstico y tratamiento de cada uno de estos parásitos.
Curso de Microbiología - 27 - Protozoos no IntestinalesAntonio E. Serrano
1) T. vaginalis es un protozoo flagelado que causa tricomoniasis mediante la colonización de la vagina y uretra a través de la multiplicación por fisión binaria; 2) T. cruzi es el agente de la enfermedad de Chagas transmitida por vinchucas infectadas y puede afectar diversos órganos como el corazón; 3) La malaria es causada por parásitos del género Plasmodium transmitidos por la picadura de mosquitos infectados, pudiendo causar síntomas como fiebre y dolores
Este documento proporciona información sobre varios helmintos o parásitos intestinales. Describe las características, el ciclo de vida, los síntomas y el diagnóstico y tratamiento de ascaridiasis, anquilostomiasis, triquurisis, enterobiasis, teniasis, fascíolasis y equinococosis. Para cada parásito, detalla su distribución, forma de transmisión, localización en el huésped, manifestaciones clínicas, diagnóstico y medidas preventivas y de tratamiento.
Curso de Microbiología - 17 - Gram Negativos AnaerobiosAntonio E. Serrano
Este documento describe varias bacterias anaerobias gramnegativas y grampositivas, incluyendo Haemophilus, Bordetella, Legionella, Brucella, y Clostridium. Se proporciona información sobre su morfología, hábitats, patogenia, diagnóstico y epidemiología. En particular, se describe la importancia clínica de especies como H. influenzae, B. pertussis, L. pneumophila, y varias especies de Clostridium.
Curso de Microbiología - 16 - Corynebacterium y ListeriaAntonio E. Serrano
Corynebacterium y Listeria son géneros de bacterias gram positivas. Corynebacterium incluye especies como C. diphtheriae, que causa difteria, una enfermedad respiratoria grave. Listeria monocytogeneses una bacteria patógena que puede causar infecciones graves, especialmente en recién nacidos e inmunocomprometidos. Ambos géneros incluyen especies oportunistas que pueden causar infecciones en pacientes hospitalizados con sistemas inmunes debilitados.
Curso de Microbiología - 15 - No fermentadores aeróbicosAntonio E. Serrano
Este documento resume las características de varios no fermentadores aeróbicos importantes desde el punto de vista clínico, incluidos Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia y Acinetobacter baumannii. Estos patógenos oportunistas son bacilos gramnegativos que pueden causar infecciones pulmonares, de heridas y del tracto urinario. Se caracterizan por su resistencia a los antibióticos y su capacidad para causar infecciones nosocomiales.
Curso de Microbiología - 14 - Neisseria y EnterobacteriasAntonio E. Serrano
Este documento resume las características de los géneros Neisseria y Enterobacterias. Describe las especies más importantes de Neisseria como N. meningitidis, N. gonorrhoeae y M. catarrhalis, así como sus factores de virulencia, cuadros clínicos, diagnóstico y tratamiento. También describe las características generales de las Enterobacterias, los principales géneros patógenos como Escherichia, Klebsiella y Salmonella, y los factores que determinan su patogenicidad.
1) La familia Vibrionaceae incluye varios géneros de bacterias gramnegativas como Vibrio, Campylobacter, Helicobacter, Plesiomonas y Aeromonas. 2) Vibrio cholerae es la bacteria que causa el cólera y se transmite a través del agua y los alimentos contaminados, produciendo una diarrea profusa. 3) El diagnóstico y tratamiento del cólera dependen del cuadro clínico, cultivos y pruebas bioquímicas y serológicas.
Curso de Microbiología - 12 - Estreptococos y EnterococosAntonio E. Serrano
Este documento describe los géneros bacterianos Streptococcus y Enterococcus. Explica las características generales, clasificación, patogenicidad y cuadros clínicos asociados a las especies más comunes como S. pyogenes, S. pneumoniae, S. agalactiae y Enterococcus faecalis.
EL CÁNCER, ¿QUÉ ES?, TIPOS, ESTADÍSTICAS, CONCLUSIONESMariemejia3
El cáncer es una enfermedad caracterizada por el crecimiento descontrolado de células anormales en el cuerpo. Puede afectar a cualquier parte del organismo y su tratamiento varía según el tipo y la etapa de la enfermedad. Los factores de riesgo incluyen la genética, el estilo de vida y la exposición a ciertos agentes carcinógenos. Aunque el cáncer sigue siendo una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en el mundo, los avances en la detección temprana y el tratamiento han mejorado las tasas de supervivencia. La investigación continúa en busca de nuevas terapias y métodos de prevención. La concienciación sobre el cáncer es fundamental para promover estilos de vida saludables y fomentar la detección precoz.
La predisposición genética no garantiza que una persona desarrollará una enfermedad específica, sino que aumenta el riesgo en comparación con individuos que no tienen esa predisposición genética.
Sesión realizada por una EIR de Pediatría sobre aspectos clave de la valoración nutricional del paciente pediátrico en Oncología, y con tres mensajes para llevarse a casa:
- La evaluación del riesgo y la planificación del soporte nutricional deben formar parte de la planificación terapéutica global del paciente oncológico desde el principio.
- Existe suficiente evidencia científica de que una intervención nutricional adecuada es capaz de prevenir las complicaciones de la malnutrición, mejorar la calidad de vida como la tolerancia y respuesta al tratamiento y acortar la estancia hospitalaria.
- En los hospitales hay pocos dietistas que trabajen exclusivamente en la unidad de Oncología Pediátrica, y esto puede repercutir en mayores gastos sanitarios, peor estado general de los pacientes y menor supervivencia.
Patologia de la oftalmologia (parpados).pptSebastianCoba2
Presentación con información a la especialidad de la oftalmología.
Se encontrara información con respecto a las enfermedades encontradas cerca a los ojos (los parpados).
APOYAR A ENTERRITORIO EN LA GESTIÓN TERRITORIAL DEL PROYECTO “AMPLIACIÓN DE LA RESPUESTA NACIONAL AL VIH CON ENFOQUE DE VULNERABILIDAD", EN LA CIUDAD DE CARTAGENA Y SU ÁREA CONURBADA, PARA EL LOGRO DE LOS OBJETIVOS DEL ACUERDO DE SUBVENCIÓN NO. COL-H-ENTERRITORIO 3042 SUSCRITO CON EL FONDO MUNDIAL.
Terapia cinematográfica (6) Películas para entender los trastornos del neurod...JavierGonzalezdeDios
Los trastornos del neurodesarrollo comprenden un grupo heterogéneo de trastornos crónicos que se manifiestan en períodos tempranos de la niñez y que, en conjunto, comparten una alteración en la adquisición de habilidades cognitivas, motoras, del lenguaje y/o sociales que impactan significativamente en el funcionamiento personal, social y académico. Tienen su origen en la primera infancia o durante el proceso de desarrollo y comprende a heterogéneos procesos englobados bajo esta etiqueta.
El Manual diagnóstico y estadístico de los trastornos mentales en su quinta edición (DSM-V) incluye dentro los trastornos del neurodesarrollo los siguientes siete grupos: Discapacidad intelectual, Trastornos de la comunicación, Trastorno del espectro del autismo (TEA), Trastorno de atención con hiperactividad (TDAH), Trastornos específico del aprendizaje, Trastornos motores y Trastornos de tics. Es importante tener en cuenta que en una misma persona puede manifestarse más de un trastorno del neurodesarrollo. Y, dentro de todos los trastornos del neurodesarrollo, el autismo adquiere una especial importancia, por lo que será considerado en el próximo capítulo de la serie “Terapia cinematográfica” de forma particular.
Y esta gran diversidad también la ha reflejado en la gran pantalla y en las historias “de cine” que el séptimo arte nos ha regalado. Y hoy proponemos un recordatorio de la amplia variedad y complejidad de los trastornos del neurodesarrollo en la infancia a través de 7 películas argumentales. Estas películas son, por orden cronológico de estreno:
- El milagro de Ana Sullivan (The Miracle Worker, Arthur Penn, 1962) 6, para valorar el milagro de la palabra, el milagro del lenguaje y de los sentidos.
- Forrest Gump (Robert Zemeckis, 1994) 7, para comprender el valor de la lucha por encontrar cuál es la meta de cada uno, una mezcla de destino y sueños propios.
- Estrellas en la Tierra (Taare Zameen Par, Aamir Khan, 2007) 8, para confirmar que cada niño y niña es especial, incluso con sus potenciales deficiencias psíquicas, físicas y/o sensoriales.
- El primero de la clase (Front of the Class, Peter Werner, 2008) 9, para demostrar el valor de la superación y como, a pesar de nuestras dificultades, somos merecedores de oportunidades.
- Cromosoma 5 (María Ripoll, 2013) 10, para entender la soledad del corredor de fondo ante los trastornos del neurodesarrollo.
- Gabrielle (Louise Archambault, 2013) 11, para intentar normalizar las relaciones afectivas y amorosas entre dos personas con enfermedades mentales y discapacidad.
- Línea de meta (Paola García Costas, 2014) 12, para interiorizar que la carrera de la vida es especialmente difícil para algunos.
Siete películas argumentales que el séptimo arte nos presenta con protagonistas afectos con diferentes trastornos del neurodesarrollo durante su infancia, adolescencia y juventud y que nos ayudan a comprender que cada persona es especial, diversa y con capacidades diferenciales que hay que respetar y potenciar.
La enfermedad de Wilson es un trastorno genético autosómico recesivo que impide la eliminación adecuada del cobre del cuerpo, causando su acumulación en órganos como el hígado y el cerebro. Esto provoca síntomas hepáticos (hepatitis, cirrosis), neurológicos (temblores, rigidez muscular) y psiquiátricos (depresión, cambios de comportamiento). Se diagnostica mediante análisis de sangre, orina, biopsia hepática y pruebas genéticas, y se trata con medicamentos quelantes de cobre, zinc, una dieta baja en cobre y, en casos graves, trasplante de hígado.
La Sociedad Española de Cardiología (SEC) es una organización científica sin ánimo de lucro con la misión de reducir el impacto adverso de las enfermedades cardiovasculares y promover una mejor salud cardiovascular en la ciudadanía.
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Construcción de Vectores para Generación de Anticuerpos Monoclonales Modificados por Ingeniería Genética
1. Construcción De VectoresConstrucción De Vectores
Para Generación DePara Generación De
Anticuerpos MonoclonalesAnticuerpos Monoclonales
Modificados Por IngenieríaModificados Por Ingeniería
GenéticaGenética
T.M. Antonio Serrano
Alumno Doctorado en Bioquímica
Fac. Cs Químicas y Farmacéuticas
Universidad de Chile
2. Los anticuerpos monoclonales
Revolución Parda.
Balas Mágicas
Tecnología generada en
células fusionadas de
mieloma de ratón
HAMA “human anti-
mouse antibodies” Köhler y Milstein
4. Los monoclonales modificados
Características deletéreas de los llamados anticuerpos
monoclonales de primera generación
Acm murinos fueron modificados, originando moléculas
con mayor proporción de proteína humana en su
estructura, permitiendo que estos puedan ser utilizados
en inmunoterapias. Los llamados Anticuerpos
Monoclonales Modificados (AMM) aparecieron en
escena, en primer instancia como anticuerpos
quiméricos, luego los anticuerpos monoclonales
humanizados, y más recientemente los anticuerpos
monoclonales completamente humanos.
Gavilondo y Larrick, 2000; Brekke y Sandlie, 2003)
5.
6. PRODUCTO TIPO BLANCO INDICACIÓN APROBACIÓN
Abciximab (ReoPro®
) Quimérico Receptor de la
coagulación GPIIb/IIIa
en plaquetas
Anti-trombótico en
pacientes sometidos
a angioplastía
1994
Rituximab (Rituxan®
) Quimérico Molécula CD20 en
linfocitos B
Linfoma de linfocitos B y
no Hodgkin
1997
Daclizumab (Zenapax®
) Humanizado Cadena α del receptor de
IL-2 en linfocitos T
activados
Rechazo agudo de
transplante renal.
Beneficios en
transplante cardíaco
1997
Basiliximab (Simulect®
) Quimérico Cadena α del receptor de
IL-2 en linfocitos T
activados
Rechazo agudo de
transplante renal.
Beneficios en
transplante cardíaco
1998
Palivizumab (Synagis®
) Humanizado Proteína F del virus
sincicial respiratorio
(RSV)
Infección por RSV en niños 1998
Trastuzumab (Herceptin®
) Humanizado Receptor del factor
crecimiento
HER2/neu
Cáncer de mama
avanzado
1998
Infliximab (Remicade®
) Quimérico Factor de necrosis tumoral Artritis reumatoide,
enfermedad de Crohn
1998
Gentuzumab (Mylotarg®
) Humanizado Molécula CD33 en
progenitores
mieloides
Leucemia mieloide aguda
refractaria y
recidivante
2000
Alemtuzumab (Campath-1H®
) Humanizado Molécula CD52 en
linfocitos y monocitos
Linfoma y leucemia crónica
de linfocitos B
2001
Adalimumab (Humira®
) Completamente
humano
Factor de necrosis tumoral Artritis reumatoide 2003
Aguillón, 2005
7. En los anticuerpos quiméricos, los dominios variables antígeno-
específico, tanto de las cadenas livianas como de las cadenas
pesadas de la molécula de inmunoglobulina (Ig), son codificados
por genes de origen murino, mientras los dominios constantes
corresponden al producto de genes de origen humano.
Estas tecnologías permitieron que a fines de la década pasada
se realizasen numerosos ensayos clínicos investigando la eficacia
de los diversos anticuerpos quiméricos, con usos clínicos definidos
en el área de la oncología, reumatología y cardiología, por solo
nombrar algunos. Cada día aumentan los posibles blancos
moleculares de las patologías, augurando un promisorio campo de
aplicaciones e innovación en el área de los AMM.
8. La artritis reumatoide (AR)
Es una enfermedad sistémica auto-inmune heterogénea con un amplio
espectro de severidad clínica, que afecta a cerca del 1% de la población
chilena, según el Ministerio de Salud, que la declaró como una de las
enfermedades prioritarias del la política de Salud Pública. Se caracteriza
por inflamación crónica, dolorosa y progresiva de la membrana sinovial de
las articulaciones, conduciendo normalmente a una significativa
incapacidad por destrucción del cartílago y hueso articular, afectando
dramáticamente la calidad de vida. Es una enfermedad que va desde la
artritis leve hasta una forma invalidante que se caracteriza por tener altos
títulos de factor reumatoide y compromiso vital de otros órganos (Wicks et
al, 1994). La etiología y la patogénesis de la enfermedad son complejas y
no han sido completamente dilucidadas (Pincus et al., 1994; Breedveld
1998).Sin embargo se conoce que la sobre-expresión de TNF e IL-1
parecerían ser vitales, tanto en el proceso inflamatorio como en la ejecución
del daño articular (Brennan et al., 1992; Smolen y Steiner, 2003).
9. El TNF
El TNF, liberado principalmente por los macrófagos activados,
promueve la síntesis de otras citoquinas pro-inflamatorias; estimula a las células
endoteliales a expresar moléculas de adhesión que atraen a los leucocitos a las
articulaciones afectadas; acelera la producción de metaloproteinasas por los
macrófagos sinoviales, fibroblastos, osteoclastos y condrocitos, las cuales degradan
la matriz extracelular. Además, TNF suprime la síntesis de proteoglicanos del
cartílago (Choy y Panayi, 2001). Debido a las múltiples acciones mencionadas, es
que a TNF se le atribuye un papel más preponderante en la patogénesis de la AR
que el atribuido a otras citoquinas tales como IL-1. (Macnaul KL et al 1990)
En la actualidad existen AMM contra TNF-α disponibles en el comercio
internacional (Elliot MJ et al 1993). Entre estos destaca infliximab y adalimumab,
(Glennie MJ et al 2000)
los cuales han arrojado excelentes resultados en la disminución de los síntomas y la
progresión de la AR, presentando ventajas terapéuticas frente a drogas
convencionales. Sin embargo, el costo actual de estos anticuerpos, hace casi
imposible el uso de estas terapias en Chile. (Aguillón JC, et al 2003)
10. La estrategia
Hace algún tiempo en el Programa de Inmunología de la
Facultad de Medicina de la Universidad de Chile se
desarrolló el hibridoma G9, el cual es capaz de producir
un anticuerpo monoclonal murino contra Factor de
Necrosis Tumoral alfa (TNF-α) humano. (Aguirre A et al
2003)
En base a este anticuerpo monoclonal, se propuso
desarrollar un anticuerpo Químerico anti TNF-α humano,
en donde sólo las regiones variables de las cadenas
pesadas y livianas de la inmunoglobulina serian de
origen murino, mientras que las porciones constantes de
ambas cadenas son de origen humano.
11. La estrategia
Esquema de la estrategia a utilizar para el clonamiento de los
segmentos de una inmunoglobulina quimérica. Las cadenas
liviana y pesada de la inmunoglobulina son clonadas en
vectores de expresión diferentes, los cuales poseen los
segmentos constantes de origen humano (CH y CL) y solo la
región variable de origen murino de ambas cadenas (VH y VL).
Ambos vectores poseen genes de resistencia (R) a
antibióticos diferentes, que permitan la co-transfeccion y
selección de una línea celular productora de anticuerpos.
12. El método a utilizar se inicia con una amplificación de las secuencias de
DNA correspondientes a los genes que codifican las cadenas polipeptídicas
constantes CH y CL de Inmunoglobulinas humanas, mediante la técnica de
PCR. Paralelamente también se obtienen las secuencias líder de las
cadenas H y L, necesarias para su expresión en los sistemas eucariontes
de producción de inmunoglobulinas. Esto genera sitios de restricción entre
ambos insertos de DNA, lo cual permitirá el subclonamiento de las
secuencias DNA codificantes de las regiones variables de las cadenas H
(VH) y L (VL).
Para la elección de vectores de clonamiento de los genes constantes
de cadena H y L de Igs, es importante tener en cuenta que deben tener
diferentes genes de resistencia a antibióticos para células eucariontes, que
permitan un co-transfección. En este sentido, existen diversos vectores que
cumplen con este requisito, entre éstos pcDNA3.1 (Invitrogen, USA). Por
otro lado, para clonar el gen que codifica la cadena L, se obtendrá del
vector pSecTag (Invitrogen, USA) el cual tiene la secuencia líder de la
cadena L tipo κ.
13. Objetivos
OBJETIVOS
En nuestro laboratorio se ha clonado el gen que codifica la porción constante de la
inmunoglobulina G a partir de DNA de leucocitos de sangre periférica humana, en un vector
pcDNA3.1, el cual se nombró como pIgCH-16. De acuerdo a la estrategia, como resultado
intermediario, se requiere insertar en el mismo plásmido la porción líder de la cadena kappa,
para de esta forma permitir, en un sitio de clonamiento específico entre ambas regiones, la
inserción de la porción variable de la inmunoglobulina anti TNF murina, u otras porciones de
otros anticuerpos que se pudiesen quimerizar en el futuro
Además se pretende clonar en otro vector la cadena kappa solamente, de esta forma se
pudiese insertar otras cadenas constantes de otros isotipos de inmunoglobulinas como IgA o
IgE, de interés en variadas aplicaciones en medicina.
Objetivo general
Construir vectores plasmidiales que codifiquen la secuencia líder de la cadena liviana Kappa.
Objetivos específicos
.
Obtención de Cadena líder Kappa a partir del vector pSecTag.
Ligación de secuencia líder en vector pcDNA y pcCH-16
Secuenciación
14. Mat y met
MATERIALES Y MÉTODOS
Miniprep de purificación de plásmidos: De cultivos de bacterias se tomaron 3 ml y se concentraron en un tubo Eppendorf, centrifugando a 5000 rpm por 1 minuto. Se
utilizó un Kit para purificación de plásmidos (Qiagen, Germany), según instrucciones del fabricante. Se obtuvieron 50 ul finales de vector purificado, que fueron
almacenados a -20ºC para su posterior cuantificación.
Cuantificación de plásmido: Se realizó una digestión con la enzima de restricción EcoRI (BioLabs U.K) a partir de 0,5 μl de plásmido purificado, durante 37ºC por 2 horas,
para luego calcular la concentración del DNA utilizando un marcador de bajo peso molecular (Invitrogen, USA), en una electroforesis gel de agarosa al 1%. La cantidad
de plásmido cargado fue determinada en relación al marcador de tamaño de DNA Lambda/Hind III (Winkler, Chile)
Reacción en cadena de la Polimerasa para cadena líder Igk : Se ordenó la síntesis de una pareja de partidores. LidpSecF: AAAAGCGGCCGCCACCATGGAGACAGA y
el partidor complementario: LidpSecR: TTTTCGCCGGCGGTGGTACCTCTGTCT. (Alpha Labs, USA) Se utilizaron 5 unidades de Taq polimerasa (Promega, USA), 10
pmoles de cada uno de los partidores. En un termociclador (ThermoCycler Gradient, Thermo USA) se realizó denaturación por 2 minutos a 72ºC y 30 ciclos de: 1 minuto
de denaturacion a 94ºC, 30 segundos de alineamiento en gradiente de temperatura ,desde 45 a 55 ºC y 30 seg de elongación a 72ºC, para terminar con una elongación
final de 10 minutos a 72ºC. El producto de la reacción fue evaluado en gel de agarosa al 3 %, se cuantificó con respecto al marcador de tamaño de DNA 25 pb (Winkler,
Chile), utilizando densitometría de bandas mediante el software Scion Image.
Precipitación de productos de PCR: Se realizaron 10 reacciones de PCR, las cuales fueron mezcladas y concentradas en secadora Speed Vac (Perkin Elmer, USA) por
15 minutos a intensidad media hasta un volumen de 80 μl. Se agregó 0,1 volúmenes de acetato de sodio 3M y dos volúmenes de etanol absoluto frío, más 0,5 μl de
glicógeno 5 ng/μl, precipitando por 30 min a –80ºC. Luego se centrifugó a 13.000 rpm a 4 ºC por media hora. Se retiró el sobrenadante con pipeta y el pellet se dejo secar
a temperatura ambiente. Luego se agregaron 500 μl de etanol al 75% centrifugando por 2 minutos a 13.000. Se evaporó todo el etanol en baño a 37ºC, y se resuspendió
en 20 μl de agua ultra pura. Se cuantificó el proceso de precipitación en un gel al 3% agarosa.
Digestión con Enzimas de Restricción Not I y EcoRI: El vector de clonamiento pcDNA3.1(-), el plásmido pIgCH-16, que contiene la región constante de la cadena liviana
de la IgG1 humana y el fragmento que contiene la secuencia Líder de cadena Kappa, fueron cortados en reacciones independientes con las enzimas de restricción Not I (
Promega, USA )y EcoRI (BioLabs, UK) que en presencia de Buffer O (Promega, USA) en un volumen total de reacción de 25 μl por 2 horas a 37ºC. Luego para el
fragmento Lider Igk se realizó electroforesis en gel de agarosa al 3 % por 1 hora a 80 v. Mediante un bisturí fueron cortados los segmentos del gel que contenían los
fragmentos de interés visualizados por luz UV, para luego mediante congelación y descongelación de la agarosa puesta en un trozo de parafilm, tomar con pipeta el
eluído líquido del gel al descongelarlo con la presión de los dedos. Los productos de digestión plasmidiales fueron cuantificados en gel de agarosa al 1%. En el caso de la
purificación de fragmentos digeridos por electroforesis de los vectores, se realizó purificación del segmento mediante un kit para dichos fines. (Qiagen, Germany).
Reacción de Ligación: Después de la doble digestión con enzimas de restricción y su posterior cuantificación, el fragmento Líder Igk y los vectores de clonamiento, fueron
incubados en una relación molar 1:3 vector: inserto. En una reacción se utilizó Enzima T4 ligasa según las indicaciones del fabricante (Biolabs, UK).
Transformación de bacterias competentes: A la reacción resultante de la ligación fue agregada una alícuota de bacterias Escherichia coli DH5α previamente
descongeladas, se incubó por 30 min en hielo. Luego se indujo transformación a 42ºC por 1,5 min y se enfrió e hielo por 2 min. Luego se agrega 1 ml de SOC, se mezcla
y se incuba a 37 por 1 hora. Luego en placas Petri preparadas con agar LB con 200 ug/ml de ampicilina sólido fueron sembrados 100 μl de la transformación. Se crecen
colonias por 24 horas, se seleccionaron algunas y se subcultivó expandiéndolas en nueva placa. Se realiza una PCR con los partidores LidpSecF y LidpSecR para
verificar inserto en colonias. Una detección positiva determinó la amplificación del vector en crecimiento en medio LB líquido. Se realizó purificación y cuantificación de
los vectores.
Secuenciación: Se enviaron 500 ng de plásmidos seleccionados al servicio de secuenciación automática del departamento de Ecología de la Facultad de Ciencias
Biológicas de la Universidad Católica, para corroborar que los productos amplificados correspondan a un marco de lectura abierto que dé origen a la secuencia esperado.
Las secuencias obtenidas fueron analizadas y alineadas en el programa Vector NTI8.
15.
16.
17.
18. Resultados
881
LidpSecF ......AAAA GCGGCC..GC CACCATGGAG
ACAGA..... ..........
LidpSecRC .......... ..................... .......... .......... pSecTag
GGAGACCCAA GCTGGCTAGC CACCATGGAG
ACAGACACAC TCCTGCTATG
931
LidpSecF .......... ..................... .......... ..........
LidpSecRC .......... .......... ..GGTTCCAC TGGTGACGAA
TTCCCCC...
pSecTag GGTACTGCTG CTCTGGGTTC CAGGTTCCAC
TGGTGACGCG GCCCAGCCGG
Alineamiento de los partidores
LidpSec F (amarillo) y R
(celeste) para la región líder
Igk del vector pSsec Tag 2B.
Los partidores diseñados
portan en su secuencia zonas
de corte (negrita) para las
enzimas de restricción Not I y
EcoRI para F y R
respectivamente, lo que
amplificó fragmentos de 77-80
pb en una reacción en cadena
de la polimerasa (PCR)
19. Determinación Temperatura Óptima de
Alineamiento para Reacción en Cadena
de la Polimerasa. ( PCR) El cálculo
teórico de la temperatura de alineamiento
por parte del programa Vector NTI8
sugirió una temperatura de alineamiento
teórica de 50º C para los partidores.
Se determinó en termociclador de
gradiente de temperatura de alineamiento
donde se obtenía mayor eficiencia de
amplificación de producto de PCR., Si
bien en rangos de temperatura de +/- 5ºC
con respecto a la temperatura optima
obtenida no se producen grandes
diferencias de cantidad de producto, se
consideró la mayor densidad de señal,
mediante densitometría de bandas.
La temperatura de alineamiento que otorga
mayor producto de PCR de los partidores
Lidpsec es a 50ºC. Fotografía de gel de
acrilamida a al 8% cargado con los
productos de una gradiente de temperatura
de alineamiento de los partidores Lidpsec F
y R para cadena Líder de Igk de la
inmunoglobulinas humanas utilizando como
templado el plasmido pSsec Tag 2B. Se
utilizó como estándar un marcador de peso
de 25 pb.
20. Cuantificación fragmento pre
ligación: La secuencia líder de Igk
obtenida de la PCR de el plásmido
pSecTag, fue precipitada,
resuspendida y digerida con las
enzimas de restricción EcoRI y Not
I, para luego realizar electroforesis
que permita la eliminación de los
segmentos cortados. Se purificó el
fragmento a partir del trozo de gel
de agarosa al 3%, para luego
cuantificar nuevamente previo a la
reacción de ligación.
Por otro lado los vectores de
expresión pcDNA3.1(-) y pIgCH-16
fueron digeridos, purificados y
cuantificados en un gel del agarosa
al 1%.
Cuantificacion de fragmento líder Igk y
vectores pcDNA y pIgCH-16 pre
ligación. En un gel de agarosa al 3% el
fragmento líder Igk se cuantificó según
el marcador de peso molecular de 100
pb (A). Utlizando el marcador Lambda
Hind III como estándar molecular,
pcDNA y pIgCH-16 fueron
cuantificados previos a la ligación.
pIgCH-16 posee una masa mayor
pues es un pcDNA que porta la
porción constante de las cadena
liviana de la IgG.(B)
21. Screening de Colonias Transformadas
post Ligación por PCR: Producto de la
ligación de los vectores y el fragmento
Igk, se realizó transformación de
bacterias E. coli DH5α competentes. Se
efectuó el plaqueo de colonias en medio
de selección sólido con ampicilina.
Posteriores se aisló colonias con las que
se realizó un PCR de colonias. Para ello
se tomó una pequeña de bacterias y se
agrego directamente a la reacción de
PCR en base a los partidores LidpSecF y
LidpSecR. De esta forma se seleccionó y
verificó que clones presentaban el
plasmidio que contenían el fragmento
líder Igk.
Según los resultados, se seleccionó
los clones pcDNA2, pcDNA4, pIgCH16-3
y pIgCH16-4, los cuales portan la
secuencia líder Igk para su posterior
crecimiento en medio de cultivo líquido y
posterior cuantificación.
PCR de selección de colonias
transformadas con vectores que porten el
inserto Igk. Fotografía de una electroforesis
de productos de PCR de 5 colonias
transformadas con el vector pcDNA y 5
colonias de bacterias transformadas con el
vector pIgCH-16.
22. Cuantificación vectores
clonados previo secuenciación:
Una vez crecidos las colonias
seleccionadas mediante PCR,
se procedió a una purificación
de plásmido para su posterior
cuantificación previa al envío al
servicio de secuenciación
automática.
Según las estimaciones de
cantidad de DNA obtenido del
plásmido pcDNA2 no cumplía la
cantidad mínima requerida para
la secuenciación automática por
lo que se descartó.
Cuantificacion de vectores
clonados previos a secuenciación
Fotografía de una electroforesis
de plásmidos que portan la
secuencia lider Igk, con respecto a
marcador de peso molecular y al
vector original pcDNA.
23. Secuenciación: Se enviaron 500 ng de
plásmido al servicio de secuenciación, el
cual permitió realizar un alineamiento
revelando que los 3 vectores presentan
el inserto de cadena líder de Igk,
demostrado por la secuencia Kozak y el
triplete de iniciación ATG (Kozak, 2002).
Alineamiento de de cadena Líder Igk, y
vectores pcDNA4, pIgCH3 y pIgch4. La
secuenciación reveló que la cadena
kappa proveniente del vector pSecTag
2B se encuentra presente en los 3
vectores analizados
90
Kappa GCTGGCTAGC CACCATGGAG
ACAGACACAC TCCTGCTATG
GGTACTGCTG PCDNA-4 GCGGCC..GC
CACCATGGAG ACAGACACAC
TCCTGCTATG GGTACTGCTG PIGCH3
GCGGCC..GC CACCATGGAG
ACAGACACAC TCCTGCTATG
GGTACTGCTG PIGCH4 GCGGCC..GC
CACCATGGAG ACAGACACAC
TCCTGCTATG GGTACTGCTG 140
Kappa
CTCTGGGTTC CAGGTTCCAC
TGGTGACGCG GCCCAGCCGG
CCAGGCGCGC PCDNA-4 CTCTGGGTTC
CAGGTTCCAC TGGTGAC...
.CGAATTCCA CCA....... PIGCH3
CTCTGGGTTC CAGGTTCCAC
TGGTGAC... ..GAATTCAA GGGC.CCATC
PIGCH4 CTCTGGGTTC CAGGTTCCAC
TGGTGAC... ..GAATTCAA GGGC.CCATC
24. DISCUSIÓN
Mediante esta Unidad de
Investigación se pudo construir tres
vectores de expresión que portan en su
estructura el gen que codifica para la
cadena líder de iniciación de la trascripción
de la cadena liviana kappa de las
inmunoglobulinas humanas: pIgCh-3 y 4
que además poseen la cadena constante
(CL) dejando entre ambos sitios de
inserción para la ingeniería de fragmentos
de la cadena variable de la inmunoglobulina
anti TNF murina. Este vector permite
además dejar la puerta abierta para que se
inserten otras cadenas variables de interés
en el futuro para otras aplicaciones en bio
medicina. También se genero un vector
pcDNA-4, que sólo porta la cadena líder
kappa, lo que permite insertar cadenas
pesadas de otras clases de
inmunoglobulinas como E o A para otras
aplicaciones, por ejemplo en inmunología
de mucosas.
25. Ya logrado este objetivo intermedio, continúa el paso de amplificar el segmento variable de la inmunoglobulina
anti-TNF murina. Se amplifica la secuencia de codifica para este fragmento mediante PCR, y luego se procede a
realizar la ingeniería para la inserción en los vectores pIgCH-3 o 4, para luego corroborar y secuenciar la
inserción.
Paralelamente a este trabajo en nuestro laboratorio se trabaja para la construcción del segundo vector
que codifica para la porción pesada de la inmunoglobulina. Una vez seleccionados ambos vectores, se
transfectarán, por electroporación o lipofección a células Cos-7 o CHO (Sanna, 2002; Andersen y Krummen,
2002). Las células transfectadas o transfectomas se seleccionarán por su resistencia a antibiótico y la secreción
de la proteína al medio. Se verificará la incorporación del DNA por PCR y la expresión del RNA mensajero por
RT-PCR. La secreción de la proteína se realizará por ELISA sándwich, utilizando anticuerpos anti-cadena H o L
de Igs humanas para capturar la proteína, mientras otro anticuerpo anti-cadena H ó L, conjugado a peroxidasa,
servirá para la detección.
Con la finalidad de verificar que la secuencia de los insertos de DNA clonados correspondan a las
regiones variables de Igs de ratón, éstos serán secuenciados, solicitando el servicio a un laboratorio externo. Las
secuencias nucleotídicas obtenidas serán analizadas, haciendo uso de programas computacionales que
permitan determinar su homología con otras secuencia de Igs reportadas en la literatura (Ej. GeneBank). Se
utilizará las secuencias nucleotídicas con el fin deducir la secuencias aminoacídicas y clasificar las regiones
variables, según los subgrupos existentes, utilizando bases de datos alternativas (Johnson y Wu, 2001).
De esta forma se avanza en la implementación de la tecnología de modificación y producción de AMM,
aplicable al desarrollo de otras moléculas de importancia económica y social, Como sub-productos
biotecnológicos, se han generado productos intermedios patentables vectores de DNA con genes constantes de
las cadenas pesadas y livianas de inmunoglobulinas humanas, con sitios de clonamiento para genes variables
murinos, que permitirán quimerizar o humanizar otros Acm. De esta forma nos acercamos a que un tratamiento
de última generación esté disponible a un porcentaje de nuestra población que sufre artritis reumatoide,
contribuyendo así a mejorar su calidad de vida.
26. BIBLIOGRAFÍA
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