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INMUNOTERAPIA :  VACUNAS ANTITUMORALES BASADAS EN  CÉLULAS DENDRÍTICAS (DCs)
INTRODUCCIÓN ,[object Object],[object Object],[object Object]
INMUNOTERAPIA  ,[object Object]
VACUNAS ,[object Object],[object Object]
INMUNOTERAPIA  ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
TIPOS DE VACUNAS ANTITUMORALES ,[object Object],[object Object]
ACTIVA  ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
INMUNOTERAPIA   VENTAJAS   I NCONVENIENTES ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
CÉLULAS DENDRÍTICAS (DCs) ,[object Object],[object Object],[object Object]
OBTENCIÓN DE DCs ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
BIOLOGIA DE LAS DCs  1. Céls progenitoras 2.Precursores de sangre 3. DCs inmaduras 4. DCs maduras Estados Maduración
 
FUNCIONES DE DCs ,[object Object],[object Object],[object Object]
DCs Linfocitos Células con igual antígeno Presentación del antígeno Proliferación de linfocitos Transducción
” buffy-coat ” CA (monocitos) CnA (linfocitos) DCimmaduras DCmaduras Linfocitos CMNs Purificación con gradiente de densidad  Purificación por el método de adhesión al plástico Congelación Descongelac + IL-2 IL-4 + GM-CSF Transducción Ad- GFP/  GAL TNF-   + GM-CSF
Linfocitos sin pre-est.(0) Linfocitos pre-est. GFP linfocitos pre-est.   GAL Linfocitos DCs transducidas HeLas - HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con   GAL   Ensayo de proliferación  con timidina tritiada Los linfocitos pre-estimulados con un antígeno (GFP o   GAL) se activan y PROLIFERAN al reconocer a este antígeno al cual esta pre-estimulado  Transducción Ad-GFP/  GAL
“ Buffy-coat” CMNs CnA(linfocitos) CA (monocitos) Purificación por método  de gradiente de densidad Purificación por método de adhesión al plástico
Proporción de CD14 positivo
Porcentaje de células positivas para marcadores celulares
CA (Monocitos) DCs inmaduras DCs maduras IL-4 + GM-CSF Transducción TNF-   + GM-CSF
Porcentaje de células positivas para marcadores celulares
Transducción con Ad-  , Ad-GFP y Ad-  GAL DCs  HeLas 2.91% 17.34% 3.16% 2.96% 79.99% 88.17%
Linfocitos sin pre-est.(0) Linfocitos pre-est. GFP linfocitos pre-est.   GAL Linfocitos DCs transducidas HeLas - HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con   GAL   Ensayo de proliferación   Transducción Ad-GFP/  GAL
Objectivos de la proliferación 1. Observar que a mayor nº estimuladoras mayor proliferación. Ratios (proporción de respondedoras:estimuladoras) cuando aumenta la ratio disminuye el nº de HeLas, el nº de linfocitoses siempre constante 2. Observar que cuando enfrentamos respondedoras (linfocitos) con estimuladoras (HeLas) de la misma expresión (GFP-GFP y   GAL-  GAL) tendríamos que observar mayor proliferación de estos linfocitos
HeLas sin transducir  HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con   GAL Control negativo/positivo
HeLas sin trasducir Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre-esti- mulados GFP Linfocitos pre-esti- mulados   GAL
HeLas transducidas con GFP Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre- estimulados con GFP Linfocitos pre- estimulados con   GAL
HeLas transducidas con   GAL Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre- estimulados con GFP Linfocitos pre- estimulados con   GAL
CONCLUSIONES (1) ,[object Object],[object Object]
CONCLUSIONES (2) ,[object Object]
CONCLUSIONES (3) ,[object Object]
CONCLUSIONES (4) ,[object Object],[object Object]

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Inmunoterapia: Células dendríticas

  • 1. INMUNOTERAPIA : VACUNAS ANTITUMORALES BASADAS EN CÉLULAS DENDRÍTICAS (DCs)
  • 2.
  • 3.
  • 4.
  • 5.
  • 6.
  • 7.
  • 8.
  • 9.
  • 10.
  • 11. BIOLOGIA DE LAS DCs 1. Céls progenitoras 2.Precursores de sangre 3. DCs inmaduras 4. DCs maduras Estados Maduración
  • 12.  
  • 13.
  • 14. DCs Linfocitos Células con igual antígeno Presentación del antígeno Proliferación de linfocitos Transducción
  • 15. ” buffy-coat ” CA (monocitos) CnA (linfocitos) DCimmaduras DCmaduras Linfocitos CMNs Purificación con gradiente de densidad Purificación por el método de adhesión al plástico Congelación Descongelac + IL-2 IL-4 + GM-CSF Transducción Ad- GFP/  GAL TNF-  + GM-CSF
  • 16. Linfocitos sin pre-est.(0) Linfocitos pre-est. GFP linfocitos pre-est.  GAL Linfocitos DCs transducidas HeLas - HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con  GAL   Ensayo de proliferación con timidina tritiada Los linfocitos pre-estimulados con un antígeno (GFP o  GAL) se activan y PROLIFERAN al reconocer a este antígeno al cual esta pre-estimulado Transducción Ad-GFP/  GAL
  • 17. “ Buffy-coat” CMNs CnA(linfocitos) CA (monocitos) Purificación por método de gradiente de densidad Purificación por método de adhesión al plástico
  • 19. Porcentaje de células positivas para marcadores celulares
  • 20. CA (Monocitos) DCs inmaduras DCs maduras IL-4 + GM-CSF Transducción TNF-  + GM-CSF
  • 21. Porcentaje de células positivas para marcadores celulares
  • 22. Transducción con Ad-  , Ad-GFP y Ad-  GAL DCs HeLas 2.91% 17.34% 3.16% 2.96% 79.99% 88.17%
  • 23. Linfocitos sin pre-est.(0) Linfocitos pre-est. GFP linfocitos pre-est.  GAL Linfocitos DCs transducidas HeLas - HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con  GAL   Ensayo de proliferación Transducción Ad-GFP/  GAL
  • 24. Objectivos de la proliferación 1. Observar que a mayor nº estimuladoras mayor proliferación. Ratios (proporción de respondedoras:estimuladoras) cuando aumenta la ratio disminuye el nº de HeLas, el nº de linfocitoses siempre constante 2. Observar que cuando enfrentamos respondedoras (linfocitos) con estimuladoras (HeLas) de la misma expresión (GFP-GFP y  GAL-  GAL) tendríamos que observar mayor proliferación de estos linfocitos
  • 25. HeLas sin transducir HeLas transducidas con GFP HeLas transducidas con  GAL Control negativo/positivo
  • 26. HeLas sin trasducir Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre-esti- mulados GFP Linfocitos pre-esti- mulados  GAL
  • 27. HeLas transducidas con GFP Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre- estimulados con GFP Linfocitos pre- estimulados con  GAL
  • 28. HeLas transducidas con  GAL Linfocitos sin pre-estimular Linfocitos pre- estimulados con GFP Linfocitos pre- estimulados con  GAL
  • 29.
  • 30.
  • 31.
  • 32.