Establecimiento del cultivo primario de cardiacas provenientes de una rata sprague dawley y células embrionarias - Trabajo Final para curso Fundamentos de Cultivo de Células Animales.

1. Establecimiento del Cultivo Primario de
cardiacas provenientes de una rata
Sprague-Dawley y células embrionarias
Fundamentos del Cultivo de Células Animales, 2013.
Álvarez, D.; Arias, S.; Chaves, J.; Des Bouillons, R.

2. Cultivo primario
Fig 1. Esquema de las etapas de disección y el establecimiento del cultivo primario.
Fuente: Freshney, 2005

3. Fig 2: Esquema del establecimiento del cultivo primario y los subcultivos.
Fuente: Argenbio, s.f.

4. Aplicación
• Desarrollo de nuevos productos biomédicos
• Investigaciones
Envejecimiento
Células madre
Cáncer
• Miocitos en cultivo Trasplantarlos a
corazón

5. Resultados y Discusión
Fig 3. Fotografías que muestran el crecimiento celular del cultivo primario de células
de corazón de rata. Método del explante: a, b y c. Método enzimático: d, e, f. De
izquierda a derecha: primera, segunda y tercer semana, respectivamente.
d e f
a b c

6. Resultados y Discusión
Método
enzimático Según Oswaldo et al. (2007) se obtienen gran cantidad de
fibroblastos cardiacos y miocitos.
Los fibroblastos presentan un alto grado de adaptación en
condiciones in vitro y una rápida división celular, llegan a ser las
células predominantes en cultivo primario. Participan en la síntesis,
la secreción y degradación de las proteínas de la matriz extracelular.
Brindan las condiciones apropiadas para que otros tipos de células
puedan desarrollarse en conjunto.

7. Resultados y Discusión
Favorecieron las
condiciones
para que otras
células también
pudieran
proliferar.
Junto con la
secreción de
proteínas de la
matriz
extracelular.
La gran tasa
proliferativa de
los fibroblastos.

8. Resultados y discusión
Explante El cultivo a partir de explante tiene la limitación de que el
crecimiento se limita a la periferia del explante y la capacidad
proliferativa de la célula.
Procesos fisiológicos de las células como el ciclo celular, la presencia
de factores de crecimiento, las concentraciones de suero agregadas
al medio, así como la densidad celular.
Esta situación se pudo haber debido a condiciones de estrés en las
células que impidieron un buen desarrollo de las mismas luego de
su establecimiento in vitro. Sin embargo, se logró determinar que
las células cardíacas de rata, crecen mejor cuando el tejido se
disocia enzimáticamente.

9. Fig. 4. Fotografías que muestran los diferentes tipos de morfología celular observados en el
cultivo primario de corazón de rata comparados con los que se reporta en la literatura. (a):
miocitos. (b): miocitos de rata neonatal, fuente: Grubb et al., 2012. (c): dendríticas. (d): células
dendríticas epidérmicas, fuente: Celluzzi y Falo. 1997. (e): fibroblastoide. (f): cultivo mixto de
fibroblastos y miocitos, fuente: Hakimata, 2008.
b d f
a c e

10. Cardiomiocitos
Fiibroblastos
Celulas
endoteliales
Mastocitos
Celulas del
musculo liso
Macrofagos
Resultados y Discusión

11. Miocitos
Células musculares.
Células redondeadas al inicio y posteriormente
presentan pseudópodos.
Mesotelio, epicardio.
Resultados y Discusión

12. Fibroblastos
Células no musculares.
Producir y secretar proteínas de la matriz extracelular (
colageno y fribronectina).
Amplia variedad de estímulos tanto mecánicos como
químicos, mediante los cuales pueden migrar, proliferar y
diferenciarse a un fenotipo más activo
Amplia variedad de receptores y secretan diversos
factores de crecimiento y citoquinas.
Resultados y Discusión

13. Denditrícas
Funciones de inmunovigilancia para antígenos
exógenos que son presentados a los linfocitos T.
Intersticio de muchos órganos no linfoides como el
corazón, donde pueden capturar los antígenos de
microbios que invaden tejidos.
Ensayos de inmunomodulación en procesos
infecciosos
Resultados y Discusión

14. Fig. 5. Fotografías que muestran las células de corazón de rata en los 4 pasajes obtenidos.
Pasaje 1
Pasaje 2
Pasaje 3
Pasaje 4
Resultados y discusión

15. Método
enzimático
Técnica
aséptica
Medio de
cultivo
Resultados y Discusión

16. Fig. 6. Fotografías que muestran los tipos celulares predominantes en el cuarto pasaje. (a):
dendríticas. (b): fibroblastos.
a b
Resultados y Discusión

17. Resultados y Discusión
• Fibroblasotide
• Dendríticas
Fig 7. Porcentaje según el tipo de células
presentes en corazón de rata adulta.
Fuente: Banerjee et al, 2007.

18. Resultados y Discusión
Figura 8. Funciones de los fibroblastos en
el corazón de rata adulta
Fuente: Souders et al, 2013.
Secreción de citoquinas y
factores de crecimiento
Diferenciación de
Miofibroblastos
Proliferación y Migración

19. Fig. 9. Fotografías que muestran el cultivo primario de pulmón de embrión de pollo. (a):cultivo
primario. (b): pasaje 1.
a b
Resultados y Discusión

20. Conclusiones
• Los mejores resultados se obtuvieron con el
método enzimático
• Se obtuvieron células musculares,
fibroblastoides y dendríticas, sin embargo las
células más predominantes fueron las de
morfología tipo fibroblastoide.
• Las células obtenidas de tejido embrionario
tienen una mejor respuesta proliferativa en
comparación con células de tejido ya adulto.