1. Bacterias Gramnegativas y Grampositivas
Tinción Gram
Esta tinción desarrollada por el doctor Christian Gram en 1884, es hoy la más
utilizada en los laboratorios de bacteriología, tiene gran importancia en taxonomía
y morfología bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared
celular de las distintas bacterias y permite, de acuerdo con la estructura y grosor
de la pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positiva o (Gram +) y Gram
negativas (Gram -).
La diferencia entre una y otras radica en la composición química de la pared
celular y su permeabilidad; esta tinción además, correlaciona con otras
propiedades como endotoxinas, susceptibilidad a antibióticos, sensibilidad o
resistencia a sales biliares, punto isoeléctrico y tensión superficial.
La Membrana Citoplasmática está ubicada inmediatamente debajo de la pared
celular es una estructura obligada de las bacterias, constante en todas las
especies sin excepción y constituye del 20 a 30% de peso de la bacteria.
Bacterias Gram positivas
Las Bacterias Gram + aparecen con el citoplasma teñido uniformemente de color
azul o violeta; poseen una capa gruesa de peptidoglicán y carecen de membrana
externa, pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son
gramlábiles).

2. Bacterias Gram negativas
Las Bacterias Gram - aparecen con el citoplasma teñido uniformemente de color
rojo; tienen una capa más delgada de peptidoglicán y presenta un contenido
lipídico diez veces mayor que el de las Gram+ (lo que dificulta la tinción y
retención de colorante en el citoplasma) y poseen una membrana externa. Son
constantes en su reacción
Bacterias Gram Variables
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, pues simultáneamente
presentan tinción Gram positiva y de Gram negativas, aun bajo condiciones
óptimas de cultivo. Sin embargo, en su estructura estas bacterias poseen una
pared de Gram positivas, aunque la capa de peptigoglicán es más delgada que la
mayoría de las baterías Gram positivas.

3. Comparativo de membranas
Técnica
Existen variaciones de esta técnica, pero en términos generales, la tinción Gram
involucra varios pasos:
1. Preparación – se prepara un extendido de los cultivos y se fija a la lámina.
2. Tinción inicial – las células se tiñen con cristal violeta, el cual es el
colorante primario. En este paso todas las células se tiñen de color morado.
3. Mordente – se adiciona yoduro (lugol) que reacciona con el cristal violeta y
forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto las células
continúan de color morado.
4. Decoloración – se adiciona un solvente no polar, el cual actúa lavando el
complejo cristal violeta-yoduro de las células Gram -. De esta manera las
bacterias Gram+ continúan moradas y las Gram – quedan incoloras. Este
es el paso crítico de la tinción, pues si se exagera, decolora las Gram + y si
ser hace débil no decolora las Gram -.
5. Contra tinción - se vuelve a teñir con safranina o fucsia, de manera que
las bacterias Gram -, que habían sido decoloradas, se tiñan de rosado a
fucsia según el colorante empleado: en tanto, las bacterias Gram + no se
Gram + Gram -
Capa densa y
uniforma de 200 a
800 A
Capa interna delgada
de 20 a 30 A cubierta
por capas externas
de densidad menor
Glicopéptido
(50% del peso seco)
Glicopéptido
(10% del peso seco)
Contiene:
Ácidos Teicoicos,
Polisacáridos,
Proteínas (pocas
veces)
Contiene:
Lipopolisacáridos,
Lipoproteínas,
Proteínas

4. afectan con la contra tinción y permanecen moradas debido a lo intenso de
esta coloración.
Además de una excesiva coloración, otro factor que puede influir en que las
bacterias Gram + se observen parcial o completamente rosadas, es la edad del
cultivo; las célula viejas tienden a perder su capacidad de retener el complejo
cristal violeta yoduro y por lo tanto las bacterias se verán rosadas. Otro factor de
variabilidad podría ser condiciones de estrés durante el cultivo, que genera formas
Gram negativas no viables, dentro de un cultivo de células Gram +.
Bibliografía:

5. • Bacteriología General, Principios y práctica de laboratorio; Evelyn
Rodríguez Cavallini, María del Mar Gamboa Coronado, Francisco
Hernández Chavarría, Jorge Danilo García Hidalgo; Editorial
Universidad de Costa Rica; 2005.
• Microbiología Clínica Aplicada; P. García Martos, M.T. Fernández del
Barrio, F. Paredes Salido; Ediciones Díaz de Santos, S.A.; Madrid
España; Tercera Edición; 1997.
• Microbiología Básica para el Área de Salud y Afines; Hugo Humberto
Montoya Villafañe; Editorial Universidad de Antioquia; Colombia;
Segunda Edición; 2008.

6. • Bacteriología General, Principios y práctica de laboratorio; Evelyn
Rodríguez Cavallini, María del Mar Gamboa Coronado, Francisco
Hernández Chavarría, Jorge Danilo García Hidalgo; Editorial
Universidad de Costa Rica; 2005.
• Microbiología Clínica Aplicada; P. García Martos, M.T. Fernández del
Barrio, F. Paredes Salido; Ediciones Díaz de Santos, S.A.; Madrid
España; Tercera Edición; 1997.
• Microbiología Básica para el Área de Salud y Afines; Hugo Humberto
Montoya Villafañe; Editorial Universidad de Antioquia; Colombia;
Segunda Edición; 2008.