La cromatografía de intercambio iónico utiliza una matriz porosa insoluble con grupos cargados unidos covalentemente que pueden intercambiar reversiblemente contraiones. Los intercambiadores iónicos pueden ser aniónicos u catiónicos dependiendo de si están cargados positiva o negativamente. Las proteínas pueden unirse a ambos tipos de intercambiadores debido a sus propias cargas. La afinidad de una proteína depende de la identidad y concentración de otros iones en la solución. Estos

1. Purificación por Intercambio Iónico

2. Principios

3. Intercambiadores Iónicos Matriz porosa insoluble Grupos cargados unidos a la matriz por enlaces covalentes _ + + + + + Asociados CONTRAIONES que pueden ser intercambiados de forma reversible. +

4. Intercambiador Aniónico Intercambiador Catiónico + + + + + + + + + + + + + + + + + + _ _ Cargado positivamente Tiene contraiones negativos(aniones) disponibles para intercambiar _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + + Cargado negativamente Tiene contraiones positivos(cationes) disponibles para intercambiar +

5. Proteínas Portadoras de cargas Tanto positivas como negativas Se pueden unir a intercambiador aniónico como catiónico AFINIDAD Capacidad de una carga para unirse con una cierta itensidad De una proteína depende de Identidad y concentración de los otros iones en la disolución (competencia) Del pH + _

6. Estos principios se emplean en el aislamiento de moléculas biológicas

7. Purificación de proteínas Se disuelve la mezcla a purificar con un tampón o buffer Se eligen Se pasa la mezcla por una columna pH Concetración de sal Intercambiador iónico Dependiendo de la proteína que quieras purificar Columna con intercambiador Mayor afinidad Menor afinidad Colector de fracciones Elución Lavado de la columna

8. Elución por gradiente Se hacen variar las concentraciones pH Sal Continuamente Obteniendo secuencialmente las proteínas (gradiente lineal) - concentración varia linealmente - con el volumen

9. Conclusión La cromatografia de intercambio iónico Iones unidos electrostaticamente a matriz insoluble inerte Iones en disolución Sustituidos de modo reversible