Este documento describe varios métodos para realizar recuentos de microorganismos, incluyendo métodos de cultivo, físicos, químicos e inmunológicos. Algunos métodos de cultivo comunes incluyen contaje en placa estándar y reducción de colorantes. Los métodos físicos incluyen microcalorimetría y citometría de flujo. Los métodos químicos incluyen detección de ATP, radiometría y uso de sustratos fluorogénicos y cromogénicos. Los métodos inmunoló

1. SeminarioRECUENTO DE MICROORGANISMOSAutor : Diego Montero

2. ¿ MÉTODOS DE RECUENTO DE MO?Recuentos de microorganismos viables "totales“Métodos físicos para la detención de microorganismosMétodos químicos de detección de microorganismos.Métodos inmunológicos.Examen de superficies.Recuento de mohos y levaduras.

3. RECUENTOS DE MICROORGANISMOS VIABLES TOTALESSe trata de conocer el número total de microorganismos presentes en el alimento.

4. sólo debe considerarse un indicador de las características higiénicas generales del alimento.

5. En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en ciertas situaciones (alimentos envasados al vacío), puede ser de interés hacer recuentos de anaerobios totales.Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen.

6. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie.Contaje en Placa StandardN.M.PMedio líquido y, proporciona una idea aproximada del número de bacterias vivas( tubos incubados )TÉCNICAS DE RECUENTO DE M.O VIABLESReducción de colorantesUsando azul de metileno o resazurina. Colorantes reducidos por las bacterias; al reducirse cambian de color y esto es medible. Usado en medios líquidos (lácteos).

7. Usando cámaras de cuenta, se coloca un volumen determinado y se recuentan las bacterias.Contaje microscópico directo

8. Detecta los cambios de impedancia que se dan con el tiempo Impedancia:Estudio de los pequeños cambios de calor producidos como consecuencia del anabolismo de nutrientesMÉTODOS FÍSICOSMicrocalorimetria:Células de una suspensión pasan por un detector capaz de medir diferentes parámetros (fluorescencia, absorbancia, dispersión de luz, etc.).Citometria de flujo:

9. S. aureus produce una temonucleasa(enzima termoresistente)La endonucleasa puede detectarse experimentalmente como un índice de la presencia de S. aureus incluso en concentraciones demasiado bajas de enterotoxina.NucleasaTermoestable:Detecta las endotoxinas de bacterias gram – (E.Coli) Se basa en la aglutinación de extractos de amebocito de sangre de Limulus .producido por cantidades del orden de picogramos de LPSLisado de Limulus:MÉTODOS QUÍMICOSSirven para identificar microorganismo desconocidos por medio el secateSouthern.Sonda de ADN PCR significa Reacción en Cadena de la Polimerasa y es un método que amplifica in vitro los genes o fragmentos de ADN Detectar número extremadamente bajos de microorganismos con una cierta rapidezPCR:Se detecta la presencia de ATP usando luciferasa, aunque hay algunos problemas experimentales que hacen que la técnica sea controvertida.Medida de ATP-:

10. (Continuación Métodos Químicos)Medida de la transformación de un substrato con 14C en 14CO2: el tiempo necesario para detectar el 14CO2 es inversamente proporcional a la cantidad de microorganismos presenteRadiometría: Se añaden como aditivos a los medios de cultivos para facilitar y acelerar la detección de los microorganismos.Substratos de Fluoroy Cromogénicos

11. Se utiliza anticuerpo marcado con una molécula fluorescente o un segundo anticuerpo que reconozca el primero. Se pueden usar antisueros complejos en el primer anticuerpo y de esta forma detectar cualquier tipo de Salmonella sin necesidad de aislarlasAnticuerpo fluorescentesMÉTODOS INMUNOLÓGICOSSerologiade enriquecimientoespecialmente desarrollado para la detección de Salmonella, el antisuero no se añade al alimento sino que se efectúa un paso previo de enriquecimiento del cultivo y de selección para evitar falsos positivos.Test 1 - 2 de SalmonellaSistema utiliza dos cámaras de agar blando una selectiva y otra no selectiva donde se forma una banda de aglutinación cuando entra Salmonella.Se basa en el marcaje con un radioisótopo de un antígeno determinado (toxina producida por una bactería patógena) y su posterior detección por anticuerpos específicos fijados sobre un soporte sólido .detecta: Salmonellas. Toxinas de S aureus, micotoxinas, toxinas de C. botulinum, enterotoxinas de E. coli.Radioinmunoensayo y Elisa detección de antígenos mediante el metodoinmunodifusión radial doble Difusión en gel