El documento describe diversos métodos de medición de interacciones entre energía radiante y materia, destacando técnicas como la espectrofotometría, nefelometría y fluorometría. Se detallan sus aplicaciones, limitaciones y cuidados necesarios para el uso adecuado de los instrumentos involucrados. Además, se discuten las ventajas y desventajas de métodos de absorción y emisión, así como recomendaciones para el manejo de equipos especializados.

2. Estos miden las interacciones entre la
energía
radiante y la materia.
Los primeros instrumentos de esta clase se
crearon para su aplicación dentro de la región
visible y por esto se llaman instrumentos
ópticos.
La energía radiante que se utiliza para
estas mediciones puede variar desde los
rayos
X, pasando por la luz visible, hasta las ondas
de
radio.
Entre estos métodos se encuentran:

3. MÉTODO DE ABSORCIÓN
Cuando una fuente de energía radiante, como un haz de luz blanca, se pasa a
través
de una solución, el haz emergente será de menor intensidad que el haz que
entra.
Si la solución no tiene partículas en suspensión que dispersen la luz, la
reducción en
intensidad se debe principalmente a la absorción por la solución.
La medida en que se absorbe la luz blanca es por lo general mayor para algunos
colores que para otros, con el efecto de que el haz emergente tiene color.
Con este método se miden los parámetros de color.

4. MÉTODO DE ABSORCIÓN
Este instrumento no se puede utilizar para medir la absorbancia a todas las
longitudes de onda porque una fuente de energía, un diseminador de energía y
un
detector de energía dados son adecuados solo para el uso dentro de un rango
limitado de longitudes de onda.

5. MÉTODO DE ABSORCIÓN
E S P E C T R O F O T O M E T R Í
A V I O L E T A
La región ultravioleta es
particularmente apropiada para
la medición selectiva de
concentraciones bajas de
compuestos orgánicos como
los
que tienen anillos bencénicos
o
los insaturados de cadena
larga
que tienen una serie de
enlaces
dobles.
E S P E C T R O F O T O M E T R Í
A I N F R A R R O J A
En este campo se puede usar el
espectro infrarrojo para identificar
Agrupaciones atómicas
particulares
que estén presentes en una
Molécula desconocida, así como
También una ayuda valiosa en la
identificación de pesticidas y otros
compuestos orgánicos complejos
extraídos de los cauces.

6. MÉTODO DE ABSORCIÓN
E S P E C T R O F O T O M E T R Í
A V I O L E T A
La región ultravioleta es de aplicación general mas
limitada.
Además de los problemas de la reflexión en la
superficie
nos encontramos con otros problemas:
- Está limitada principalmente a muestra en polvo.
- Si la muestra contiene agua y debido al
calentamiento
producido por el rayo de luz infrarrojo, ésta se puede
evaporar dando lugar a vapor de agua que causa
fuertes interferencias en el espectro.
- El llenado de la celda es poco reproducible sobre
todo
cuando se quiere trabajar en análisis cuantitativo.
E S P E C T R O F O T O M E T R Í
A I N F R A R R O J A
Para poder identificar agrupaciones
atómicas
particulares que estén presentes en una
molécula desconocida se requieren
conocimientos de mecánica cuántica.
La interferencia entre los espectros
individuales hace casi imposible el uso de
análisis infrarrojo para la identificación o la
cuantificación, por esta razón usualmente se
necesita, antes del análisis, realizar un largo
procedimiento de separación para aislar de
las interferencias los compuestos de interés.

7. MÉTODO DE ABSORCIÓN
E S P E C T R O F O T Ó M E T R O
FUENTE DE LUZ: Lámpara que
emite una mezcla de
longitudes de onda.
COLIMADOR: Conjunto de lentes
que enfocan la luz
convirtiéndola en un haz de
rayos paralelos.
MONOCOROMADOR: Dispositivo
que selecciona luz de una
única longitud de onda.
FOTODETECTOR: Mide
cuantitativamente la radiación
que pasa por la muestra.

8. MÉTODO DE ABSORCIÓN
C U I D A D O S Q U E S E D E B E N T E N E R C O N E L
E S P E C T R O F O T Ó M E T R O
Coloque el instrumento en un lugar en donde no esté sujeto a vibraciones, calor excesivo, humedad
o luz
directa.
Proteja el instrumento del polvo.
Nunca toque las superficies ópticas tales como lentes y filtros.
Siga las instrucciones que da el fabricante para la limpieza de tales componentes.
Permita que el instrumento se caliente antes de hacer algún procedimiento.
Se debe hacer un chequeo periódico (cada semana) de la calibración de la longitud de
onda, cuando se
Sospeche que ha variado, con el Tubo de Didimium.
Verifique el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando varíe la longitud de
onda.
Asegúrese de que las cubetas estén limpias y libres de ralladuras y huellas digitales, esto debe
hacerse
cada vez que va a usarse.

9. MÉTODO DE DISPERSIÓN
Se caracterizan por no tener lugar al intercambio de energía como consecuencia
de
la interacción materia-radiación electromagnética.
No se producen trasmisiones entre los diferentes estados energéticos, sino que
lo
que realmente ocurre son cambios en la dirección o en las propiedades físicas
de la
radiación electromagnética.

10. MÉTODO DE DISPERSIÓN
N E F E L O M E T R Í A
La turbiedad se puede medir por el
efecto en la difusión de la luz, que se
denomina nefelometría.
Mide la luz dispersada a diversos
ángulos por la suspensión
particulada,
proporcional a la concentración de
partículas en el medio.
F L U O R O M E T R Í A
Se puede medir la fluorescencia.
Emplea filtros para seleccionar la
longitud de onda.
Uno de los principales usos de la
fluorometría en los estudios de la calidad
del agua es el seguimiento del
movimiento
del agua y de la contaminación.
Esto se lleva a cabo añadiendo al agua
medios altamente fluorescentes y
detectando su movimiento por
mediciones
fluoroscópicas.

11. MÉTODO DE DISPERSIÓN
N E F E L O M E T R Í A
Emiten a longitudes de ondas largas y la radiación es altamente polarizada, lo que va en
detrimento(daño material) de la potencia radiante de dispersión detectada.
Las longitudes de ondas son fijas e inmodificables, lo cual es un inconveniente importante
cuando se trabaja en reacciones de inmunoprecipitación, en las que el tamaño de la partícula
cambia durante el curso de la reacción.
Cuando las cubetas de lectura son prismáticas, solo permiten la detección de la radiación en
determinados ángulos, por el contrario, cuando dichas cubetas son cilíndricas, la superficie
curva
actúa como un lente, desviando el haz radiante que las atraviesa.
La calidad de las mediciones depende de la inexistencia de fluctuaciones de la radiación
emitida
y de la ausencia de ruidos o corrientes ópticas que afectan al receptor

12. MÉTODO DE DISPERSIÓN
F L U O R O M E T R Í A
La radiación dispersa resultante tiene una energía más baja y una longitud de onda mayor
que la
de la radiación incidente, el resultado de ello es una emisión débil que puede interferir en la
Medición.
La fluorescencia es bastante sensible a ciertas variables en la solución tales como la
naturaleza
del solvente, el pH, la temperatura, la presencia de impurezas y de iones.

13. MÉTODO DE DISPERSIÓN
N E F E L Ó M E T R O
FUENTE LIMINOSA : Incide luz sobre
los objetos.
LENTE COLIMADORA: Sirve para
homogeneizar las trayectorias o
rayos que, emitidos por una
fuente, salen en todas direcciones y
obtiene un chorro de partículas o
conjunto de rayos con las mismas
propiedades
TUBO FOTOELECTRICO: emisión de
electrones cuando se hace incidir
sobre él una radiación
electromagnética (luz visible o
ultravioleta.
LUZ NO DIFRACTADA: característica de
las ondas que se basa en la
desviación de estas al encontrar un
obstáculo o al atravesar una rendija.

14. MÉTODO DE DISPERSIÓN
C U I D A D O S Q U E S E D E B E N T E N E R C O N E L
N E F E L Ó M E T R O
Evite el derramamiento de líquido sobre la carcas.
No abrir la carcasa del equipo.
Este equipo debe estar conectado a tierra.
Este equipo debe ser utilizado por personal debidamente instruido.
Debe funcionar con voltaje de 120 v o 230 v.
Las cubetas deben tener un solo uso

15. MÉTODO DE DISPERSIÓN
F L U O R I M E T R O
FUENTE DE ENERGÍA RADIANTE: Lámparas de
arco de Xenón o de Mercurio. Emiten energía
radiante en forma de luz visible o no visible.
MONOCROMADORES: pueden ser filtros o prismas
o redes de difracción. Hay dos
monocromadores:
-De excitación o primario, selecciona las
longitudes de onda de excitación.
-De misión o secundario, selecciona la longitud
de onda de emisión antes que la luz llegue al
detector.
CUBETA: Es el recipiente donde se coloca la
muestra. Son de sílice o cuarzo. No todas las
de plástico sirven porque pueden originar
fluorescencia adicional.
DETECTORES: son fototubos multiplicadores.
Amplían la pequeña señal fluorescente
pudiéndola cuantificar.

16. MÉTODO DE EMISIÓN
Desde hace mucho tiempo se sabe que muchos elementos metálicos, cuando se someten a la
excitación
adecuada, emiten radiaciones de longitudes de onda específica.
Ésta es la base de la conocida prueba de la llama para el sodio (que emite una luz amarilla), y para
otros
metales alcalinos y alcalinotérreos.
Cuando se utiliza un método de excitación mucho más potente en vez de la llama, la mayoría de
los
elementos metálicos y algunos no metálicos emiten radiaciones características.
En condiciones controladas apropiadas, la intensidad de la radiación emitida a una longitud de
onda
específica se puede correlacionar con la cantidad del elemento presente, por tanto, se puede hacer
una
determinación cuantitativa y cualitativa.
Los diferentes procedimientos analíticos que utilizan la emisión de espectros se caracterizan por el
método de excitación usado, la naturaleza de la muestra (si es sólida o líquida) y el método para
detectar y registrar el espectro producido.

17. MÉTODO DE EMISIÓN
F O T Ó M E T R O D E L L A M A
Utilizado en el campo de la geología
para un análisis de agua
determinando
la concentración de metales alcalinos
o
alcalinotérreos como el sodio, el
potasio y el calcio.
E S P E C T R O S C O P I A D E
E M I S I Ó N
Utilizado para determinar metales
presentes en los lodos y en otros
desechos complejos.

18. MÉTODO DE EMISIÓN
E S P E C T R O F O T Ó M E T R O D E A B S O R C I Ó N A T Ó M I C A
Este ha adquirido amplia aplicación en la ingeniería ambiental en la última década debido a
su
versatilidad para la medición de trazas de la mayoría de los elementos en el agua como el
cobre,
hierro, magnesio, níquel y zinc.
Se pueden medir con precisión, hasta una pequeña fracción de 1 mg/l.

19. MÉTODO DE EMISIÓN
E S P E C T R O F O T O M E T R I
A D E A B O R S I O N
A T O M I C A
Una desventaja de este método es que
se debe usar una fuente de luz
diferente para cada elemento.
E S P E C T R O S C O P I A D E
E M I S I Ó N
Las desventajas son los mayores costos
instrumentales y operativos, la
necesidad de mas personal entrenado
y con frecuencia menos precisión que
con el método de absorción atómica.
Esencialmente las mismas interferencias se producen en espectrofotometría de absorción
atómica y espectroscopia de emisión, aunque con magnitudes diferentes.
Pueden clasificarse en cuatro grupos: 1. Espectrales: Incluyendo efectos de emisión o
absorción de fondo. 2. Físicas: Asociadas con el transporte y dispersión de la muestra en la
llama. 3. Químicas: Relacionadas con la vaporización del soluto. 4. De ionización:
Relacionadas con la variación de la concentración de átomos neutros emisores o
absorbentes en la llama provocada por el fenómeno de ionización térmica.

20. MÉTODO DE EMISIÓN
F O T Ó M E T R O D E L L A M A
LÁMPARA CATÓDICA: Fuente que emite
líneas nítidas de uno o varios elementos.
NEBULIZADOR: Transformador de un líquido
en una miríada de gotas muy finas
SOLUCIÓN: muestra a analizar
LLAMA: desprendimiento de calor y gases
ocasionado por la oxidación de una
materia Combustible.
SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA: Son
filtros o monocromadores. Proporcionan
una radiación constituida por un grupo
limitado y continuo en λ estecho
denominado BANDA.
FOTÓMETRO: Instrumento para medir
absorbencia que está equipado con un
filtro para seleccionar la longitud de onda
un detector de fotones.

21. MÉTODO DE EMISIÓN
E S P E C T R O S C O P I A D E E M I S I Ó N
COMBUSTIBLE: material capaz de liberar
energía cuando se oxida de forma
violenta con desprendimiento de calor
poco a poco.
OXIDANTE: compuesto químico que oxida
a otra sustancia en reacciones.
MUESTRA: sustancia para analizar.
MONOCROMADOR: Mecanismo para
identificar la radiación poli cromática
en las longitudes de onda que la
componen.
REGISTRADOR: Guarda los datos
AMPLIFICADOR DE C.A: Incrementa la
intensidad de la corriente

22. MÉTODO DE EMISIÓN
E S P E C T R O F O T O M E T R Í A D E A B S O R C I Ó N A T Ó M I C A
SINCRONIZADOR: Ayuda a coincidir en el tiempo dos o más
movimientos o fenómenos.
LÁMPARA DE CÁTODO HUECO: Fuente que emite líneas
nítidas de uno o varios elementos.
“CHOPPER “GIRATORIO: disco rotatorio o sensor de
velocidad.
COMBUSTIBLE: material capaz de liberar energía cuando se
oxida de forma violenta con desprendimiento de calor
poco a poco.
OXIDANTE: compuesto químico que oxida a otra sustancia
en reacciones.
MUESTRA: sustancia para analizar.
MONOCROMADOR: Mecanismo para identificar la radiación
poli cromática en las longitudes de onda que la
componen.}
REGISTRADOR: Guarda los datos
AMPLIFICADOR DE C.A: Incrementa la intensidad de la
corriente

23. MÉTODO DE EMISIÓN
C U I D A D O S Q U E S E D E B E N T E N E R C O N L O S
E Q U I P O S D E L M É T O D O D E E M I S I Ó N
Evite el derramamiento de líquido sobre la
Carcasa
No abrir la carcasa del equipo
Este equipo debe estar conectado a tierra.
Este equipo debe ser utilizado por personal
debidamente instruido.
Debe funcionar con voltaje de 120 v o 230 v
Las cubetas deben tener un solo uso

24. BIBLIOGRAFÍA
http://www.google.comurlsa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&ved=0CDcQFjAB&url=http%3A%2F%2Fbioquim
experimental.files.wordpress.com%2F2009%2F08%2F1c-espectro-y-curvas-patron1.ppt&ei=F0xHUq-
pDomQ9QTqwICgAQ&usg=AFQjCNGsUV_l_2s8UolycdR81yuZR3Lr6A&sig2=JRzJXGL5IIOwmgMlLO5zSw
http://es.scribd.com/doc/8553130/Espectrofotometria
http://www.aebm.org/jornadas/autoinmunidad/3.%20TECNICAS%20AUTOINMUNES.pdf
http://www.google.com/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/8/8e/Fluorimeter2.JPG&imgrefu
rl=http://es.wikipedia.org/wiki/Fluor%25C3%25ADmetro&h=638&w=930&sz=59&tbnid=efvbBDuoC5KTxM:&tbnh=71&t
bnw=103&zoom=1&usg=__JD7AuKJRGP1alzy7zH65P2DHkEw=&docid=x9ATaO3-
L0AXBM&sa=X&ei=lVhHUvirNYvy8ASS6oGgAQ&ved=0CDUQ9QEwAQ
http://equiposdelaboratorio.wordpress.com/2012/02/23/espectrofotometro-uso-y-caracteristicas/
Castiñeiras Lacabra, M. J. & Queralto Compaño, J.M. (1997). Bioquímica clínica y Patología molecular. Editorial
Reverte, S.A. Barcelona, 245-247 y 275 -276.
http://www.slideshare.net/juana49/tema-7-2490863
http://es.scribd.com/doc/91044171/NEFELOMETRO