Este documento describe los procedimientos para realizar baciloscopias y cultivos para diagnosticar tuberculosis. Incluye información sobre la obtención y conservación de muestras, el proceso de tinción de Ziehl-Neelsen para identificar micobacterias, y los criterios para interpretar resultados de baciloscopia y cultivo. El objetivo es brindar una guía para el diagnóstico oportuno y efectivo de la tuberculosis.

1. Etapa Pre-Analitica

2. Norma Oficial
Indicación Del Cultivo

3. Según la NOM-006-SSA2-1993. Para la prevención y
control de la tuberculosis en la atención primaria a la
salud:
CONCEPTO DE
TUBERCULOSIS
• Enfermedad infecciosa
generalmente crónica
causada por las especies del
género Mycobacterium, M.
tuberculosis y M. bovis que
se transmite del enfermo al
sujeto sano por la
inhalación de material
infectante o a través de la
ingestión de leche de vaca
contaminada,
respectivamente.
CASO DE TUBERCULOSIS
CONFIRMADO
• El enfermo cuyo
diagnóstico de
tuberculosis ha sido
comprobado por
baciloscopía, cultivo o
histopatología.

4. El cultivo se realizará de acuerdo con las indicaciones
siguientes:
a) Para el diagnóstico, en caso de sospecha
clínica y radiología de tuberculosis pulmonar
con resultado negativo de seis baciloscopías
en esputo.
b) Para el diagnóstico en caso de
sospecha de tuberculosis de
localización extrapulmonar.
c) En todo caso en el que se sospeche
tuberculosis renal o genitourinaria.

5. e) En pacientes sujetos a tratamiento
estrictamente supervisado, en quienes al
cuarto mes, persiste la baciloscopía positiva.
f) Para confirmar el fracaso del tratamiento
g)Para el diagnóstico en caso de sospecha de
cepas farmacorresistentes.

6. 1. Se realiza un
frote de las
muestras
recolectadas
2. Se tiñe por el
método de
Ziehl-Neelsen

7. Las muestras a
las que se le
realizará
cultivo
Se
descontaminan
por el método
de Petroff (NaOH
al 4%)
Se siembran
en el medio
de cultivo de
Löwenstein–
Jensen.

9. Tinción De Ziehl
Neelsen
Procedimiento

10. Principio
La tinción de Ziehl-Neelsen es una coloración diferencial
útil en la identificación de Micobacterias, aunque no permite
la diferenciación de distintas especies. La característica de
ácido-resistencia de estos microorganismos
hace de esta coloración un método
rápido en el diagnóstico, presuntivo,
de infección micobacteriana.

11. Principio
Las micobacterias que resisten la decoloración se llaman ácido
alcohol resistentes (AAR) son coloreadas de rojo
por la Fucsina y retienen el color a pesar de la acción del ácido y
del alcohol.

12. Fundamento De La Coloración De
Ziehl-Neelsen
Manifiesta la capacidad de resistir a la decoloración gracias al alto
contenido de lípidos complejos (ácidos micólicos) y ceras que
poseen algunos microorganismos en su pared celular.

13. Procedimiento
2.- Calentar
hasta emisión
de vapores tres
veces durante
5 Minutos
4.- Cubrir con
decolorante durante
3 minutos
3.- Lavar con
agua
1.- Cubrir
con fucsina
filtrada

14. Procedimiento
6.- Secar al aire
6.- Cubrir con
azul de
metileno
durante 1
minuto
5.- Lavar con
agua
5.- Lavar
con agua

16. Criterios De
Rechazo
Indicación de la Baciloscopia

17. Cultivo
Positivo
• Se le conoce así a la
demostración de colonias
con características del
complejo Mycobacterium
tuberculosis

18. La baciloscopia se debe realizar de
acuerdo con las indicaciones
siguientes:
a) En cualquier muestra clínica,
excepto orina.
b) En todos los casos probables, entre los
contactos de un caso de tuberculosis, en
grupos o poblaciones de alto riesgo y pacientes
dados de alta que acudan con tos productiva,
en tres muestras sucesivas de esputo.

19. c) Independientemente de la edad, en quienes
clínica y radiológicamente se sospeche
tuberculosis, si la primera serie de 3 hubiera
resultado negativa, se debe tomar otra serie de
3.
d) En el control del tratamiento
antituberculoso, con una muestra cada mes, la
última al terminar el tratamiento

20. Muestra no etiquetadas
correctamente
1
Muestra en contenedor
NO estéril.
2
3
Criterios para el
rechazo de
muestra de
orina
Se informará al servicio
responsable de la petición
y se desechará la muestra.
4
5
Muestra no adecuada: Catéteres
de Foley (sonda vesical), orina
obtenida por micción
espontánea o de catéter para
cultivo de anaerobios.
Muestras que no hayan llegado
al laboratorio en 2 horas desde
su recogida y no hayan sido
correctamente conservadas en
nevera a 4º C.
Sólo en el caso de que la muestra lleve
conservante, el cultivo podrá retrasarse
hasta 24 horas.

21. Baciloscopia
Procedimiento

22. Baciloscopia
La baciloscopia es la técnica de elección para el
diagnóstico rápido
y el control del tratamiento de la tuberculosis
pulmonar del adulto.
Es simple, económica y eficiente para detectar
los casos infecciosos.
Por eso es la herramienta fundamental
de un programa de control de la tuberculosis

23. Muestra
Bien
identificada,
conservada y
transportada.
Proviene del
sitio de la lesión
que se investiga.
Obtenida
en cantidad
suficiente,
colocada en un
envase adecuado.

24. Muestra
La muestra más examinada es el
ESPUTO debido a que, como se ha
dicho, la tuberculosis pulmonar es la más
frecuente.
•
•
•
•
•
•
•
Orina
Líquido Cefalorraquídeo,
Líquido Pleural
Líquido Ascítico
Sangre
Pus De Cavidades Abiertas
Biopsias
2-3 Muestras

25. El Esputo
Envase:
Boca ancha: de no menos de 50 mm de
diámetro
Capacidad entre 30 y 50 ml: para
facilitar que el paciente pueda
depositar la muestra con facilidad , sin
ensuciar sus manos o las paredes del
frasco y para que en el laboratorio se
pueda seleccionar y tomar la partícula más
adecuada

26. Cierre hermético: con tapa a rosca,
para evitar derrames durante
el transporte y la producción de
aerosoles cuando se abre en el
laboratorio .
Material plástico transparente,
resistente a roturas: para poder
observar la calidad de la muestra
cuando la entrega el SR, evitar
roturas y derrames de material
infeccioso y para que pueda ser
desechado . (No se recomienda
lavar y reutilizar frascos de
vidrio).

27. Muestra
La primera muestra debe ser tomada en el
momento de la consulta
cuando el médico u otro personal del equipo identifica
que un consultante al servicio de salud es SR.

28. Muestra
La segunda muestra la debe
recolectar el paciente en su casa por
la mañana al despertar (muestra
matinal).
La tercera muestra, cuando sea
requerida, puede ser tomada en el
servicio de salud, cuando el paciente
concurre a entregar la segunda .
(También puede ser recolectada
por el paciente al despertar en su
casa).

29. Obtención Espontánea Del
Esputo
La necesidad de recolectar esputo y no saliva, la forma de
lograr una buena muestra, dónde colectarla y cómo manipularla
hasta entregarla en el laboratorio.

30. Para La Recolección De Las Muestras:
Elegir un lugar bien ventilado y que ofrezca privacidad, puede ser
una habitación bien ventilada y con acceso de luz natural (sol) o
algún lugar abierto no concurrido del patio del servicio de salud.
Son inadecuados los lugares
cerrados o muy concurridos
tales como laboratorios,
consultorios médicos, salas
de espera o baños, ya que
éste es el proceso más
riesgoso entre todos los
necesarios para realizar la
baciloscopia.

31. Para La Recolección De Las Muestras:
Entregar al SR el envase de
recolección ya rotulado con
su nombre o número de
identificación y el servicio
que solicita la baciloscopia.
Solicitar al SR una buena muestra de
esputo utilizando la palabra que lo
identifica en cada lugar (gallo, pollo,
gargajo, del fondo del pecho, etc).

32. Procedimiento
2. Retenga el aire
un momento.
3.Expulse, luego la
expectoración con un
esfuerzo de tos, tratando de
arrastrar las secreciones del
pulmón
1. Inspire profundamente llenando sus
pulmones de aire tanto como sea posible.

33. Procedimiento
5. Repita esta
operación otras
dos veces
colocando
todas las
secreciones en
el mismo
frasco.
6. Limpie el
exterior del envase
con un pañuelo
de papel y se lave
las manos con
agua y jabón.
4. Recoja el esputo producido dentro del envase tratando
de que entre en su totalidad, sin manchar sus manos o las
paredes externas del frasco.

34. Calidad De La Muestra
La muestra de esputo mucopurulenta,
proveniente de árbol bronquial, es la que
asegura mayor probabilidad de que se
puedan observar bacilos.
Muestra: 3 a 5ml, es generalmente espesa y mucoide . Puede ser fluida
con partículas de material purulento . El color es variable (blanco,
amarillento y hasta verdoso) . A veces son sanguinolentas.

35. Métodos Especiales Para Obtener Muestras
De Esputo.
Siempre se debe intentar conseguir
expectoración espontánea porque produce
la muestra con mayor riqueza en bacilos.
Inducción de
esputo
Lavado gástrico
Consiste en fluidificar las
secreciones mediante
nebulización con solución
fisiológica y facilitar luego su
drenaje .
Se emplea especialmente en
niños que no saben
expectorar para detectar bacilos
en el esputo ingerido, mientras
se encuentran en el estómago.
Lavado bronquial
La obtención de esta
muestra está
reservada a médicos
Especialistas.
(Fibrobroncoscopio).

36. Conservación
Si las muestras de esputo no van a ser procesadas en el día, es aconsejable
introducir cada envase en una bolsa de polietileno y anudar la bolsa encima
de la tapa, de manera que quede sujeta firmemente.
Las muestras deben ser
conservadas en refrigerador,
preferentemente dentro de la caja
de plástico. Si no se cuenta con
refrigerador, ubicarlas en un
lugar fresco y protegidas de la
luz.

37. Transporte
Laboratorio
Se deben establecer los días de la semana
en los que se efectuarán regularmente
los envíos, el medio de transporte y el
horario de salida y de llegada.
• Protección del calor excesivo y de la luz
solar
• Eliminación del riesgo de derrame.

38. Transporte
• Se puede utilizar para el transporte una caja de metal o una de
plástico opaco
• Son útiles las cajas de plástico con tapa de cierre hermético, del tipo
de las que se utilizan en el hogar para conservar alimentos u otros
enseres.

39. Transporte
Cada envío debe ser acompañado por las hojas
de solicitud de examen correspondiente o al
menos por una lista con los de datos de los
pacientes:
Nombre y
apellido, servicio, aclaración sobre si es
muestra para diagnóstico (1ª, 2ª o 3ª) o
para control de tratamiento indicando el
mes.
Los formularios deben ser enviados en un sobre,
fuera de la caja que contiene los envases de las
muestras.

40. Etapa Analítica

41. Baciloscopia Positiva
Para que la baciloscopia sea positiva es preciso que
la muestra tenga como mínimo, entre 5 .000 y 10 .000
bacilos por mililitro de muestra .
Este alto contenido de
bacilos se encuentra en los pacientes con tuberculosis
pulmonar, especialmente en aquellos con enfermedad
avanzada y con lesiones cavitadas.
Aquéllos cuyos esputos tienen bacilos visibles al examen
microscópico directo, deben ser registrados como casos
con baciloscopia positiva.

42. Baciloscopia
Positiva
Baciloscopia Negativa

44. Baciloscopia Negativa
Todos los pacientes con sospecha de tuberculosis, pero cuyas
baciloscopias son negativas, deben ser examinados por un
médico o un responsable sanitario competente, antes de
comenzar el tratamiento.
Radiografías de tórax si la
radiografía de tórax muestra
opacidades en los campos
pulmonares compatibles con una
infección pulmonar.

45. Baciloscopia Negativa
Se debe administrarse un tratamiento
antibiótico completo de amplio espectro;
si los síntomas persisten al cabo de su
tratamiento antibiótico, debe realizarse
una segunda
Serie de tres exámenes de esputo y
en caso de que sigan siendo
negativos, el médico o responsable
sanitario pueden decidir tratar el
paciente como un caso de tuberculosis
pulmonar con baciloscopia negativa y
registrarlo como tal.

46. Etapa PostAnalítica

47. Bibliografía
http://diresaapurimac.gob.pe/laboratorio/TB_MANUAL_BACT
ERIOLOGICO.pdf
http://www.tbrieder.org/publications/books_spanish/orange_guide_s
p.pdf