Este documento describe varias técnicas de cultivo para aislar bacterias como Escherichia coli y Gardnerella vaginalis. Explica el procedimiento para realizar aislamientos en agar MacConkey, agar selectivo y mediante la técnica de estría. Además, detalla los requerimientos nutricionales especiales para cultivar G. vaginalis.

1. Técnicas de
aislamiento de
cultivo
Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann
Facultad de Ciencias
Escuela Profesional de Biologia- Microbiologia

2. Presentado por
➔ Elver Nadyn Mamani Huanca
2020-118002
➔ Nataly Sofia Poma Perez
2016-118011

3. Escherichia coli
Escherichia coli es una bacteria que habita el
intestino humano y de animales de sangre caliente
y usualmente se comporta como comensal, en las
últimas décadas han aparecido grupos que
causan patologías diarreicas, denominadas E. coli
diarreogénicas o E. coli patógenas. Las cepas
patógenas poseen factores de virulencia que
sumados al tipo de enfermedad que producen han
permitido agruparlas en patotipos (Nataro &
Kaper 1998)

4. Tecnicas de cultivo
● Agar nutriente
● Agar Mc Conkey
● Agar Levine
● Agar Sabouraud
● Agar Sangre
● Caldo Nutriente
Tecnicas de cultivo

7. Cultivo

8. Procedimiento de obtención de la muestra
● Se tomó 50 mL de agua de mar, y se
añadió en 150 mL de agua peptonada
marca Merck, se incubó por 24 horas a
35°C ± 1°C para la multiplicación y
reparación de los microorganismos
presentes.
● Después de 24 horas de incubación, se
procedió al aislamiento de las bacterias
coliformes en agar Mc Conkey.

9. Procedimiento en Agar MacConkey
● Suspender los ingredientes en el
agua destilada.
● Calentar agitando frecuentemente y
dejar hervir hasta disolver
completamente.
● Esterilizar en autoclave a 121 ºC (15 lb
de presión) durante 15 minutos. Se
debe evitar el sobrecalentamiento.
● Enfriar entre 45 y 50ºC, colocar 20 ml
de medio por cada placa y dejar
solidificar.

10. Técnica de aislamiento en estría
● Es la técnica más utilizada para aislar a los
microorganismos en una placa de agar.
● Se coloca la muestra y se realiza un barrido
con un asa de inoculación hasta lograr
separar colonias individuales de la cepa de
interés.
Interpretación:
● Desarrollo en el tercer sector:
Abundante
● Desarrollo en el segundo sector:
Moderado
● Desarrollo en el tercer sector:
Escaso

11. Procedimiento de aislamiento en estría
1. Esterilizar el asa en la flama del mechero y
enfriar el asa en un extremo de la placa de
agar.
2. Tomar la muestra con el asa.
3. Estriar la superficie del medio, sin romper
el agar.
4. Esterilizar y enfriar el asa.
5. Estriar el segundo sector, cruzar tres de las
estrías con el primer sector para arrastrar
microorganismos.
6. Esterilizar y enfriar el asa.
7. Estriar el tercer sector de forma similar al
segundo.
8. Esterilizar el asa al término del
procedimiento.

12. Gardnerella vaginalis
es un bacilo implicado en la enfermedad
denominada vaginosis bacteriana,
caracterizada por un desequilibrio en la
microbiota saprofita normal de la vagina con
una disminución de Lactobacillus spp. y un
sobrecrecimiento poblacional de Gardnerella
vaginalis y otras bacterias aerobias y
anaerobias.

14. Fuente:Garcia et. al. (2010)
T
Tecnicas de cultivo

15. Actualmente con el uso de mejores métodos de cultivo se está recuperando
Gardnerella vaginalis con mayor frecuencia de sitios genitales y extragenitales.
El microorganismo es exigente y no crece en agar sangre o agar chocolate con
facilidad, sino que requiere nutrientes especiales para crecer con éxito como:
● Biotina
● ácido fólico
● Niacina
● Tiamina
● riboflavina
● purinas-pirimidinas
Por ende, es necesario un medio basal rico como Agar Columbia, Agar V, o Agar bicapa
semi selectivo HBT, medios generalmente no usados en laboratorios clínicos con
limitados recursos.
G. vaginalis forma colonias
puntiformes redondas, opacas y
lisas después de 24 horas de
incubación a 37° C en tensión
parcial de CO2.

16. Agar selectivo BD para Gardnerella con sangre
humana al 5%
Procedimiento:
1- Con asa bacteriológica estéril trabajando
siempre a la llama del mechero, tomar una
mínima muestra.
2. Sembrar suavemente sobre la superficie tersa
del medio por el procedimiento de agotamiento.
3. Incubar las placas en una atmósfera aerobia
enriquecida con CO2 a 36 ± 2 °C durante 48 – 72 h.
4. Al término de 48-72 horas de incubación
examinar el cultivo y determinar los estudios a
seguir según las características de las colonias y
el tipo de hemólisis observada.

18. Técnica de aislamiento por estría en superficie
● Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo y se extiende
sobre un área pequeña de la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estrías muy
juntas, pero sin hacer presión para no dañar el agar.
● Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de
nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías. Este proceso se repite sucesivamente.
Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posición invertida.
● Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un
elevado número de bacterias.

19. Bibliografia
1. Pascual Mengana, Katiuska; Salazar Rodríguez, Daniel; Nicot Garraguey, Agna; Expósito Boué,
Lourdes M.; Mederos Pérez, Lanny Gardnerella vaginalis. Diagnóstico microbiológico en mujeres
con edad fértil Revista Información Científica, vol. 87, núm. 5, septiembre-octubre, 2014, pp.
855-856 Universidad de Ciencias Médicas de Guantánamo Guantánamo, Cuba.
https://www.redalyc.org/pdf/5517/551757255009.pdf
2. Garcia, Juan Alfredo & Castro-Escarpulli, Graciela & Tomás, Hernández-Mendez & Aguilera,
Guadalupe. (2010). La importancia del diagnóstico oportuno de infecciones del aparato sexual
femenino que cursan con exudado: Gardnerella vaginalis.. PACAL-MEDLAB. 2. 5-12.
https://www.researchgate.net/publication/321137241_La_importancia_del_diagnostico_oportun
o_de_infecciones_del_aparato_sexual_femenino_que_cursan_con_exudado_Gardnerella_va
ginalis
3. https://www.bmxclinicaldiagnostics.com/post/complemente-el-diagnostico-de-microorganismo
s-causantes-de-infecciones-del-tracto-genitourinario
4. https://es.slideshare.net/luisandresjaimetorreblancagodinez/resumen-escherichia-coli
5. http://repositorio.unjbg.edu.pe/bitstream/handle/UNJBG/2356/1203_2017_pacombia_callata_
e_facs_farmacia_bioquimica.pdf?sequence=1&isAllowed=y
6. https://repositorio.urp.edu.pe/bitstream/handle/urp/1016/Benvenutto_vp.pdf?sequence=1&isAll
owed=y