Este documento presenta información sobre la determinación de anticuerpos del virus del dengue mediante la prueba ELISA. Explica que la prueba evalúa la respuesta inmune primaria y secundaria midiendo los anticuerpos IgM e IgG. También describe los procedimientos de recolección de muestras sanguíneas agudas y convalecientes para el diagnóstico, así como los pasos del método ELISA para detección de anticuerpos.

1. UNIDAD 1:
INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA.
Tema 3: Función de los Anticuerpos.
Dr. Abg. Gabriel P. Layedra R. MsC.
Especialista en Infectología y Medicina Tropical
Actualizado hasta
20/May/2021
Subtema 6: Practica No. 3 Determinar anticuerpos del virus del dengue
mediante micro Elisa para valorar la respuesta primaria y secundaria.

2. ➢ ¿Qué es el Dengue?
➢ ¿En que días se toma la muestra para laboratorio?.
➢ ¿Cuáles son los tipos de pruebas de Dengue?
INTRODUCCIÓN

3. Determinar los anticuerpos del virus del dengue mediante micro
Elisa para valorar la respuesta primaria y secundaria.
OBJETIVO

4. UNIDAD 1:
INTRODUCCIÓN A
LA MICROBIOLOGÍA
E INMUNOLOGÍA
Tema 4:
Inmunización
Subtema 6: Practica No. 3
Determinar anticuerpos del
virus del dengue mediante
micro Elisa para valorar la
respuesta primaria y
secundaria.
Función de los Anticuerpos 4/14

5. ACTIVIDAD DE INICIO
Observar vídeo motivador: Dengue. https://www.youtube.com/watch?v=bcVDLzGKZFo
Presentar del syllabus y lineamientos generales para el desarrollo de la asignatura; metodología y sistema de
evaluación.

6. Es una enfermedad viral aguda que puede afectar a personas
de cualquier edad, especialmente niños y adultos mayores,
causada por un virus transmitido a través de la picadura de
mosquitos infectados (Aedes aegypti).

8. COLECTA DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE DENGUE

9. Muestras para aislamiento viral
Las muestras deben ser colectadas en los 3 primeros días del comienzo de la enfermedad.
Deben colectarse asépticamente 10 ml de sangre total la cual será transferida a tubos estériles libres de aditivos o
preservativos.
Los tubos que contienen la sangre se colocaran lo más rápido posible en hielo o en el refrigerador (4C).
Los tubos con el suero se congelarán y almacenarán a temperatura de -70C.
El suero debe enviarse en las primeras 24-48h de colectado el suero, el mismo puede mantenerse a 40C hasta su
envío al laboratorio.
Para el aislamiento del virus a partir de muestras de vísceras (bazo, hígado, ganglios), deben transportarse
también en frío. Se homogeneizan 20g del tejido en 100mL de PBS o medio de cultivo conteniendo suero de
ternero (inactivado por calor) al 10% y antibióticos. Posteriormente se centrifugan a 3000 rpm durante 30
minutos a 4C y se emplea el sobrenadante para el aislamiento.
Es conveniente realizar una prueba de esterilidad en cada caso.

10. Muestras para diagnóstico serológico:
Se toman dos muestras de suero: de fase aguda y convaleciente.
El suero de fase aguda se extrae durante los primeros 5 días de la enfermedad y el de fase convaleciente de 2-3
semanas más tarde.
Para lograr el máximo rendimiento del suero, la sangre colectada se deja a temperatura ambiente por una hora y
durante toda la noche a 4C (refrigerador) antes de centrifugar.
Después de la centrifugación (1000 rpm por 10 minutos a 4C) el suero se transfiere a un tubo previamente
rotulado y se almacena preferiblemente en congelación (-20C). El envío al laboratorio debe realizarse
preferiblemente en congelación (-20C) o a 4C.
Para la determinación de anticuerpos IgM a dengue se utiliza una muestra de sangre tomada a partir del quinto
día de comienzo de los síntomas la que se procesa en forma similar para obtener el suero correspondiente.

11. ELISA DE CAPTURA DE IgM (MAC- ELISA)
El MAC-ELISA aplicado para la detección de anticuerpos IgM a dengue, se ha convertido en una de las pruebas más
utilizadas en los laboratorios, brindando un alto grado de sensibilidad y especificidad.
Hasta el presente, este sistema es un invaluable método para la vigilancia de la FD y FHD/SCD, considerándose los
anticuerpos IgM un importante marcador serológico de las infecciones por dengue.
Estos anticuerpos comienzan a ser detectable con la caída de la fiebre, por lo que se recomienda que las muestras de
suero utilizadas sean obtenidas después del 5to día de comienzo de los síntomas.

12. https://reactlab.com.ec/wp-content/uploads/2021/03/Inserto-Advin-Dengue-IgM-IDEN-C42.pdf
La prueba rápida de dengue es un inmunoensayo
cromatográfico rápido para la detección cualitativa de
anticuerpos IgG e IgM contra el virus del dengue en sangre
total, suero o plasma humanos como ayuda en el diagnóstico
de infecciones de dengue primarias y secundarias.

13. ACTIVIDAD DE CIERRE
Trabajo individual No. 4.
Realice una hoja informativa para sus pacientes de dengue
en Word y guárdelo como pdf.
Practica 4 – Nombres y Apellidos

14. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Madigan M.T, Martinko J.M., Stahl D and Clark D.P., Brock Biology of microorganisms, 13th edition, UK, Pearson Benjamin
Cummings, 2010.
• Madigan M.T, Martinko J.M., Dunlap P.V. and Clark D.P., Brock Biología de los microorganismos, 12a edición, UK, Pearson
Education, 2009.
• Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A., Microbiología, 3a edición, Madrid, México, Mc GrawHill-Interamericana, 2009.
• https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/01historia.htm