Este documento describe los medios de cultivo y métodos de siembra utilizados en microbiología. Explica que los medios de cultivo proporcionan nutrientes para el crecimiento microbiano y se clasifican según su consistencia en líquidos, sólidos y semisólidos. También describe varios métodos de siembra como dilución, picadura, estrías y embadurnamiento. El objetivo es sembrar bacterias de manera aislada para permitir el crecimiento de colonias individuales y realizar pruebas posteriores.

1. Altagracia JiménezAltagracia Jiménez
DíazDíaz
Medios de Cultivo yMedios de Cultivo y
Métodos de SiembraMétodos de Siembra
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3. Medios de Cultivo
Formula básica de los medios de cultivo
 Clasificación de los medios de cultivo
 Métodos de siembra
Clasificación de los métodos de siembra
Técnicas de siembra
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4. Los medios de cultivo son
una mezcla equilibrada de
nutrientes que en
concentraciones adecuadas
y con condiciones físicas
óptimas permiten un buen
crecimiento de los
microorganismos.
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7. Un medio de cultivo es un
sustrato o solución de nutrientes
en los que crecen y se multiplican
los microorganismos en el
laboratorio, con el objeto de aislar
diferentes especies bacterianas,
proceder a su identificación y
llevara cabo una serie de estudios
complementarios.
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8. Los sustratos energéticos y la materia
orgánica sintética (sustratos como proteínas
derivados de la celulosa, etc.) pueden
suministrarse por sustancias nutritivas
contenidas en la maceración de carne y
vísceras.
Los aminoácidos o péptidos los aportan las
peptonas, que contienen todos los productos
de degradación de las proteínas, sin
vitaminas, y su composición exacta varía
según el tipo de sustrato y enzima utilizados,
como pepsina, tripsina, papaína, entre otras.
Los factores de crecimiento se suministran
por maceración y adición de sangre, suero,
extracto de levadura, líquido ascítico, etc
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11. Los medios de cultivo se
clasifican en dos grandes
grupos
1.-1.- Medios de cultivo vivos o animados,
formado por células vivas; huevo embrionario
para el desarrollo de microorganismos muy
exigentes (Virus, Chlamydias, Rickettsias).
2.-2.- Medios de cultivo muertos o
inanimados, formados por mezclas de
sustancias nutritivas para el desarrollo de
microbios menos exigentes (Bacterias, Hongos);
éstos crecen en
medios vivos pero no como una exigencia.
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12. l.l. Líquidos.Líquidos. Contienen los nutrientes
antes citados, a los cuales se les
adiciona una sustancia capaz de
mantener el pH adecuado. Entre
los más empleados están: el caldo
nutritivo y el caldo peptona.
Los medios de cultivo pueden clasificarse según
su consistencia en:
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13. 2. Sólidos.Sólidos. Se obtienen agregando agar, sustancia
polisacárida e inerte obtenida de algas marinas
del género Gellidium, en una concentración
de 1,5 a 2,0%, a un medio líquido determinado.
Este conjunto, debidamente esterilizado, se
vierte en una caja de Petri o en un tubo de ensayo.
Las exigencias nutritivas y las condiciones fisicoquímicas
son similares a las de los medios líquidos.
Pero a diferencia de ellos, ofrecen la
posibilidad de obtener colonias aisladas, siempre
que la cantidad del inóculo esté suficientemente
diluida.
En este caso se observa la existencia de
colonias separadas unas de otras.
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14. 3.3. Semisólidos.Semisólidos. Son muy
semejantes a los medios sólidos,
con la diferencia que a estos se les
disminuye la concentración del agar
agregado a 0,5%.
Se utilizan para la conservación de
cepas bacterianas y la observación y
registro de bacterias móviles .
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15. Los medios sintéticos o químicamente
definidos: son medios compuestos por
productos químicos conocidos y se usan
para estudios metabólicos. Ejemplo: agar
nutritivo, agar blando, caldo nutritivo, agar
eosina azul de metileno, etc.
Los medios naturales o químicamente
no definidos: son aquellos medios
preparados a partir de sustancias naturales
animales o vegetales, de composición no
rigurosamente constante. Ejemplo: el suero,
la leche, la papa, etc. 15

16. Según su composición y utilización los medios de cultivo se
clasifican en:
Agar nutritivo
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17. Agar sangre
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18. Medio de Mac
Conkey
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19. Eosina Azul de
metileno
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22. Medio de Stuart
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24. Asas Y Agujas
Se utilizan para pescar
transportar y sembrar el
material bacteriológico.
Se esterilizan en el
mechero al rojo vivo
antes y después de las
siembras
bacteriológicas.
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25. El resultado lógico de una siembra, si
las condiciones son apropiadas, es el
desarrollo de un cultivo microbiano.
Las siembras se ejecutan con asas o
agujas de platino generalmente.
En ocasiones se emplean hisopos de
algodón estériles, pipetas, de acuerdo
al tipo de estudio a realizar.
Para desarrollar una bacteria invitro hay
que proporcionarle :
1.Nutrientes con los medios de cultivos que
requieran.
2.La atmósfera apropiada
3.La temperatura optima, entre otros.
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27. Siembra por diluciónSiembra por dilución
El asa o aguja de platino
cargados con el material a
sembrar se introduce en el
seno de los medios de cultivo
líquidos y se agita
moderadamente.
El propósito es el de producir
una dilución uniforme del
material bacteriológico en el
medio líquido o caldo. 27

28. Métodos De Siembra
Medio: Líquidos o caldos
Instrumento: Asa
Método: Dilución
Finalidad: poner la
bacteria en suspensión
Medio: Líquidos o caldos
Instrumento: Asa
Método: Dilución
Finalidad: poner la
bacteria en suspensión
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29. Siembra por picaduraSiembra por picadura
La aguja de platino con el material a sembrar en su punta
se introduce el fondo de los medios semi-sólidos, como si
se tratara de una punción de los mismos.
La aguja se retira por el mismo trayecto que
formó cuando penetró, evitando en lo posible los
deslizamientos laterales del alambre.
El sitio de penetración en el medio debe ser el centro de
su superficie libre. El propósito es sembrar las bacterias
solamente en el trayecto que crea la aguja. Es utilizado
para demostrar la movilidad de las bacterias. 29

30. Métodos De Siembra
Medio: Semisólido
Instrumento: Aguja
Método: Punción o
Picadura
Finalidad: observar la
Movilidad.
Si crece en la línea de siembra es
inmóvil.
Si crece fuera de la línea de
siembra es móvil
Medio: Semisólido
Instrumento: Aguja
Método: Punción o
Picadura
Finalidad: observar la
Movilidad.
Si crece en la línea de siembra es
inmóvil.
Si crece fuera de la línea de
siembra es móvil
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31. Siembra por estrías en superficieSiembra por estrías en superficie
Se puede realizar con la aguja o con el asa, preferentemente
con ésta última, en la superficie de los medios sólidos. Estos
medios están incluidos en tubos de ensayo y su superficie se
dispone inclinado con respecto al eje mayor de los tubos.
La estría se comienza en la parte más profunda de la
superficie y se termina en la parte más cercana a la boca del
tubo. La línea quebrada que resulta no debe quedar ni muy
cerrada ni muy abierta.
La superficie del medio se aprisiona delicadamente porque de
otra forma se rompe y la siembra se deteriora.
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MÉTODOS DE SIEMBRA
Medio: Sólido en tubo
Inclinado.
Instrumento: Asa o aguja
Método: Estría en
superficie

33. Siembra porSiembra por
embadurnamientoembadurnamiento
Se practica con hisopos
estériles. pero puede hacerse
también con varillas de cristal,
asas o agujas de platino.
El propósito es embadurnar la
superficie del medio,
produciendo
una película sobre el mismo.
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34. Siembra por estrías por agotamiento en laSiembra por estrías por agotamiento en la
superficiesuperficie
de placa (para aislar colonias).de placa (para aislar colonias).
Mediante este método, las bacterias procedentes de un
material puro o mixto, son dispersadas y agotadas en
cantidad en forma progresiva sobre la superficie de un
medio sólido.
El propósito es que las bacterias se siembren aisladas
unas de otras y crezcan formando colonias separadas que
más tarde se puedan "pescar“ para realizar cultivos puros
y otras pruebas adecuadas, siempre se ejecuta sobre
medios contenidos en placas de Petri, preferentemente
con asa de platino.
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35. 35

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MÉTODOS DE SIEMBRA
Medio de cultivo: TSI
Método: Punción y
estrías en superficie.
Instrumento: Aguja
Finalidad:
Observar los reacciones
(cambios) que ocurren en
la superficie y la
Profundidad.

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Interpretación: Lectura De TSIInterpretación: Lectura De TSI
• Amarillo (A): ácido (utilizo el
azúcar)
• *Rojo (K): alcalino (no
utiliza el azúcar)
• *Negro: presencia de H2S
(H2S+)
• *Burbujas o vacíos, con
levantamiento del medio:
• presencia de H2 + CO2
• H2 + CO2+
• Precipitado negro = H2S
• Amarillo (A): ácido (utilizo el
azúcar)
• *Rojo (K): alcalino (no
utiliza el azúcar)
• *Negro: presencia de H2S
(H2S+)
• *Burbujas o vacíos, con
levantamiento del medio:
• presencia de H2 + CO2
• H2 + CO2+
• Precipitado negro = H2S

38. TECNICA DE BARRY: siembra previa al
vertido del medio en la placa. Para ello se
mantiene el medio de cultivo a una
temperatura de 45 a 50 ºC; se toman de 20
a 25 ml en un tubo de ensayo y se le
adiciona una cantidad de inóculo que
oscila entre 0,1 y 0,4 y se homogeneíza la
muestra en el tubo mediante un vibrador; a
continuación se vierte en la placa de Petri
y se deja solidificar.
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39. TECNICA DE LOS 4 CUADRANTES: con un rotulador
indeleble
se dibujan dos líneas perpendiculares en la base de la placa
(reverso), que se deben cruzar en el centro de la placa, de
forma que esta queda dividida en cuatro cuadrantes iguales. Se
toma con el asa de siembra una cantidad de inóculo y se adiciona
al extremo superior de uno de los cuadrantes, extendiéndose por
todo ese cuadrante en forma de zig-zag. Se realiza la misma
operación si flamear en todos los cuadrantes siguiendo un orden,
de tal forma que iremos arrastrando el microorganismo
problema, observándose en el último cuadrante las colonias más
aisladas o separadas. 39

40. TECNICA DE LOS 3 GIROS : se rotula
la placa de forma análoga al caso
anterior; se toma inóculo con el asa y se
siembra por estría la mitad superior de la
placa. Sin flamear se gira la placa unos
90º y se vuelve a sembrar una segunda
vez. Se gira de nuevo la placa unos 90º y
se repite la operación completándose la
siembra. No es una técnica muy utilizada
porque no permite buenos aislamientos.
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41. Texto:Texto:
Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición Hugo
Humberto Montoya Villafañe
Imágenes :Imágenes :
http://www.sciencephoto.com/media/206305/enlarge
http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/announcement/view/7445
http://www.elika.net/consumidor/es/preguntas_patogenos.asp
http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?
term=Medios+De+Cultivo&lang=2
http://www.biocen.cu/producto/indicemc/veccs1.jpg
http://www.flickr.com/groups/microbiolabstraining/pool/23822998@N08/ 41

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