Este estudio investigó las mutaciones en el gen CSF3R en pacientes con leucemia crónica neutrofílica (CNL) y leucemia mieloide crónica atípica (aCML). Los resultados mostraron que las mutaciones en CSF3R definen estas enfermedades y pueden predecir la sensibilidad a inhibidores de quinasa. Las mutaciones proximales de membrana y de truncamiento en CSF3R transformaron células, lo que sugiere que estas mutaciones contribuyen a la patogénesis de CNL y aCML.

1. Maria Jimena Osorio R.
Leslie Muriel Montoya
Tercer semestre-Medicina

2. Julia E. Maxson, Ph.D., Jason Gotlib, M.D., Daniel A. Pollyea, M.D.,
Angela G. Fleischman, M.D., Ph.D., Anupriya Agarwal, Ph.D.,
Christopher A. Eide, B.A., Daniel Bottomly, M.S., Beth Wilmot, Ph.D.,
Shannon K. McWeeney, Ph.D., Cristina E. Tognon, Ph.D., J. Blake Pond,
M.S., Robert H. Collins, M.D., Basem Goueli, M.D., Ph.D., Stephen T.
Oh, M.D., Ph.D., Michael W. Deininger, M.D., Ph.D., Bill H. Chang, M.D.,
Ph.D., Marc M. Loriaux, M.D., Ph.D., Brian J. Druker, M.D., and Jeffrey
W. Tyner, Ph.D.

3. Leukemia
-Blood cancer.
- Leukocytes and precursors of different cell lines : myeloid, monocytic, erythroid and megakaryocytic
precursors.
- Affects: blood, bone marrow, and lymphoid system.
- Treatment: chemotherapy, medical radiation therapy, hormone therapy or bone marrow transplant.
Chronic myeloid
(myelogenous) leukemia
(CML).
Chronic lymphocytic
leukemia (CLL)
Acute myeloid
(myelogenous) leukemia
(AML)
Acute lymphoblastic
(lymphocytic) leukemia
(ALL)

4. SYMPTOMS
People with CLL or CML may
not have any symptoms.
CLL may have lymph nodes in
the neck, armpit or groin.
 Lack of blood platelets:
Unexplained bruises,
prolonged bleeding
tendencies.
 White blood cells deficients
or dysfunctionals:
Propensity to catch
infections.
 Red cells deficiency:
Anemia.

5.  SYMPTOMS
•Lack of strength, dizziness, nausea, loss of appetite,
significant weight loss.
•Fever that lasts several days without apparent cause,
night sweats, chills.
•Pain in bones, joints and limbs.
•Unexplained bleeding.
•Petechiae or bruising without having had a stroke.
•Enlarged lymph nodes.
•Alterations of blood tests.
•Irregularity in menstrual cycles.

6.  ETIOLOGY
• + Oncogenes
• - Tumor suppressor genes
• (Apoptosis, differentation and mitosis)
DNA
MUTATIONS
• Human T cell LymphotropicVirusVIRUS
• Chromosomal abnormalities
• Certain genetic diseases
GENETIC

7.  DIAGNOSIS
 Complete blood counts.
 Bone marrow examination.
 Biopsy of a lymph node

8. Chronic neutrophilic
leukemia (CNL)
Chronic
myeloproliferative
syndrome
Very rare Hepatosplenomegaly
↑ Vitamin B12 and
serum uric acid
 CHRONIC NEUTROPHILIC LEUKEMIA (CNL)

9.  Affects the maturation of
medullary precursors in
advanced stages of
differentiation.
 40-60 years.
 Translocation in the genetic
material between chrom. 9
and chrom. 22 that
produces the Philadelphia
chrom. and expresses a
BCR-ABL protein.
 It can be categorized
according to the presence or
absence of the Philadelphia
chromosome:
 CHRONIC MYELOPROLIFERATIVE SYNDROME
+ -
Chronic myeloid
leukemia (CL)
Polycythemia vera
(PV)
Essential
thrombocytosis
(ET)
Myelofibrosis (MF)

10.  ATYPICAL CHRONIC MYELOGENOUS LEUKEMIA (LMCa)
•Neutrophilia.
•Hypercellular bone marrow with granulocytic
proliferation and dysplasia.
•Thrombocytopenia.
•Splenomegaly.
•No specific cxitogénicas anomalies.
•Between 70-80 years.
•Absence of Philadelphia chromosome.

11. Receptor for colony
stimulating factor 3
Production,
differentiation, and
function of
granulocytes.
It may function in some
adhesion or recognition
events at the cell
surface.
 CSF3R

13. Identifying the relationship between CSF3R
oncogene, the chronic neutrophilic Atypical
Leukemia and the CML, further research to
develop in order to improve the quality of life of
patients with these diseases.

14. DISEÑO DE ESTUDIO:
- Consentimiento informado oral y escrito.
- Aprobado por las juntas de revisión institucional del Centro de la Universidad de Texas Southwestern
Medical de la Universidad de Colorado, la Universidad de Stanford, la Universidad de Washington en St.
Louis, y Oregon Health and Science University (OHSU).
- Estudios en ratones de acuerdo a un protocolo aprobado por OHSU
- No soporte comercial.
- Ruxolitinib a través del seguro de salud para el tratamiento de los pacientes estudiados.
SECUENCIACIÓN PROFUNDA Y DETECCIÓN DE CÉLULAS PRIMARIAS:
- Hipótesis: pacientes con LMCa y CNL, pueden tener oncógenes que producen sensibilidad a ciertos
inhibidores de cinasas.
- Enfoque funcional-genómico al evaluar células primarias extraídas de 27 pacientes con diferentes
cánceres hematológicos.
- Secuenciación profunda de 1862 genes.
- Cuando fue posible, se expuso las células leucémicas primaria a los paneles de pequeños RNAs de
interferencia específicos de tirosina quinasa (siRNAs) o inhibidores cinasa de molécula pequeña. Esta
prueba ya había sido validada y utilizada en estudios previos relacionados con lesiones celulares y
leucemia.

15. SEUENCIACIÓN: Conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es determinar el orden de los
nucleótidos (A, C, G y T) en un fragmento de ADN.
Método químico (Maxam y
Gilbert):
Menos de 250
nucleótidos.
1. Marcaje del
DNA.
2. Hidrólisis
química selectiva.
3. Análisis de
productos.
Método enzimático (Sanger):
No degradación de
DNA, se inhibe la
síntesis de la
hebra
complementaria.
DNA polimerasa.
1. Síntesis
enzimática.
2. Análisis de
fragmentos.
3.Automatización.

16.  Frecuencia de las mutaciones de CSF3R
 Variantes
 Membrana
proximal
 Cola CSF3R
-D771fs
-S783fs
-Y752X
-W791X
 Ambos 5 (3-7)

17.  Comprobaron que esas mutaciones
compuestas pueden ocurrir en el mismo
alelo.
 AML
 Estudio: 1/92 pacientes
 Cancer Genome Atlas AML data set : 2/200
 Indicencia: 1%  baja

18.  ETP-T-ALL T618I  1/3 pacientes
 T CELL-ALL 8 pacientes N/A
 B CELL-ALL41 pacientes N/A
 Neutrofilia Reactiva SIN MUTACIONES CSF3R
 Conclusión: Mutaciones de CSF3R definen
anormalidad molecular de CNL o CML atípica 
Diagnóstico.

19. Localización y recurrencia de las
mutaciones de CSF3R
 Q741X  AML
 T618I POT-T-ALL
 5 pacientes CNL o
CML atípica

20. Sensibilidad GB Paciente 3 (CNL +
M) a 66 moléculas (-) de kinasas
150 Muestras
Mediana de concentración
inhibitoria IC50 de cada fármaco
50% de concentración inhibitoria
de cada fármaco
Hipersensible : <10%
SFK denota kinasa de familia SRC
y TNK2 tirosina quinasa
nonreceptor 2.

21. Sensibilidad a siRNAs
siRNAs atacan todas las Tirosin
kinasas y FGR (SRC)
Baja la viabilidad de la célula
Se normalizaron al valor de la
mediana
Umbral de significación
Además de llevar la mutación S783fs CSF3R, el paciente 3 tenía una
minoría de clones con una mutación compuesta S783fs-T615A
CSF3R, pero este pequeño porcentaje de células no tenía un efecto
en la sensibilidad a los inhibidores en ensayos a corto plazo.

22. Sensibilidad de GB de
paciente con ETPT-ALL y
una mutación T618I
CSF3R a 66 moléculas de
inhibidoras de Kinasa

23. Células Ba/F3 dependientes de
IL-3 infectadas con retrovirus
murino expresando CSF3R de
tipo salvaje, las mutaciones
proximales de membrana, o
mutaciones de truncamiento.
Controles.
Las mutaciones CSF3R eran
capaces de transformar células
Ba/F3.
Mutaciones (T615A y T618I)
transforman las células en este
ensayo sustancialmente más
rápido que los mutantes de
truncamiento (Q741X y
S783fs).

24. • Células Ba/F3 que expresan
CSF3R T618I o mutaciones
S783fs antes o después de la
transformación independiente
de IL-3. Los lisados ​​celulares
se sometieron a análisis de
inmunoblot.
• Controles.

25. AUTOR APORTE SI NO
Beekman R, Touw IP.,
Liu F, et al.
The high frequency of
activating mutations in
CSF3R in these leukemias,
is consistent with its
function.
X
Piazza R, Valletta S,
Winkelmann N. et al.
The phenotype of CSF3R
mutation–positive
neoplasms may be
modified by additional
unknown molecular
abnormalities or host
genetic factors, such as
mutations in the gene
encoding SET-binding
protein 1 (SETBP1)
X

26. AUTOR APORTE SI NO
Dong F et al. Although CSF3R truncation
mutations have been shown to lead
to constitutive overexpression of the
receptor and ligand hypersensitivity,
the mechanism of action of the
membrane proximal mutation does
not appear to involve similar
receptor overexpression, since the
membrane proximal mutants do not
show analogous overexpression in
the Ba/F3 model
X
Kunter G,
Woloszynek JR,
Link DC
CSF3R truncation mutations
accelerate tumor formation in the
presence of other genetic modifiers
but alone are incapable of causing
AML
X

27.  This study is important because there are a
lot of factors influencing cancer and medicine
must do a deeply research about them to find
a better way of patient care.
 When researchers can establish a relationship
between illness and its molecular causes,
they will be able to find different alternatives
for explaining symptoms and thus improve
its diagnosis and treatment.

28.  It's an important advance, as it gives the
possibility to find new diagnostic tests for
these types of leukemias.
 Know that mutations in CSF3R are related to
CNL and to aCML, gives the possibility to
develop new researches to identify the factors
that cause them, that could be a
breakthrough for modern medicine..

30. CSF3R
Receptor
FSC-3
Crecimiento y
proliferación de
Granulocitos
Interactúa con
moléculas
JACK stat SYK
SRC kinasasHipótesis
CML y CNL
sensibles a
(-) kinasa
siRNAs
Comparación
con otras
Leucemias
Mutaciones de
CSF3R como
Dx de CML y
CNL
Capacidad de
transformación
de las
mutaciones
(IL-3)
Sensibilidad
y TNK-2
Diferencias
entre
mutaciones
por
Localización
Dominio
citoplasmático:
más rápida la
transformación
Tratamiento
Inhibidores de la
familia SRC TNK-2
kinasas y de las
kinasas JAK

31.  http://www.news-medical.net/health/What-
is-Leukemia.aspx
 http://www.cancer.gov/espanol/pdq/tratami
ento/mds-mpd/HealthProfessional/page4
 http://www.saval.cl/cienciaymedicina/destac
ados/mutaciones-en-csf3r-son-frecuentes-
en-leucemias-neutrofilicas-y-mieloides.html
 http://www.genecards.org/cgi-
bin/carddisp.pl?gene=CSF3R