Introducción a la anatomía Microscópica Veterinaria y técnicas histológicas para estudiantes de Medicina Veterinaria. UCLA.

1. M.V. EDUARD MARTINEZ

2.  TODOS LOS SERES
VIVOS ESTÁN
CONSTITUÍDOS POR
CÉLULAS

3. Niveles de organización
CÉLULAS
ÓRGANOS
TEJIDOS

4. Anatomía Macroscópica vs.
Anatomía Microscópica

5.  Anatomía Macroscópica: Estudio del animal mediante
inspección, palpación y disección
 Anatomía Microscópica (Histología): Estudio de
células y tejidos del animal mediante el uso del
microscopio
 Estudio = Preparación de tejidos y células (vivas-
muertas)

6. TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
 Se denominan así al conjunto de procedimientos
aplicados a un tejido (animal o vegetal) con la
finalidad de estudiar sus componentes morfológicos a
través de los microscopios fotónicos y electrónicos

7. MÉTODOS DE ESTUDIO CELULAR
 Métodos in vivo: se
estudia la célula en su
estado natural
 Métodos in vitro: se
estudia la célula viva
pero bajo ambiente
artificial. El método
más utilizado es el
cultivo celular

8. CULTIVO CELULAR
 CONDICIONES Y
REQUERIMIENTOS
 Asepsia rigurosa
 pH del medio de cultivo
igual al de los líquidos
corporales
 Temperatura
 Control O2- CO2

9.  Métodos para tejidos
muertos:
 Se realizan con la finalidad
de preparar células, tejidos
y órganos procedentes de
individuos en los que se
han detenido los procesos
vitales
MÉTODOS DE ESTUDIO CELULAR

10. PREPARACIÓN DE TEJIDOS
MUERTOS
 Técnica de la parafina
 Técnica de la celoidina
 Técnica de congelación

11. TÉCNICA DE LA PARAFINA: PASOS
 Obtención de la muestra
 Fijación
 Deshidratación
 Aclaración
 Inclusión en parafina
 Formación del bloque de parafina
 Microtomía
 Extendido
 Secado

12. Técnica de la parafina
 PASO 1: OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
BIOPSIA NECROPSIA

13.  Características que debe tener la muestra:
 1. Debe ser lo suficientemente pequeña
 2. Debe ser representativa del tejido u órgano a
estudiar

14. Técnica de la parafina
 PASO 2: FIJACIÓN
 Se debe matar a las células, evitar
la autólisis postmortem y la
invasión de microorganismos
 Fijador: agente físico o químico
utilizado para el proceso de
fijación

15. Clasificación de los fijadores
FÍSICOS
QUÍMICOS
DESECACIÓN
CALOR SECO
CALOR
HÚMEDO
CONGELACIÓN
FIJADORES SIMPLES
FIJADORES COMPUESTOS

16. Ejemplos de fijadores químicos
 Fijadores simples: formol 10%, alcohol etílico absoluto
o al 96%, alcohol metílico, ácido ósmico 1-2%,
dicromato de potasio 3-5%
 Fijadores compuestos:
 Solución de Bouin (ácido pícrico, formol, ácido acético)
 Solución de Zenker (dicromato de poasio, cloruro de
mercurio y acido acético)
 Solución de Helly (dicromato de potasio, cloruro de
mercurio y formol)

17.  CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN AGENTE FIJADOR
 Que actúe con rapidez, matando y fijando a las células
antes de que aparezcan los cambios degenerativos
 Alto poder de penetración
 Conservar, en lo posible, las características del tejido
 Que permita manipular los tejidos fijados
 Accesible-económico

18. Técnica de la parafina
 PASO 3: DESHIDRATACIÓN
 Se necesita extraer toda el
agua de los tejidos para dar
paso a la parafina
 Alcohol etílico-isopropílico en
concentraciones crecientes
(60%-100%)

19. Técnica de la parafina
 PASO 4: ACLARACIÓN (o
diafanización)
 Uso de agentes solubles en
alcohol y solventes de
parafina
 Más usados: xileno,
tolueno, benceno y
cloroformo

20. Técnica de la parafina
 PASOS 5-6: INCLUSIÓN Y FORMACIÓN DE
LOS BLOQUES DE PARAFINA

23. Técnica de la parafina
 PASO 7: MICROTOMÍA (obtención de
cortes histológicos)

24. Técnica de la parafina
 PASO 8: EXTENSIÓN Y ADHESIÓN DE LOS
CORTES HISTOLÓGICOS

25. Técnica de la parafina
 PASO 9: SECADO Y ELIMINACIÓN DEL EXCESO DE
PARAFINA

26. COLORACIÓN
 La coloración o tinción es el proceso en el cual se aplica
a las células o tejidos una sustancia colorante
 Colorante: sustancia con color propio capaz de cederlo
a otros cuerpos

27. Bases físicas-químicas de la
coloración
 Teoría física: la coloración ocurre por
fenómenos de absorción.
 Teoría química: la coloración ocurre
por la interacción iónica de los cationes
y aniones de los colorantes con los
aniones y cationes de las proteínas
celulares.

28. Clasificación de los colorantes
 Por su origen:
 Naturales Animal/Vegetal
 Artificiales: Derivados de la anilina, que a su vez es un
derivado de la destilación de la hulla. El colorante
artificial más usado es la eosina
Carmín
Hematoxilina
Orceína

29.  Por el radical con color:
 Colorante básico
 Colorante ácido
 Colorante neutro
 Por los componentes celulares
que colorea
 Colorantes nucleares
 Colorantes citoplasmáticos

30. TIPOS DE COLORACIONES
 De rutina: Coloración hematoxilina-eosina (H-E)
 Ortocromáticas: los tejidos adquieren el color del
colorante empleado
 Metacromáticas: los tejidos o componentes de los
tejidos adquieren un color distinto al del colorante
 Progresivas: el colorante es aplicado en
concentraciones crecientes

31.  Regresivas: los tejidos se sobrecolorean para
someterlos después a la acción de una sustancia
denominada diferenciador, con la finalidad de extraer
el exceso de colorante
 Impregnación: Involucra la deposición de sustancias
metálicas (cobre, plata, oro) en la superficie de las
células y tejidos, por lo que no se considera una
verdadera coloración.

32.  Coloración vital: se utilizan colorantes inocuos para el
estudio de células y tejidos vivos. Existen 2 tipos de
esta coloración: intravital y supravital.
 Coloraciones específicas: para los componentes
celulares o tisulares.

33. COLORACIÓN CON HEMATOXILINA-
EOSINA
 Es la coloración más utilizada en histología
 Consiste en la aplicación de dos colorantes, uno que es
la hematoxilina, que se encarga de teñir el núcleo
celular y la eosina, que tiñe el citoplasma y los
componentes citoplasmáticos, según la afinidad de
cada componente celular

34. COLORACIÓN CON HEMATOXILINA-
EOSINA
 PASO 1: HIDRATACIÓN DEL TEJIDO (5 min)
 PASO 2: COLORACIÓN CON HEMATOXILINA (15 ´)

35.  PASO 3: LAVADO CON AGUA (15´´)
 PASO 4: DIFERENCIAR CON ALCOHOL ÁCIDO
 PASO 5: VIRAR AL COLOR AZUL
 PASO 6: LAVAR CON AGUA
 PASO 7: COLOREAR CON EOSINA
 PASO 8: DESHIDRATACIÓN

36.  PASO 9: ACLARACIÓN
(DIAFANIZACIÓN)
 PASO 10: MONTAJE
DEFINITIVO EN LÁMINAS
(permount) PARA
OBSERVACIÓN AL
MICROSCOPIO
FIG. N° 7

38. IMAGEN NORMAL
ARTEFACTOS

39. Coloraciones especiales
 Técnica de Van Gieson (Fibras colágenas)
 Impregnación Argéntica (Fibras reticulares)
 Tricrómica de Masson (Colágeno)
 Sudán (Adipocitos)
 PAS (Ácido peryódico de Schiff)

40. EL MICROSCOPIO COMO
HERRAMIENTA DE ESTUDIO
 El microscopio es un instrumento que permite
observar objetos que son demasiado pequeños para el
ojo humano

41.  Tipos de microscopios
 Microscopios ópticos
(propios y especiales)
 Microscopios electrónicos
(transmisión- barrido)

42. Objetivos
Oculares
Condensador
Componentes
Ópticos

43. Pinza
Carro
Platina
Componentes
Mecánicos
Tornillo
Macrométrico
Tornillo
Micrométrico
Lámpara
Revolver

44. Componentes
Ópticos
Componentes
Mecánicos
•Condensador
•Objetivos
•Oculares
•Platina
•Pinza
•Tornillo
micrométrico
•Tornillo
macrométrico
•Carro
•Lámpara
•Revolver

45.  MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO

48. REFERENCIAS
GENNESER, FINN. HISTOLOGIA.
CAPÍTULO 2.
http://webs.uvigo.es/mmegias/
6-tecnicas/1-introduccion.php
http://www.anatomohistologia.
uns.edu.ar/plantilla.asp?zona=
modtecni