Este documento proporciona instrucciones sobre técnicas de siembra microbiológica, incluyendo preparación de medios de cultivo, siembra en caldos y placas, y factores que afectan el crecimiento microbiano. Describe métodos como siembra por estrías, cuadrantes, extensión e inmersión para aislar colonias individuales. También explica cómo realizar siembras primarias y secundarias para obtener cultivos puros y cómo conservarlos refrigerados.

1. RESPONSABLE: PERCY WILLIAMS AGUILAR
BURGOS
GRUPO: 1G
DOCENTE: DR. GINO POZZI R.
FECHA: 15-ABR-2014

3. ¿QUÉ REGLAS
NESECITO?
 EFECTÚAR
ASÉPTICAMENTE
 LOS MEDIOS DE
CULTIVO Y EL
INSTRUMENTAL A
UTILIZAR ESTÉN
ESTERILIZADOS
 MANIPULEO ADECUADO
 QUE SE TRABAJE FUERA
DE TODA CORRIENTE DE
AIRE. DE SER POSIBLE
UTILIZANDO UN
MECHERO O BIEN FLUJO
LAMINAR.

4. MATERIAL NESESARIO
PIPETAS DE 1 ML Y 10 ML
ERLENMEYER DE 250 ML
ESPÁTULA
AGAR PLATE COUNT
 AGAR VRBL
AGAR BAIRD-PARKER
CALDO MC CONKEY
ESPÁTULAS DE DRIGALSKY
CAJAS DE PETRI
ESTUFA DE CULTIVO
BAÑO TERMOSTÁTICO
RECIPIENTES PARA BAÑO MARÍA
ANSA DE PLATINO
AGUA DESTILADA
MUESTRA A ANALIZAR
TUBOS DE ENSAYO DE 10 Y 20 ML
CAMPANAS DE DURHAM
ALGODÓN Y GASA

5. TECNICAS DE SIEMBRA
 MEDIOS LIQUIDOS
 CALDOS NUTRITIVOS
 MEDIOS SOLIDOS (agar, gelatina o sílica gel.)
 INMERSION O VERTIDO => anaeróbicos
 EN DOBLE CAPA=> anaeróbicos y aerofilos
 SUPERFICIE O EXTENSION => aeróbicos
 ESTRIAS => colonias aisladas

6. PREPARACION DEL MEDIO
DE CULTIVO
1. SE SIGUEN LAS INSTRUCCIONES DEL MEDIO DE
ACUERDO A LA CANTIDAD A PREPARAR.
2. SE TRANSFIERE A UN ERLENMEYER
3. SE AGREGA LA CANTIDAD DE AGUA DESTILADA
ESTABLECIDA.
4. SE DISUELVEN LOS GRUMOS QUE PUEDAN
FORMARSE
5. SE LLEVA LA SUSPENSIÓN A BAÑO MARÍA HASTA QUE
SE TORNE TRANSPARENTE,
6. SE CUBRE EL ERLENMEYER CON UN TAPÓN DE
ALGODÓN (TORUNDA) ENVUELTO EN GASA.
7. SE CUBRE LA TORUNDA CON MATERIAL
IMPERMEABLE
8. SE ESTERILIZA EN AUTOCLAVE A 121ºC DURANTE 15
MINUTOS.
9. SI SE UTILIZA DE INMEDIATO, DEJAR ENFRIAR A
TEMPERATURA ALREDEDOR DE 45ºC.
10. EN CASO DE QUE EL MEDIO SOLIDIFIQUE, FUNDIRLO
NUEVAMENTE A BAÑO MARÍA ANTES DE SU USO.

7. EN CALDO
1. SE SIGUEN LAS INSTRUCCIONES DEL
ROTULO
2. SE DISTRIBUYE EL CALDO
COLOCANDO 10 ML EN TUBOS DE
ENSAYO DE 20 Y 10 ML EN TUBOS DE
ENSAYO DE 50.
3. SE COLOCA PREVIAMENTE EN LOS
TUBOS UNA CAMPANA DE DURHAM
INVERTIDA.
4. SE TAPAN LOS TUBOS Y SE
ESTERILIZAN EN AUTOCLAVE
DURANTE 15 MINUTOS A 121ºC.

8. ESTRIAS

9. TECNICA 2:
POR CUADRANTES

10. POR EXTENSION

11. INMERSION O VERTIDO

12. Dilución Tipo de microorganismo
10-1 a 10-3 Hongos
10-4 a 10-6 Levaduras
10-7 a 10-10 Bacterias
 PARA EL AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS SE PUEDE APLICAR LA
TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR ESTRÍA O POR
EXTENSIÓN EN SUPERFICIE (SE TRASFIERE
DE 0.1 A 0.5 ML.)

13. SIEMBRA DE MUESTRA
1. TOMAR UNA COLONIA DE LA PLACA UNA VEZ INCUBADA
2. SEMBRAR UNA SEGUNDA EN LA QUE TODAS LAS COLONIAS
QUE CREZCAN DEBEN SER IDÉNTICAS.
3. A PARTIR DE LA SEGUNDA PLACA SE PUEDE RESUSPENDER
UNA DE LAS COLONIAS EN MEDIO LÍQUIDO, CONSIGUIÉNDO
UN CULTIVO PURO.
4. PARA LA CONSERVACIÓN EXISTEN DIVERSOS MÉTODOS, EL
MÁS SIMPLE ES LA RESIEMBRA EN TUBOS INCLINADOS SE
MANTIENEN REFRIGERADOS DURANTE 3-6 MESES.
5. LA INOCULACIÓN PRIMARIA PUEDE HACERSE CON UN ASA
SOBRE LA SUPERFICIE DEL MEDIO EN LA PLACA DE PETRI O
SOBRE CALDOS DE CULTIVOS

14. FACTORES QUE
AFECTAN
 TEMPERATURA => 25ºC – 37ºC
 OXIGENACION
 PH
 AGUA
 CONSERVANTES