Este documento describe procedimientos de laboratorio para el aislamiento e identificación de hongos. Incluye técnicas de examen directo, cultivo y pruebas serológicas y moleculares para diagnosticar infecciones fúngicas a partir de muestras de piel, uñas, pelo, esputo y otros fluidos corporales. También detalla métodos para identificar especies de hongos comunes como Candida albicans, Aspergillus spp. y Criptococcus neoformans usando microscopía, pruebas cromogénic
2. DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO
Examen directo por microscopía, pruebas inmunológicas o
técnicas genéticas.
Aislamiento del agente de diversos sitios anatómicos o fluidos
corporales.
Respuesta de anticuerpos específicos contra el patógeno.
3. MUESTRAS MICOLOGICAS
MICOSIS SUPERFICIALES:
Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton
Pitiriasis versicolor: Malassezia 1
Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae.
Tiña negra: Hortaea werneckii. 1
MICOSIS OPORTUNISTAS:
*Candidiasis: C. albicans, 1,3,4,5,7,8,11
*Criptococosis: C. neoformans. 4,5,6,7,8,10
*Neumosistosis: P. jirovecii
*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides
*Aspergillus: A. fumigatus, A. niger,
A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS
Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii
Histoplasmosis: H. capsulatum
Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS:
Micetoma: Nocardia, Streptomyces, 4, 10
Esporotricosis: S. schenckii. 1, 4, 10
Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
1. Piel (escamas)
2. Pelo
3. Uña
4. Exudado
5. Esputo
6. Lavado bronquiales
7. LCR
8. Orina
9. Medula ósea
10. Frag. de biopsia
11.Sangre
12. Heces
1, 2, 3
2
1*
1. 4, 5, 6
4, 5, 7, 10
4,5,6,7,9,10
4,5,6,7,8,10
4,5,6,10
5,6
4,5,6, 12
4. DIAGÓSTICO DIRECTO DE RASPADO DE PIEL
ARTROCONIDIAS
KOH
Se observa BLASTOCONIDIAS
Compatibles con Malassezia
Azul de Lactofenol
5. CULTIVO DE RASPADO DE PIEL
Sabouraud
Diagnostico:
Dermatofito
30°CT°
Ambiente
6. CULTIVO DE MUESTRAS DE PELO
Diagnostico:
Dermatofito
Trichosporum
Piedraia ¿?
30°CT°
Ambiente
Sabouraud
8. CULTIVO DE MUESTRAS DE UÑA
Diagnostico:
Dermatofito
candidiasis
30°CT°
Ambiente
Sabouraud
9. EXUDADO
MICOSIS SUPERFICIALES:
Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton
Pitiriasis versicolor: Malassezia
Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae.
Tiña negra: Hortaea werneckii
MICOSIS OPORTUNISTAS:
*Candidiasis: C. albicans, etc.
*Criptococosis: C. neoformans
*Neumosistosis: P. jirovecii
*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides
*Aspergillus: A. fumigatus, A.
niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS
Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii
Histoplasmosis: H. capsulatum
Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS:
Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc.
Esporotricosis: S.schenckii
Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
11. EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO DE ORINA
30°CT°
Ambiente
Sabouraud
CENTRIFUGADO
12. 30°CT°
Ambiente
Sabouraud
CULTIVO DE LCR
Detección de antígenos capsulares:
Técnica: aglutinación de partículas de látex sensibilidad con
anticuerpos monoclonales Específicos anti C. neoformans.
Sensibilidad en LCR: > 95%
Sensibilidad cercana al 100%
OTROS:
Histoplasmosis: H. capsulatum
Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
18. SEROLOGIA
MICOSIS SUPERFICIALES:
Dermatofitos: Trichophyton
Microsporum y Epidermophyton
Pitiriasis versicolor: Malassezia
Piedras: Trichosporom ovoides,
T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae.
Tiña negra: Hortaea werneckii
MICOSIS OPORTUNISTAS:
*Candidiasis: C. albicans, etc.
*Criptococosis: C. neoformans
*Neumosistosis: P. jirovecii
*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,
Mucur circinelloides
*Aspergillus: A. fumigatus, A.
niger, A. flavus, a terreus, etc.
MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS
Coccidioidomicosis: Coccidioides
immitis y C. posadasii
Histoplasmosis: H. capsulatum
Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis
Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis
MICOSIS SUBCUTÁNEAS:
Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc.
Esporotricosis: S.schenckii
Cromoblastomicosis: Fonsecaea
pedrosoi y Cladophialophora carrionii
(β -1,3 D-GLUCANOS
19. DETERMINACION DE β -1,3 D-GLUCANOS
PRODUCTOS LIBERADOS EN ALGUNAS INFECCIONES FUNGICAS:
CANDIDIASIS
NEUMOCISTOSIS
ASPERGILOSIS
SE REALIZA EN SUERO SANGUINEO POR METODO DE ELISA Y SU
POSITIVIDAD SÓLO ES SUGESTIVO DE INFECIÓN FUNGICA.
20. PRINCIPIO Y APLICACION
AGAR CROMOGENICO CANDIDA es un medio selectivo y de
diferenciación para el aislamiento de hongos. Con la inclusión de sustratos
cromógenos en el medio, las colonias de C. albicans, C. tropicalis y C. krusei
producen colores diferentes, lo que permite la detección directa de estas
especies de levaduras en la placa de aislamiento.
En el medio la glucosa es el carbohidrato fermentable aporta carbono y
energía. La Peptona aporta nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos
esenciales para el crecimiento. El Cloranfenicol es un antibiótico que ayuda
en el aislamiento de hongos patógenos de muestras clínicas altamente
contaminadas. La Mezcla de cromogenicos permite la identificación y la
diferenciación de las 3 especies de candidas.
Cultivo en medios cromogénicos
21.
22. La región genómica más frecuentemente utilizada para detectar ADN
fúngico e identificar especies, es la que incluye el complejo ribosomal
(genes 18S, 5.8S y 28S). Estos genes contienen secuencias conservadas
comunes a todos los hongos y también, dominios variables y regiones
espaciadoras internas (ITS), altamente variables.
BIOLOGIA MOLECULAR:
PCR
PCR: Es una síntesis in
vitro, exponencialmente
progresiva, de una
secuencia (target) de ADN