1. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE
HONDURAS EL VALLE DE SULA
Asignatura: Genética
Catedrático: Msc. Suyapa Villatoro
Carrera: Medicina
Tema: Laboratorio # 4
Citogenética Humana
Alumnos: Mario Román Murcia 20102000248
José Moisés Canales 20102005016
San Pedro Sula, Cortes 19 de Noviembre de 2012

2. Índice
I. Introducción………………………………….. 2
II. Objetivos……………………………………... 3
III. Materiales…………………………………….. 3
IV. El Ciclo Celular... ……………………………. 4
V. El Cariotipo Humano….……………………… 7
VI. Métodos para Identificaciónde
Cromosomas………………………………...... 8
VII. La Cromatina Sexual-…………………............. 9
VIII. Resultados……………………………………. 11
IX. Conclusiones………….……………………… 22
X. Anexos…...…………………………………. 23
XI. Bibliografía…………………………………. 24
Citogenética Humana 1

3. Introducción
En el siguiente trabajo se describe la práctica de laboratorio que tuvo lugar el
día 10 de Noviembre de 2012. Dicha práctica se llama Citogenética Humana
en la cual estudiamos las fases de la Mitosis, observamos el Corpúsculo de
Baar y aprendimos sobre la obtención de un cariotipo. Esto último es parte
de la Citogenética Humana que a continuación se detallara un poco más.
La Citogenética Humana es la parte de la genética que estudia los
cromosomas humanos mediante el cultivo de tejidos. Y gracias a ésta se han
podido identificar gran cantidad de enfermedades raras que no se sabía que
existían y que no se habían catalogado.
La citogenética puede ser utilizada tanto para el estudio de enfermedades
congénitas como enfermedades adquiridas.
Permite identificar alteraciones cromosómicas en el feto, como los síndromes
de Down, de Edwards, de Turner o de Klinefelter, entre otros, o bien
diagnosticar malformaciones posteriores; se puede aplicar a los síndromes
del niño nacido con determinados rasgos morfológicos o problemas de
desarrollo del sistema nervioso; ayudar a definir los trastornos en parejas con
problemas de fertilidad o esterilidad; así como ayudar a determinar
diagnósticos en casos de leucemia y linfomas a través del estudio del
cariotipo, entre muchas otras aplicaciones.
Actualmente están evolucionando las técnicas del estudio de los
cromosomas, existe una que los pinta con diferentes colores, otra que hace
fluorescente algún fragmento de ADN para estudiarlo en lo particular, o la
llamada hibridación 'in situ', que permite analizar muchos genes a la vez.
Citogenética Humana 2

4. Objetivos
Comprender los procesos del ciclo celular con su respectiva interfase.
Identificar cariotipos según el ordenamiento de los cromosomas.
Conocer diferentes técnicas en bandeo para la identificación de
cromosomas.
Observar el corpúsculo intranuclear de las Células, para la
identificación del sexo.
Materiales
Acetatos de Cariotipos Portaobjetos y Cubreobjetos
Solución de Aceto-Orseina Microscopios
Placas de Mitosis Palillos Estériles
Citogenética Humana 3

5. CicloCelular
El Ciclo Celular es un conjunto ordenado de eventos que culmina con el
crecimiento de la célulay la divisiónen dos células hijas. Durante el Ciclo
Celular el núcleopasa por dos fases claramente diferenciadas: La Interfase o
Intercinesis y la DivisiónCelular que puede ser de dos tipos MITOSIS y
MEIOSIS. Las células que no están en división no se consideran que estén en
el Ciclo Celular. Las etapas de la Interfase, mostradas, son G1-S-G2-M. El
estado G1 quiere decir “GAP 1” (Intervalo 1); en que la céluladuplica su
tamaño y aumenta la cantidad de organelas, enzimas y otras moléculas. El
estado S representa “Síntesis”. Este es el estado cuandoocurre la
Replicacióndel ADN. El estado G2 representa “GAP 2” (Intervalo 2). El estado
M representa “Mitosis”, y es cuando ocurre la DivisiónNuclear (Los
cromosomas se separan) y Citoplasmática(Citocinesis).
La Mitosis además se divideen 4 fases.Mitosis es la división nuclear mas
citocinesis, y produce dos células hijas idénticas durante la
profase,prometafase, metafase, anafase y telofase. La
interfasefrecuentemente se incluye en discusiones, sobre mitosis, pero la
interfase técnicamente no es parte de la mitosis, más bien incluye las etapas
G1, S y G2 de Ciclo Celular.
Citogenética Humana 4

6. Interfase y Mitosis
Interfase La célula está ocupada en la actividad
metabólica preparándose para la mitosis (Las
próximas 4 fases que conducen e incluyen la
División Nuclear). Los Cromosomas no se
disciernen claramente en el núcleo, aunque
una mancha oscura llamada nucléolo, puede
ser visible. La célula puede contener un par
de Centriolos (o Centros de Organización de
Micro túbulos en los Vegetales) los cuales son
sitios de Organización para los Micro túbulos.
Profase La Cromatina en el Núcleo comienza a
condensarse y se vuelve visible en el
Microscopio Óptico como Cromosomas. El
Nucléolo desaparece. Los Centriolos
comienzan a moverse a polos opuestos de la
célula y fibras se extienden desde los
Centrómeros. Algunas fibras cruzan la célula
para formar el Huso Mitótico.
Pro metafase
La Membrana Nuclear se disuelve, marcando
el comienzo de la Pro metafase. Las Proteínas
se adhieren a los Centrómeros creando los
Cinetocoros. Los Micro túbulos se adhieren a
los Cinetocoros y los Cromosomas comienzan
a moverse.
Citogenética Humana 5

7. Metafase
Fibras del Huso alinean los Cromosomas a lo
largo del medio del Núcleo Celular. Esta
línea es referida como el plato de la Meta
fase. Esta organización ayuda a asegurar
que en la próxima fase, cuando los
Cromosomas se separan, cada nuevo núcleo
recibirá una copia de cada Cromosoma.
Anafase
Los pares de Cromosomas se separan en
los Cinetocoros y se mueven a lados
opuestos de la Célula. El movimiento es el
resultado de una combinación de el
movimiento del Cinetocoro a lo largo de
los Micro túbulos de Huso y la interacción
física de los Micro túbulos Polares.
Telofase
Las Cromátidas llegan a los Polos Opuestos
de la Célula, y nuevas Membranas se
forman alrededor de los Núcleos hijos. Los
Cromosomas se dispersan y ya no son
visibles bajo el Microscopio Óptico. Las
Fibras del Huso se dispersan y la
Citocinesis o la Partición de la Célula
pueden comenzar también durante esta
etapa.
Citogenética Humana 6

8. Citocinesis
En Células Animales, la Citocinesis ocurre
cuando un Anillo Fibroso compuesto de
una Proteína llamada Actina, alrededor del
Centro de la Célula se contrae pellizcando
la célula en dos células hijas, cada una con
su núcleo. En Células Vegetales, la Pared
rígida requiere que una Placa Celular sea
sintetizada entre las dos células hijas.
Cariotipo Humano
En 1956, Tijo y Levan establecierondefinitivamente que la dotación
cromosómica humana esta compuestapor 22 autosomas y el par de
cromosomas sexuales, se puede decir que a partir de esta fecha nació la
Citogenética Humana.
El objetivo fundamental de la Citogenética es analizar como la estructura y
comportamiento de los cromosomas garantizan la conservación de la
información genética, su transmisión de padres a hijos y su liberación
ordenada para controlar el desarrollo del organismo. Asimismo se estudian
las variaciones que afectan a los cromosomas, sus consecuencias genéticas y
sus implicaciones evolutivas.
Los cromosomas pueden ser de dos tipos: Autosomas y Gonosomas o
Cromosomas Sexuales. Los Autosomas se enumeran del 1 al 22 por tamaños
decrecientes y dentro del mismo por la posición delcentromero. Los
Cromosomas Semejantes se reúnen en grupos que se designan por las letras
de la A–G, a los CromosomasSexuales X e Y se les incluye en grupo que les
corresponde por su tamaño.
Citogenética Humana 7

9. Métodos para identificar los Cromosomas
Actualmente es posible identificar cada cromosoma utilizando técnicas de
tinción de alta resolución las cuales incluyen:
Bandas G: Los Cromosomas se tratan con Tripsina para desnaturalizar
las proteínas cromosómicas y luego se tiñen con Giemsa. Cada par de
cromosomas se tiñe con un patrón característico de bandas claras y
oscuras.
Bandas Q: Los Cromosomas se tiñen con Quinacrina y se examinan por
Microscopia de Fluorescencia. Los cromosomas se tiñen en patrones
específicos de bandas brillantes y opacas. Las bandas brillantes
corresponden casi exactamente a las Bandas G oscuras.
Bandas R: Los Cromosomas se calientan antes de colorearlos con
Giemsa, también se producen bandas claras y oscuras.
Bandas C: Se tiñe específicamente la región Cetromerica y otras
regiones que contienen Heterocromatina.
Bandeo de Alta Resolución: La técnica consiste en hacer bandas G o R
en preparaciones cromosómicas anteriores a la Meta fase, cuando los
cromosomas no están tan condensados. El bandeo en pro fase solo se
utiliza cuando se sospecha una anomalía estructural.
Estas Técnicashan permitido la creación de los Ideogramas
(MapasCromosómicos). Un Ideograma es unarepresentación grafica de un
cromosoma utilizando tinciones, en estosmapas se muestra la
relaciónexistente entre el brazo corto y el largo, posición del centromero; y si
elcromosoma es Acrocéntricotambién se ilustran los tallos y los satélites.
Citogenética Humana 8

10. Cromatina Sexual
La existencia de un dimorfismo sexual en los núcleos de lascélulas en
interfase fue demostrada por primera vez por GEITLER (1937) en insectos, y
sugirió a SMITH (1945) la posibilidad de utilizar esta diferencia para
eldiagnostico del sexo.
En 1949, BARR BERTRAM observaron la presencia deuna masa
heterocromática,planoconvexa de un tamaño medio de 0.7x1.2 micras,
adyacente a la Membrana Nuclear en las Células Nerviosas de la Hembra de
Gato. Esta “Masa BARR” o cromatina sexual, a veces de aspecto bipartido,
fue utilizada por MOORE y col. (1953) para el Diagnosticodel Sexo en
mamíferos, y su existencia en el hombre fue confirmada por MOORE y BARR
en 1954.
La presencia de masas BARR en células femeninas pero no masculinas hizo
pensar que la cromatina sexual estaba formada por uno de los dos
cromosomasX presentes enla hembra, hasta que OHNO y MAKINO (1961)
demostraron su origen a partir de un solo de ellos, precisamente el
cromosoma X heterocromático que replica tardíamente su DNA. Este hecho,
junto a sus observaciones sobre el efecto “Variegated” en elratón, llevaría a
MARY LYON a formular su hipótesis sobre la inactivación de uno de los
cromosomas X en la hembra. Esta inactivación se lleva muy temprano
durante el periodo embrionario entre el día 9 y 18 después de la fertilización,
la inactivación del cromosoma es al azar de origen materno o paterno, esta
hipótesis de LYONIZACION ha permitido explicar que algunas mujeres pueden
presentar enfermedades de herencia recesiva ligada al cromosoma X, como
la Hemofilia, Distrofia Muscular de Duchene, etc.
En el pasado, esteexamen se utilizaba para indicar:
Desarrollo Sexual Anormal
Genitales Ambiguos
Amenorrea
Sospecha de Anomalías Cromosómicas
Citogenética Humana 9

11. Hoy en día, si el Medico sospecha que puede existir alguna de estas
anomalías, es muy probable que solicite realizar un análisis deCromosomas
Completo (denominado Cariotipo).
El Frotis Bucalse utiliza principalmente en las olimpiadas y otros eventos
deportivos cuando las autoridades sospechan que un hombre intenta
competir como mujer.
El Frotis Bucales un examen donde se extraen células de la lengua. Estas
células se recolectan frotando la lengua con una espátula y luego se colocan
en un portaobjetos previamente limpio con Alcohol al 95%, se agrega dos
gotas de Solución de Aceto-Orseina,coloque un cubre objetos y aplaste
suavemente sobre el papel toalla, espere 20 minutos, observe en 100x. Las
células se evalúan para determinar la presencia de cuerpos de Barr (masa
observada en un cromosoma normal de sexo femenino). El Examen de Frotis
Bucal puede confirmar si el paciente es Hombre o Mujer.
Citogenética Humana 10

12. RESULTADOS
1. Observar y Dibujar cada una de las Fases de la Mitosis colocados
en los Microscopios.
Profase Pro metafase
Se ve un montón de partículas en Las cromosomas que estaban
Interior, eso que se ve son todos agrupadas en un solo sitio
Los cromosomas agrupados en empiezan a separarse y
Una sola ubicación emigran a los polos
Se puede notar que los cromosomas
Empiezan a agruparse en el centro
En una sola linea
Citogenética Humana 11

13. Anafase Telofase
Se nota que la línea de Cromosomas Hoy ya se puede notar que los
Empieza a separarse hacia los polos cromosomas se separaron y se
Para formar dos grupos diferencian en dos grupos
(A) (B)
En la figura A se nota que ya los dos grupos de
Cromosomas ya están bien agrupados en sus
Respectivos grupos. En la figura B se nota
El resultado de esa desunión: Dos
Nuevas células
Citogenética Humana 12

14. 2. Explicar cómo se obtiene un Cariotipo Humano.
Antes de obtener un Cariotipo tenemos que llenar ciertos requisitos:
Las células deben encontrarse en división.
Las células deben pararse en metafase,
Con el objetivo de conseguir una buena separación cromosómica,las
células deben someterse a choque osmótico.Para ello, se emplea un
medio hipotónico (0,075M KCl), que ocasiona el aumento de volumen
de las células.
Las células tienen que ser fijadas.
Hay que proceder a la tinción de los cromosomas para que sean
identificables
Método de estudio del cariotipo
Toma de sangre periférica y separación de los glóbulos blancos
(linfocitos T).
Incubación en presencia de productos que inducen a la mitosis
(mitógenos), como la fitohemoaglutinina.
Detención de la mitosis en la metafase (utilizando colchicina, que
interfiere en la polimerización de los microtúbulos del huso mitótico).
Paso por un medio hipotónico que hace que las células se hinchen.
Depositar una gota de la preparación entre porta y cubre (sobre el cual
se hace presión para dispersar los cromosomas).
Fijar, teñir y fotografiar los núcleos estallados (10-15; 30 en mosaicos).
Se miran de 10 a 15 núcleos porque puede haber muchos falsos
positivos debido a que le hemos añadido mitógenos (de manera que
las células se dividen de forma rápida y precipitada) y colchicina, los
cuales pueden provocar mutaciones e irregularidades en los
cromosomas. Si los 10-15 núcleos no son iguales puede ser debido a
estas sustancias o a que nos encontremos delante de un organismo
mosaico (por lo que deberíamos mirar más núcleos).
Citogenética Humana 13

15. 3.Dibujar el Cariotipo y el Ideograma observados en el laboratorio,
indique el Sexo que le corresponde.
Cariotipo de un hombre
Ideograma de un hombre
Citogenética Humana 14

16. 4. ¿De que Células Sanguíneas se obtiene el Cariotipo?
Los Glóbulos Blancos ya que tienen facilidad de crecimiento y
capacidad de dividirse en cultivos fácilmente.
5. Cuál es el Estimulante de la mitosis utilizado en la obtención del
cariotipo.
La fitohemaglutinina.
La fitohemaglutininaes una Mucoproteína extraída de las alubias rojas
(Phaseolusvulgaris), capaz de aglutinar los hematíes y de provocar la
proliferación de los pequeños linfocitos cultivados in vitro y su
transformación en grandes células blásticas, análogas a las células
inmunocompetentes o inmunoblastos (Nowell).
6. Que Reactivo se utiliza para detener la división celular en
metafase.
La colchicina.
La colchicina es un fármacoantimitótico que detiene o inhibe la división
celular en metafase o en anafase. Es un compuesto evita la distribución
de las cromátidas de un cromosoma durante la mitosis, provocando la
poliploidía de la célula filial, ya que aunque no haya separación, sí hubo
duplicación previa del material genético.
Citogenética Humana 15

17. 7.Dibujar y Explicar cada pasó realizado en la Cromatina Sexual.
Lo hicimos por medio de un frotis bucal. Siguiendo estos pasos:
1. Extrajimos células de la lengua frotando con un hisopo.
2. Frotamos el hisopo en un porta objetos.
3. Agregamos dos gotas de solución de acetato de Orseina
4. Colocamos un cubre objetos
Citogenética Humana 16

18. 5. Esperamos 20 minutos
6. Observamos en el microscopio
8. Dibuje y Rotule: Citoplasma, Núcleo y Corpúsculo de BARR.
Citogenética Humana 17

19. 9.Cuantos corpúsculos de BARR se observarían en los siguientes
casos: En varones 46XY, 47XXY, 48XXXY. En mujeres 45X, 46XX, 47
XXX.
Hombres Mujeres
46XY= 0 Normal 45X= 0 S. de Turner
47XXY= 1 S. de Klinefelter 46XX= Normal
48XXXY= 2 47XXX= 2 S. de Superhembra
10. En que Patologías indicaría usted realizar un Estudio
Citogenética Humana 18

20. Citogenético.
1) Periodo Prenatal: 2) Periodo neonatal:
- Edad mayor de 35 años - Malformaciones mayores
- Ansiedad materna aisladas
- Triple screening alterado - Presencia de 3 o más defectos
- Oligoamnios-polihidramnios Congénitos menores
- Retraso de crecimiento intrauterino - Recién nacido con rasgos
(CIR) dismorficos
- Arteria umbilical única - Recién nacido con genitales
- Sospecha ecográfica de ambiguios
Cromosomopatía - Parto con producto muerto de
- Antecedentes de cromosomopatía causa inexplicable
balanceadaen un progenitor - Muerte neonatal de causa inex
3) Periodo de lactancia: 4) Periodos Preescolar-Escolar:
- Niños con dificultades para el - Trastornos del crecimiento.
aprendizaje. - Retraso psicomotor.
- Niños con rasgos dismórficos. - Con rasgos dismórficos.
- Niños con retraso psicomotor.
5) Periodo de adolescencia:
- Ginecomastia - Falta de desarrollo puberal - Amenorrea primaria o
- Retraso mental - Rasgos dismórficos. secundaria
6) Periodo del adulto:
Citogenética Humana 19

21. - Padres de niños con anomalías cromosómicasestructurales.
- Abortos de repetición. - Infertilidad inexplicable.
- Diagnostico prenatal (liquido amniótico ybiopsia de corion).
- Rasgos dismórficos.
7) En todas las edades:
- Procesos malignos (cariotipo constitucional ytumoral).
- Control de trasplantes de medula ósea.
11. Que Técnicas de Bandeo son más Utilizadas.
Bandas G Bandas Q
Bandas R Bandas C
12. Cual ha sido la contribución de la Citogenética en la localización
de los Genes.
La Citogenética destaca su contribución a la identificación y localización de
genes causantes de patologías humanas, muchas de ellas hereditarias. El
estudio tendente a identificar un gen y las nuevas metodologías han
potenciado sus capacidades de integración en ellos. En muchos casos el
análisis citogenético de pacientes para una determinada patología ha
mostrado alteraciones citogenéticas recurrentemente asociadas a la misma
13. En que se basa la Hipótesis de Lyon.
Citogenética Humana 20

22. Hipótesis de Lyon: compensación de la dosis e inactivación del cromosoma
"X".
Hipótesis de Lyon (1961): en una fase temprana de la embriogénesis uno de
los cromosomas "X" elegido al azar de cada célula de la hembra es inactivo;
este mismo cromosoma permanecerá como inactivo en todos los
descendientes de cualquier célula dada. De hecho las hembras
heterocigóticas para caracteres ligados al sexo ofrecen mosaicos para el gen
recesivo (hemofilia). No se conoce cual es el momento del desarrollo en el
cual un cromosoma "X" se hace inactivo: posiblemente cuando la blástula ha
alcanzado 2 o 3 mil células.
El desequilibrio cuantitativo de los cromosomas autosómicos determina
grandes anormalidades fenotípicas. Sin embargo, en el caso de los
cromosomas sexuales ("X" especialmente) las anormalidades son por lo
general más leves.
En los mamíferos, las hembras poseen una doble dosis de cromosoma "X" y
los machos una única dosis. Actualmente se acepta la hipótesis de que la
compensación de la dosis en los mamíferos se debe al hecho de que sólo uno
de los dos cromosomas de la hembra es metabólicamente activo en cualquier
célula en un momento dado (el otro cormosoma X está inactivado). Se
comprovó que las hembras de los mamíferos tienen un corpúsculo de Barr o
cromatina sexual. Este corpúsculo no existe en los machos XY, y está
presente en con el número de n-1 en hembras con "n" cromosomas "X".
También está presente (1 corpúsculo) en los machos Klinefelter.
Los corpúsculos de Barr son cromosomas "X" genéticamente inertes
(inactivados), pero parece ser que no todos sus genes son inertes (Rusell,
1963).
Parece ser que uno de los cromosomas "X" va a ser destinado a formar el
corpúsculo de Barr y no su homólogo.
Citogenética Humana 21

23. Conclusiones
Al terminar esta práctica pudimos comprender aun mas las fases del
ciclo celular ya que al ver las placas microscópicas se pudo apreciar
claramente cada uno de los ciclos.
Cabe destacar que al aprender mas sobre los cariotipos se nos hace
aun mas fácil el ordenamiento de los cromosomas ya que aprendimos
todos los grupos de cromosomas existentes.
Por lo tanto al conocer las diferentes técnicas en bandeo para la
identificación de cromosomas se nos hace mas fácil optar por una
dependiendo de lo que contemos.
Por ultimo al observar la Cromatina Sexual al microscopio pudimos
aprender que fácil es deducir si es hombre o mujer o si tiene alguna
alteración cromosómica ligada a X
Anexos
Citogenética Humana 22

24. Citogenética Humana 23

25. Citogenética Humana 24

26. Citogenética Humana 25

27. Bibliografía
http://www.aollatinoblog.com/2008/02/19/que-es-la-citogenetica/
http://biol1c201.blogspot.com/2009/07/divisiones-celulares.html
http://laceluladeane.blogspot.com/2011/11/cariotipo.html
http://www.portalesmedicos.com/diccionario_medico/index.php/Fito
hemaglutinina
http://es.wikipedia.org/wiki/Colchicina
http://www.aeped.es/sites/default/files/documentos/3-
estudiogene.pdf
http://www.sc.ehu.es/towsoesj/Biologia%20Educacion/Web%20CRO
MOSOMOPATIAS/Otros%20archivos/Hipotesis_Lyon.htm
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