DIAGNOSTICO DE ALERGIA EN PERU . EDGAR MATOS BENAVIDES INMUNOLOGO ALERGOLOGO

2. ALERGIA MECANISMOS
INMUNOLOGICOS
METODOS DE
DIAGNOSTICO
Dr. Edgar Matos Benavides
Inmunologo Alergologo

3. PREVALENCIA DE LAS ENFERMEDADES ALERGICAS
EN LA POBLACION PEDIATRICA GENERAL
En la actualidad se estima que:
• un 3% de los niños son alérgicos a alimentos
• un 8 % presentan dermatitis atópica
• entre un 8 % y un 10% padecen asma
• casi un 20 % sufren de rinitis o rinoconjuntivitis.

4. El País, martes 24 de junio de 2003

5. ENFERMEDAD ALERGICA: ETIOLOGIA
Predisposición
GENETICA
Exposición a
ALERGENOS
ENFERMEDAD ALERGICA
CONTAMINACION
HUMO TABACO
VIRUS-BACTERIAS

6. ALERGIA
“ Reacción exagerada de defensa a
una sustancia particular, que puede
ser inhalada, ingerida o inoculada en
nuestro cuerpo y provocar una
respuesta inmunológica de tipo
inflamatorio. ”

7. Alergia una Enfermedad Sistémica
RINITIS
ALERGICA
CONJUNTIVITIS
SINUSITIS
OTITIS
RGE
ALERGIA
ALIMENTARIA
DERMATITIS ATOPICA
ASMA
BRONQUIAL
Alergia
URTICARIA
ANGIOEDEMA
PRURIGO POR
INSECTOS

8. histamina,
factor quimiotáctico de los eosinófilos
factor quimiotáctico de los neutrófilos
leucotrienos
prostaglandinas y tromboxanos
factor activador de las plaquetas
IL- 4 e IL- 5
• vasodilatación
• aumento de la permeabilidad vascular postcapilar
• edema
• contracción de la musculatura lisa
• aumento de la secreción de las glándulas mucosas

9. Componentes principales que se requieren
para que la reacción alérgica se
desencadene
IgE
ALERGENOS
Mastocitos Histamina
Leucotrienos

10. 1ª
Identificar y relacionar la clínica
del paciente con los posibles alérgenos:
HISTORIA CLÍNICA
Etapas diagnósticas
2ª
Demostración de sensibilización mediada por IgE
para el o los alergenos sospechoso:
Pª CUTÁNEA, IgE SÉRICA ESPECÍFICA
3ª
Confirmación de que el alérgeno es el responsable de
la clínica:
Pª de PROVOCACION o EXPOSICIÓN CONTROLADA
TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS

11. PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA

12. PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA
+
Diámetro
 3 mm
15 minutos

13. solo están indicadas
en el estudio de la alergia medicamentosa y venenos

14. Prick-Film. Lectura de prick
test con Escáner

15. Prick-Film. Lectura de prick
test con Escáner

18. Aplicación Alergenos
Punción con Lanceta
Secado Piel
Espera de Reacción
Contorneado de Habones
Traslado a Hoja Codificada
Lectura Escáner
Impresión Resultados

19. FUNDAMENTO
La prueba se basa en el principio del análisis del immunoblot. Los
alérgenos especiales están pegados a la superficie de las
membranas de la nitrocelulosa que se colocan en un canal de
reacción.
.

20. B
NBT
B
B
NBT
Comparación con el método de
referencia (IgE):
Comparación con el skin-prick test:
Sensibilidad: 84.3 % Sensibilidad: 95.1 %

21. FUNDAMENTO immulite.pdf
•IMMULITE 2500 3gAllergy™ IgE Específica es un análisis
enzimoinmunométrico quimioluminiscente en fase sólida, en dos
pasos,
•Se basa en cinéticas en fase líquida en formato de bola10,11 .
• Representa un avance significativo sobre los métodos
convencionales basados en la unión de los alérgenos a un
soporte sólido, como los discos de papel.
•Los alérgenos se unen covalentemente a una matriz
polímero/copolímero soluble, la cual a su vez está marcada con
un ligando. El uso de un copolímero aminoacídico aumenta la
cantidad de alérgeno que puede soportar la matriz.

22. FA
S

23. E
E
4MUP
E
4MUP

24. Tecnología ImmunoCAP
CAP System™
ImmunoCAP®

25. ImmunoCAP™
Capacidad de ligando: tubo recubierto; disco papel; esponja celulosa
Tubo
recubierto
ImmunoCAP
Disco papel
activado
Esponja celulosa
activada
1 50 150
™
Fases sólidas:

26. IgE del paciente
Alergenos (Anti-IgE acoplado al ImmunoCAP)
Anti-IgE paciente unido a enzima β-Galactosidasa
Complejo: Alergeno-IgE paciente
Sustrato de la enzima β-Galactosidasa
Complejo: Alergeno-IgE paciente-Anti-IgE
Reacción enzimática: β-Galactosidasa
Sustrato no fluorescente Sustrato fluorescente
Detección
FEIA: Fluoroenzimoimmunoensayo

27. N. Liappis, A. Starke, Allergologie, Jahrgang 20; no 6/1997: 291-295
Reproducibilidad del Sistema ImmunoCAP

28. Patrón WHO 75/502 Tecnología
ImmunoCAP™
WHO
El primer test alergológico del mundo con calibración
directa según patrones 2º IRP WHO 75/502 pera IgE.

29. Similitudes y diferencias entre la tecnología Phadia ImmunoCAP™
in vitro y la prueba cutánea in vivo
Características Tecnología
Phadia ImmunoCAP
Prueba cutánea
in vivo
Alta sensibilidad Sí Sí
Alta especificidad Sí Sí /No
Alta reproducibilidad Sí No
Resultados cuantitativos Sí Sí /No
Calibrado según la OMS Sí No
Programa con garantía de calidad Sí No
Prueba utilizable con independencia Sí No
del tratamiento farmacéutico
Prueba utilizable con independencia Sí No
del estado cutáneo del paciente
(es decir, dermatitis atópica)
Referencia: From In Vitro Veritas Broschyre

30. IG E Especifica

32. Tests de screening

33. Tests de screening

34. Tests de screening

35. Tests de screening

36. Tests de screening

38. 1.-La identificación precoz de los niños que padecerán asma
persistente es de capital importancia
2.-La atopia es el principal factor de riesgo en el padecimiento de
asma
3.-Es posible reconocer la atopia, desde muy temprana edad,
identificando la sensibilización a alimentos y a inhalantes
4.-En niños con dermatitis atópica, la presencia de esta
sensibilización tiene un alto valor pronóstico de evolución futura
a asma
Conclusiones

39. 1ª
Identificar y relacionar la clínica
del paciente con los posibles alérgenos:
HISTORIA CLÍNICA
Etapas diagnósticas
2ª
Demostración de sensibilización mediada por IgE
para el o los alergenos sospechoso:
Pª CUTÁNEA, IgE SÉRICA ESPECÍFICA
3ª
Confirmación de que el alérgeno es el responsable de
la clínica:
Pª de PROVOCACION o EXPOSICIÓN CONTROLADA
TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS

40. COMO SE Dx ALERGIAS
2°PRUEBAS
CUTANEAS
Ig E Sérica
1° HISTORIA
CLINICA
3°PRUEBAS DE PROVOCACION
TEST DE ACTIVACION BASOFILOS
BASOFILOS
TAB

41. CITOMETRIA
DE FLUJO

42. CITOMETRIA DE FLUJO
Procedimiento que mide
características de
dispersión y fluorescencia
que poseen las células
conforme pasan por un
rayo de luz
Las células interaccionan
con un rayo de luz
causando dispersión
dependiendo del tamaño
y la complejidad

43. CITOMETRIA DE FLUJO
DIGITALIZACION
REPRESENTACION
GRAFICA
ANALISIS
LABORATORIO DE CITOMETRIA DE FLUJO
Y BIOLOGIA MOLECULAR
IHEMATEC

44. Test de Activacion de
Basofilos (TAB)
Es una herramienta útil en el
diagnóstico in vitro de las
reacciones de hipersensibilidad
inmediata a los Alergenos,
Medicamentos, si estas son
causados por mecanismos
dependientes de IgE u otros
mecanismos que conduzcan a la
liberación de histamina.

45. MARCADORES
CELULARES
CD63 CD203c
•Es una proteína granular
tetraespan de 53 Kda
•Está anclada en los
gránulos de la membrana
de los basófilos
•Por CM se detecta Anti
CD63 PE y anti IgE FITC
•Es un Ag de superficie,
expresado en basófilos
humanos recientemente
reconocida por el Acm 97A6
•Es una ectoenzima
multifuncional llamada
pirofosfatasa ectonucleotide
phophodiesterase 3 (E-
NPP3)

46. La población celular de interés se marca con anticuerpos monoclonales en presencia del
alérgeno. Previamente al análisis por citometría de flujo, los eritrocitos se someten a
lisis. A continuación se excluyen los linfocitos T (células positivas CD3) y después se
analizan los basófilos utilizando la expresión de CRTH2 y CD203c.
Los basófilos no activados y en reposo se identifican como CRTH2posCD203cdimCD3neg,
mientras que los basófilos activados in vitro se identifican como
CRTH2posCD203cbrightCD3neg.
FUNDAMENTO

48. muestra
HISTOGRAMA DE MUESTRA
SANGUINEA
MUESTRA CON METAMIZOL
1mg/2ml
CONTROL POSITIVO CONTROL NEGATIVO

49. MODELO DE
RESULTADO DE TAB

50. TEST DE ACTIVACIÓN DE BASÓFILOS
USANDO CD203C VERSUS PRUEBAS
CUTANEAS EN LA DETERMINACION DE
REACCIONES ADVERSAS A METAMIZOL: UN
ESTUDIO PILOTO
Matos Edgar1, Loyola-Sosa Steev1,2, Paredes José1,
Inocente Rosario1, Paiva Mario1, Ríos Hugo1, Álvarez
Marco1
1 Instituto de Hemaféresis y Terapia Celular (IHEMATEC)
2 Universidad Peruana Cayetano Heredia

51. Métodos y Materiales
• Participaron 40 pacientes: 75.0% (30/40) con
historia clínica positiva.
Historia Clínica de RAM AINE
AINE no MetamizolMetamizol
Pruebas Cutáneas
Test de Activación de
Basófilos CD203c
Prick Test
Intradermorreacción

52. Resultados
PRUEBAS CUTÁNEAS
Prick Test Intradermorreación
TAB
CD203c
Positivo Negativo Positivo Negativo
Positivo 0 4 (FN) 1 3 (FN)
Negativo 0 36 0 36
TOTAL 0 40 1 39
% sensibilización por RAM a Metamizol (30/40) según:
Prick Test: 0.0% (0/30)
Intradermorreación: 3.3% (1/30)
TAB CD203c: 13.3% (4/30)

53. Resultados
• PT vs. TAB-CD203c:
– Sensibilidad: 0.0%
– Especificidad: 100.00%
– Valor Predictivo Negativo: 90.0%
• IR vs. TAC-CD203c:
– Sensibilidad: 25.0%
– Especificidad: 100.00%
– Valor Predictivo Negativo: 92.3%
– Valor Predictivo Positivo: 100.0%

54. Conclusiones
• Se tiene exitosamente una primera fase de
evaluación de desempeño del TAB-CD203c.
• TAB-CD203c presenta mejor performance
para determinar alergia a fármacos; tipo
Metamizol, frente a pruebas cutáneas.
• Es necesario realizar estudios que evalúen
el costo-beneficio del uso del TAB-CD203c.

55. DISCUSION
• La BAT constituye una herramienta diagnóstica
valiosa de interés en el estudio de reacciones de
hipersensibilidad inmediata a los medicamentos.
• Reproduce in vitro mecanismos de hipersensibilidad
involucrados en reacciones alérgicas inmediatas.
• También permite el diagnóstico de reacciones
alérgicas y pseudoalérgicas, particularmente por
medicamentos que a menudo no son detectables por
técnicas serológicas como la determinación de IgE
específica.

56. DISCUSION
La reproducibilidad intra-ensayo es muy
notable en la alergia a medicamentos con
coeficiente de variación intra-ensayo de 0.89
(P <0.0001) para beta-lactámicos, 0.99 (P
<0.0001) para metamizol y 0.92 (P <0.0001)
para determinados AINES

57. DISCUSION
Además, varios medicamentos pueden ser
probados simultáneamente, con una
pequeña cantidad de sangre
La colaboración internacional será útil para
facilitar un consenso sobre el uso de BAT en
la evaluación de alergia inmediata a
medicamentos.

58. GRACIAS|