BAT se ha convertido en una Herramienta ampliamente utilizada de actividad alérgica. Comparado con la determinación de IgE en suero. BAT refleja una Respuesta Funcional

2. BASOFILOS
Middleton’s allergy : principles and practice. —8th edition -2015
Receptor de
alta afinidad
de IgE

3. BAT se ha convertido en una
Herramienta ampliamente utilizada
de actividad alérgica.
Comparado con la determinación de
IgE en suero.
BAT refleja una Respuesta Funcional
como activación basófilo
puede ser inducido por la
reticulación de FceRI, con la unión
de IgE al alérgeno
Comparando BAT con la liberación
de histamina basófila
TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
Middleton’s allergy : principles and practice. —8th edition

4. 4

5. ematben@hotmail.com

6. ematben@hotmail.com

7. ematben@hotmail.com

8. proteína quinasa
activada por
mitógenos
BIOMARCADORES DE BASOFILOS

9. CD63
•Es una proteína granular
tetraespan de 53 Kda
•Está anclada en los
gránulos de la membrana
de los basófilos
•Por CM se detecta Anti
CD63 PE y anti IgE FITC
E. Knol, Department of Immunology /Allergology. University Medical Center Utrecht, The Netherlands 2015
ematben@hotmail.com
CD203c
•Es una proteína granular
tetraespan de 53 Kda
•Está anclada en los
gránulos de la membrana
de los basófilos
•Por CM se detecta Anti
CD63 PE y anti IgE FITC
•Es un Ag de superficie,
expresado en basófilos humanos
recientemente reconocida por el
Acm 97A6
•Es una ectoenzima
multifuncional llamada
pirofosfatasa ectonucleotide
phophodiesterase 3 (E-NPP3)
BIOMARCADORES DE BASOFILOS

10. ¿QUÉ ALERGENOS SE USARAN EN EL BAT?
Reglas para la incorporación a la lista de
concentraciones óptimas de alérgenos
1. Siempre que sea posible, se deben usar preparaciones de
alérgenos estandarizadas comercialmente.
2. Las concentraciones indicadas deben haberse utilizado para
documentar alergia específica
3. Los alérgenos de drogas son típicamente activos en mg/ml y
puede diluirse de 5 a 25 veces
4. Algunas drogas son inestables o fotosensibles, por lo tanto, los
alérgenos deben prepararse frescos
Ex.moxifloxacina
5. La preparación estandarizada de alérgenos es esencial cuando se
compara datos de sensibilidad de
basófilos

11. Allergen Source concentration range Reference
Benzylpenicillin 2 +/- 0.4 mg/ml (1)
Amoxicillin 1.25 +/- 0.25 mg/ml (1)
PPL 0.25 +/- 0.05 mg/ml (1)
MDM 0.25 +/- 0.05 mg/ml (1)
Cephalosporins 1.25 +/- 0.25 mg/ml (1)
ASA 1 +/- 0.2 mg/ml (2)
Diclofenac 0.3 +/- 0.06 mg/ml (2)
Naproxen 1 +/- 0.2 mg/ml (2)
Paracetamol 1 +/- 0.2 mg/ml (2)
Metamizol 2.5 +/- 0.25 mg/ml (2)
Atracurium 0.5 +/-0.05 mg/ml (3)
Vecuronium 2+/-0.5 mg/ml (3)
Pancuronium 0.2 +/- 0.02 mg/ml (4)
Rocuronium 5 +/- 0.5 mg/ml (3)
Suxamethonium 5 +/- 0.5 mg/ml (3)
Cisatracurium 0.5 +/-0.05 mg/ml (3)
ALERGENOS MEDICAMENTOS
Hoffmann HJ, Santos AF, Patil SU. Allergy 2015; 70:1393–1405.

12. Allergen Source Concentration range Reference
Crude peanut extract 0.1 ng/ml -1 ug/ml E. Knol
Crude peanut extract 0,003 ng/ml - 1 ug/ml (6)
Bet v 1, Bet v 2, Api g 1, Dau c
1 and Mal d 1
BioMay, Austria 1 -100 ng/ml (7)
Ara h 2 0.1 ng/ml - 1 ug/ml E. Knol1
Ara h 6 0.1 ng/ml - 1 ug/ml E. Knol1
Ara h 1 1 ng/ml - 1 ug/ml E. Knol1
Ara h 3 1 ng/ml - 1 ug/ml E. Knol1
Celery market 0.01 – 1% w/vol Dongo et al, EAACI 2014
Abstract 696
Turkey market 0.01 – 1% w/vol Snefstrup et al, EAACI
2014 abstract 703
ALERGENOS PROTEICOS - ALIMENTOS
Hoffmann HJ, Santos AF, Patil SU. Allergy 2015; 70:1393–1405.

14. REACTIVIDAD DE BASÓFILOS :
La cantidad de basófilos que
responden a un estímulo dado
SENSIBILIDAD DE BASÓFILOS,
Concentración del alérgeno a
la cual la mitad de todos los
basófilos reactivos responden
¿ CÓMO INTERPRETAMOS EL BAT ?
Hoffmann Patil SU, et.al. Allergy 2015; 70:1393–1405.

15. Índice de Estimulación (SI)
% Degranulación Alérgeno
% Degranulacion C . Negativo
Mayor 2
% de Basófilos activados
después del contacto con
alergeno debe ser mayor a 5%
¿ CÓMO INTERPRETAMOS EL BAT ?

16. APLICACIONES DEL TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
URTICARIA CRONICA
• Engloba un conjunto hetéregeneo de
enfermedades cuya lesión característica es el
habón.
• Se estima que 25% de la población en general
experimentarán al menos un episodio de urticaria
en algún momento de su vida
• La relación, mujer : hombre es 2:1
• Todos los grupos de edad pueden ser afectados,
pero el mayor pico de incidencia es entre 20-40
años de edad.
• En la población pediátrica la edad de 3 a 6 años es
la de mayor incidencia

17. La identificación de Urticaria Crónica
Autoinmune responde a la presencia de
autoanticuerpos IgG1 e IgG3 contra los
receptores de alta afinidad de la cadena
α de la IgE y contra la IgE en menor
frecuencia ---- (S autólogo)
Estos se encuentran en los mastocitos
y/o basófilos cuando este evento ocurre
sucede cambios en el estado de reposo
de los basófilos, siendo las moléculas
CD63 y CD203c marcadores de su
activación. Estas moléculas pueden ser
analizadas mediante el Citómetro de
flujo.
APLICACIONES DEL TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
URTICARIA CRONICA

20. 4

21. APLICACIONES DEL TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
ALERGIA ALIMENTARIA
El Dx de AA mediada por IgE se basa en la HC y la evidencia
de IgE específica confirmando con TPO, con el consiguiente
riesgo e inconveniencia.
El BAT surge como una herramienta con una especificidad
superior y una sensibilidad comparable para diagnosticar AA
comparados con la prueba cutánea y la IgE específica.
Diversos estudios han evaluado la utilidad de BAT en alergia
alimentaria . Los alimentos estudiados incluyen leche de
vaca, huevo, trigo, maní, avellana, marisco , melocotón,
manzana, apio ,zanahoria.

22. El mayor estudio de diagnóstico
hasta la fecha con BAT fue con maní
,donde se evaluaron un total de 169
pacientes por posible alergia maní,
BAT mostró 98% de sensibilidad y
96% de especificidad
en la población primaria y 83% de
sensibilidad y 100% de especificidad
en la segunda población para
diagnosticar alergia al maní
APLICACIONES DEL TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
ALERGIA ALIMENTARIA

23. Ejemplos de estudios que evalúan la utilidad BAT para diagnosticar alergia
Alimentaria utilizando extractos de alérgenos completos o individuales

24. APLICACIONES DEL TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
ALERGIA MEDICAMENTOS
Las reacciones adversas a los
medicamentos es un importante
problema de salud publica ,causando
el 3-6% de todos los ingresos
hospitalarios y que ocurre en 10-15%
de los pacientes hospitalizados
Los AINES son los medicamentos
frecuentemente más implicados en
adultos y niños, seguido de
antibióticos β-lactámicos .
Blanca-López et al Int Arch Allergy Immunol 2016;169:223–230.

25. 2
0%
5%
10%
15%
20%
25%
30%
35%
32%
6.40%
RAM UAAI - INSN
2014-2015
RAM NO COMPROBADOS
RAM VERDADEROS
Edgar Matos CERNAAI INSN

26. 53%
43%
4%
REACCIONES ADVERSAS A FARMACOS INSN 2014-2015
Antibioticos
Aines
otros
50%
18%
14%
12%
3%
3%
REACCIONES ADVERSAS A ANTIBIOTICOS
UAAI INSN 2014-2015
Penicilina
Sulfatrimetropin
Quinolonas
Aminoglucosidos
Macrolidos
Otros
48%
25%
18%
9%
REACCIONES ADVERSAS AINES
UAA INSN 2014-2015
Metamizol
Ibuprofeno
Naproxeno Sodico
Paracetamol
Edgar Matos CERNAAI INSN

27. La prueba de activación de
basófilos parece
particularmente útil para
medicamentos donde faltan
otras pruebas in vitro, y las
pruebas cutáneas son no
disponible o no
Confiable en el resultados.
APLICACIONES DEL TEST DE ACTIVACION DE BASOFILOS
ALERGIA MEDICAMENTOS

28. Ejemplos de Estudios que evalúan la utilidad
BAT para diagnosticar Alergia Medicamentos
Hoffmann HJ, Santos AF, Patil SU. Allergy 2015; 70:1393–1405.

30. Evaluación de área bajo la curva, sensibilidad, especificidad y porcentaje de
correctamente clasificados de los diferentes test frente a la prueba de
provocación.
Curva
ROC
Error
Estándar
IC 95% Sensibilidad Especificidad
Correctamente
clasificados
Test de activación
de basofilos
0.88 0.13 0.63 - 1.00 75.0% 100.0% 95.0%
Reacción
intradérmica
0.69 0.15 0.39 - 0.98 50.0% 87.5% 80.0%
Prick test 0.59 0.13 0.34 - 0.85 25.0% 93.8% 80.0%

32. En Resumen…
• EL TAB ha mostrado tal confiabilidad clínica que se ha sugerido como
sustituto in vitro de los retos orales para estimar la severidad de la alergia a
alimentos como el maní, ofreciendo la ventaja que el diagnóstico se hace
ex vivo, lo cual evita efectos adversos en el paciente.
• También se reconoce su utilidad en el diagnóstico de hipersensibilidad a
medicamentos.
• Dentro de las desventajas actuales está la falta de estandarización de la
prueba entre laboratorios. Esto puede causar variabilidad en los resultados
y dificultar la reproducibilidad de los hallazgos.
• Otras limitaciones en la práctica clínica son la accesibilidad y su alto costo;
no obstante, se espera que en un futuro la TAB se posicione como prueba
diagnóstica de alergia en casos específicos en donde la superioridad es
evidente.
ematben@hotmail.com

33. • El anticoagulante EDTA se usa principalmente en la práctica de rutina
para el análisis de células, ya que mantiene una mejor evaluación
morfológica de células
• El receptor anti-IgE o se usa generalmente como control positivos para
verificar la reactividad de la muestra
• El límite de la detección de la degranulación basófilo depende del tipo
de alérgeno y el perfil de sensibilización del paciente.
• Es muy recomendable para probar sistemáticamente de tres a seis
dosis diferentes de alérgenos con el fin de excluir el efecto de gancho
,incluso si esto aumenta la costo de la prueba
A TOMAR EN CUENTA

34. • Estandarizar la detección de fluorescencia en tiempo en un
instrumento (por ej. FACS Canto, FC500, Navios) para una mejor
comparación positiva
• Normalización de marcadores de identificación (CCR3, CD203c,
CD123 y CRTH2) no es tan fácil de lograr debido a las diferencias en
los niveles de expresión o rendimiento de anticuerpos conjugados
Sin embargo, la configuración de los instrumentos se puede
estandarizar en este parámetro con los mismos objetivos de
fluorescencia
• Considerar el rendimiento de cada anticuerpo
A TOMAR EN CUENTA

35. • Si bien es cierto que los protocolos son compatible con las
reglas de validación de métodos Iso15189. La Iso15189
recomienda evaluaciones para células cuantitativas .
• En BAT no son posibles debido a la falta de estándar,
controles de calidad internos, calidad externa ,Programa de
evaluación .
• Siempre es importante que la interpretación lo realice un
medico Inmunólogo alergólogo con experiencia en el tema
A TOMAR EN CUENTA

36. GRACIAS
ematben@hotmail.com

37. ematben@hotmail.com