Este documento presenta información sobre pruebas de laboratorio útiles para el diagnóstico de dermatopatías, en particular las de origen alérgico. Describe diversos métodos como pruebas cutáneas (parche y prick), estudios serológicos (inmunohistoquímica, inmunoflorescencia, ELISA), y pruebas auxiliares como biopsias, cultivos y análisis moleculares que pueden ayudar a identificar la causa subyacente de una afección dermatológica. El documento enfatiza

1. Pruebas de laboratorio en
dermatopatías
DR. TOMÁS VELARDE DOMÍNGUEZ
ESCUELA MÉDICO MILITAR
Medicina Interna-Alergia e Inmunología Clínica

2. Construcción en el diagnóstico dermatológico
ABORDAJE DESDE EL PUNTO DE VISTA DE PEDIATRÍA-MEDICINA INTERNA
SÍNTOMAS
EVOLUCIÓN
TOPOGRAFÍA
MORFOLOGÍA
EXPERIENCIA
DIAGNÓSTICO DERMATOLÓGICO
CON ETIOLOGÍA ALÉRGICA
PRUEBASEN
PIEL
SEROLOGÍA

3. Primero examino la piel….
 Adulto con dolor y edema de brazo y antebrazo.
 Discreto prurito.
 Piel con edema, moderada induración, aspecto
“piel de naranja”, sensación de “piel adherida”
a estructuras subyacentes.
 Paulatina reducción en la motilidad de la
extremidad afectada.
 Eosinofilia > 2500 mmc
FASCITIS EOSINOFÍLICA
( SÍNDROME SHULMAN)

4. Morfología de las lesiones…
Lesiones primarias
Contenido
sólido
Contenido
líquido
 Vesícula
 Ampolla
 Pústula
 Quiste
 Mácula
 Pápula
 Placa
 Nódulo o goma
 Nudosidad
 Tumor
 Roncha
Lesiones elementales
secundarias
 Costra
 Úlcera
 Atrofia
 Escara
 Escama

5. Cumplir ciertas características:
A) Consultorio
.- Cómodo
.- Iluminación óptima
.- Temperatura adecuada
.- Equipamiento
A) Documentación legal
.- Aviso de privacidad personal
.- Hoja de consentimiento informado
B) Historia Clínica
.- Ficha identificación
.- Lugar de residencia
.- Edad
.- Formato expreso de historia clínica

6. EXÁMEN DEL PACIENTE DERMATOLÓGICO
TODA AFECCIÓN EN PIEL SE DENOMINA: DERMATOSIS
3 Preguntas esenciales :
 DONDE ESTA LA LESIÓN
 QUE TIPO DE LESIÓN
 COMO DESCRIBO LA LESIÓN
 Máculas
 Pápulas
 Eritema
 Simétricas
 Universales
 Pruriginosas
Exantema

7. EXÁMEN DEL PACIENTE DERMATOLÓGICO
TODA AFECCIÓN EN PIEL SE DENOMINA: DERMATOSIS
3 Preguntas esenciales :
 DONDE ESTA LA LESIÓN
 QUE TIPO DE LESIÓN
 COMO DESCRIBO LA LESIÓN
 Ronchas
 Universales
 Pruriginosas
 Evanescentes
 Fluctuantes
 Simétricas
 Duración < 24 hrs
Urticaria

8. EXÁMEN DEL PACIENTE DERMATOLÓGICO
TODA AFECCIÓN EN PIEL SE DENOMINA: DERMATOSIS
3 Preguntas esenciales :
 DONDE ESTA LA LESIÓN
 QUE TIPO DE LESIÓN
 COMO DESCRIBO LA LESIÓN
 Placas eritematosas
 Única o múltiples
 Cara, tronco, genitales
y mucosas
 Pigmentación crónica
 Exposición al agente
agresor intensifica el
eritema
ERITEMA FIJO PIGMENTADO

9. Estudios de laboratorio
 Los estudios de laboratorio y gabinete
son auxiliares del dx y deben de estar
al servicio del clínico.
 No debe esperarse que el laboratorio
resuelva un problema dx y depender
de sus resultados.
o Prick test
o Reto directo
o IgE específica (RAST, Immulite, Immunocap,etc)

10. CLAVES DE LA MEDICINA PERSONALIZADA
La persona adecuada
Determinar si una persona puede
beneficiarse realmente de una prueba
mejora el manejo de la enfermedad y
permite reducir los costos asociados al
proceso sanitario.
El examen adecuado
Prescribir un examen que no va a
aportar valor al paciente supone dilatar
los tiempos de la enfermedad e inducir
a confusión al médico, con el
consiguiente incremento de los costos
sanitarios.
√ √
La interpretación adecuada
Una correcta y completa información
permite sacar el máximo rendimiento al
examen y ayudar al médico con un
elemento diagnóstico de gran valor al
decidir cual es el tratamiento mejor de
la enfermedad.

11. ENFERMOS SANOS ENFERMOS SANOS
Prueba 1
Sensibilidad
alta
Especificidad alta
ENFERMOS
SANOS
Sensibilidad
alta
Especificidad
baja ENFERMOS
Sensibilidad
baja
Especificidad
alta
SANOS
¿Enfermo
yo?

12. Indicaciones para estudios de laboratorio en
ALERGO-DERMATOLOGÍA
 CUANDO LOS DATOS DE LA DERMATOSIS NO SON SUFICIENTES PARA EL
DIAGNÓSTICO.
 COMPROBAR AL PACIENTE EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO ESTABLECIDO.
 DOCUMENTAR EL AGENTE CAUSAL.
 EVALUAR SEGUIMIENTO Y RESPUESTA AL TRATAMIENTO.
 ESCLARECER POSIBLES ENFERMEDADES QUE SIMULAN ALERGIA.

13. MÉTODOS AUXILIARES DE DIAGNÓSTICO
CONSULTORIO LABORATORIO
ESTUDIOS DE
IMÁGEN
 Lupa
 Fotografía
 Diascopía
 Prick test
 Intradérmicas
 Pbas. Parche
 Centrífuga
 Biopsia
 Rutina y específicos
 Perfil hormonal
 Inmunológicos
 Serología
 Inmunohistoquímica
 Inmunofluocrescencia
 ELISA
 PCR
 Micromatices de ADN
 ECO
 TAC
 RMN
 Telealergología

14. PRUEBA AL PARCHE
 ALTA SOSPECHA DE
DERMATITIS DE
CONTACTO.
 INTERPRETACIÓN
 RELEVANCIA.
 EDUCACIÓN AL
PACIENTE.
Reacción
positiva
Reacción
negativa
Parche adhesivo
Celofán
Parche de papel secante
o
de lino
Prueba de parche
Individual en
localización habitual

15. Prueba al parche
(Test epicutáneos)
• Reproducir intencionalmente una respuesta de hipersensibilidad retardada tipo IV (eccema alérgico de
contacto.
• Bateria estándar de 23 o más alérgenos, en concentración no irritante, se cubre la zona y se efectúa
lectura precoz a las 48 hrs, tardía a las 96 hrs y ocasionalmente a la semana.
• El paciente debe haber suspendido antihistamínicos, esteroides locales o sistémicos al menos una
semana antes de realizar la prueba.
Lectura Grado de eritema
Dudosa (+/-)
Débil (+)
Positiva
(++)
Positiva
fuerte (+++)
Irritativa Formación de pústulas,
ampollas, costras

16. Se pueden preparar baterías
especiales, con productos de uso
habitual del paciente.
Test abierto o de provocación iterativo:
- Perfumes
- Spray
- Cremas
*Retroauricular o cara anterior del
antebrazo
** Repetir al menos dos veces al día

17. PHOTOPATCH TEST
Jindal N, Sharma NL, Mahajan VK, Shanker V, Tegta GR, Verma GK. Evaluation of photopatch test allergens for Indian patients of photodermatitis: Preliminary
results. Indian J Dermatol Venereol Leprol 2011;77:148-55

20. Prick test
modificado

21. Eliminación Duración de la supresión de la roncha y el eritema
Medicamento/dosis diaria T ½ (h) Dosis única (h) Administración regular (días)
Acrivastina 8 mg 1.4-3.1 8 NA
Azelastina 4 mg 22 12 7
Cetirizina 10 mg 7-11 ≥ 24 3
Ciproheptadina 8 mg NA NA 11
Dexclorofeniramina 4 mg NA NA 4
Difenhidramina 9.2±2.5 NA NA
Ebastina 10 mg 10.3±19.3 ≥ 24 3
Fexofenadina 60 mg 14.4 24 2*
Hidroxicina 0.7mg/Kg 20±4.1 36 NA
Loratadina 10 mg 7.8±4.2 24 7
Mizolastina 10 mg 12.9 24 NA
Levocetirizina 5 mg 7±1.5 NA 4
Desloratadina 27 NA NA
Doxepina 25 mg 17 4-6 (días) NA
NA, no disponible
*Duración de la supresión es similar con administración de 120 mg y 180 mg
Farmacocinética de la eliminación y duración medida por supresión del eritema y de la roncha de histamina mediante
prick test para varios medicamentos (19-24)

23. Alimentos:
1. Leche ( 3 gr/ ml agua estéril )
2. Huevo
3. Soya
4. Cacahuate
5. Trigo
6. Arroz
7. Maíz
8. Cebada
9. Carne de res
10. Papa
11. Carne de pollo
12. Jamón
13. Cordero
14. Pavo
15. Frijoles
16. Zanahoria
17. Duraznos
18. Manzanas
19. Mariscos
20. Control negativo
1 gr/ ml agua estéril
1 Historia detallada dieta 2 Cámara Finn y preparación de
alimentos
3 4Alimento preparado
Colocación en tórax posterior.
Retiro a las 48 hrs
Lectura a las 72 hrs
Prueba al parche para alimentos
UTILIDAD: ESOFAGITIS EOSINOFÍLICA
INCONVENIENTE: PRUEBA NO ESTANDARIZADA

25.  RASPADO METODICO DE BROCQ
(psoriasis)
 TEST TZANCK
(células multinucleadas HV
 ACAROTEST
(escabiasis)
 BUSQUEDA DE DEMODEX

26. INMUNOHISTOQUÍMICA
Antígeno tisular
Anticuerpo primario
Anticuerpo secundario
Y
YComplejo peroxidasa-antiperoxidasa
Esqueleto de Dextrano
Polímero enlazado en un solo
paso: 70 enzimas y 10
anticuerpos

27. Inmunohistoquímica
(marcador de estirpe)
o EPITELIAL
o MESENQUIMAL
o VASCULAR
o DIFERENCIACIÓN
NEUROECTODÉRMICA
o HEMATOPOYÉTICO
o LINFOIDE

28. PRUEBAS SEROLÓGICAS
INMUNOFLUORESCENCIA
ELISA
Directa
(Ag-Ab)
Indirecta
(Ab secundario detecta
complejo Ag-Ab)

29. Biopsia del paciente
Antígeno tisular normal
Inmunoglobulina
unida in situ
Anticuerpo unido a fluoresceína
dirigido contra
inmunoglobulina humana
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
Substrato : Tejido animal
Antígeno similar al humano
Suero del paciente en estudio
(contiene el anticuerpo incubado con
la sección que contiene el antígeno)
Anticuerpo unido a fluoresceína
dirigido contra
inmunoglobulina humana
INMUNOFLUORESCENCIA
INDIRECTA
Marcador: Isocianato de fluoresceína
Abs: Anti-IgA, anti-IgG, anti-IgM, anti-C3, anti-fibrinógeno
Pénfigo vulgar
 Ag: desmogleína 3
(desmosomas de
epidermis)
 Ab: IgG

30. “
”
Enzyme-Linked-ImmunoSorbent Assay
(ELISA)
VENTAJAS: BARATO, FÁCIL, MENOS SUBJETIVO, SENSIBILIDAD MUY ALTA, SIRVE DE ESCRUTINIO.
DESVENTAJAS: ES MENOS ESPECÍFICO Y DEBE SER INTERPRETADO CON CUIDADO.

31. BIOLOGÍA MOLECULAR
Pronóstico-Orientación terapéutica
BIOPSIA
OTROS PROCEDIMIENTOS
FRESCO GLUTARALDEHÍDO
CRIOPRESERVAR LA
MUESTRA
CULTIVO
TISULAR
DNA
RNA
PROTEÍNAS
ANATOMÍA PATOLÓGICA
FORMOL
H-E TINCIONES
HIBRIDACIÓN IN
SITU
Proto-oncogenes genes
supresores de tumor
¿Mutación? ¿Genes?

32. Micromatrices de DNA
(El perfil de expresión de genes)
Cáncer de piel
 Melanomas
 Basiliomas
 Linfomas de células T
Procesos inflamatorios
o Dermatitis atópica
o Psoriasis
o Alopecia areata
o Esclerodermia
Lesiones melanocíticas dudosas
 Riesgo elevado para
melanoma

33. Diagnóstico por imágenes
 Ecografía doppler color
 Resonancia magnética nuclear
 Tomografía por emisión de positrones
 Diagnóstico fotodinámico
 Microscopia con escaneo laser confocal
 Tomografía de coherencia óptica

34.  Aplicación y oclusión por 3 horas de ácido
aminolevulínico al 20%, metilaminolevulinato
o metil aminooxopenoato
 Fuente de luz
 Delinear posible neoplasia, psoriasis, virus,
acné, etc.
 Excelente tolerancia
 Mínimos efectos adversos
DIAGNÓSTICO FOTODINÁMICO

35. Microscopía con escaneo láser confocal
 Método no invasivo
 Resolución arquitectónica y dinámica de la piel
 Seguimiento evolutivo y de respuesta terapéutica
 Auxiliar de la histopatología

36. TOMOGRAFIA COHERENCIA OPTICA
 Método no invasivo
 Evalúa cambios morfológicos y estructurales
 Resolución limitada
 Técnica similar a ultrasonido, pero con aplicación laser

37. La marcha alérgica…..
IgE IgE
IgE IgE IgE
Eccema
Dermatitis atópica
Trastornos
gastrointestinales Sibilancias
Otitis media
Poliposis nasal
Rinitis
Respirador oral
Asma
Dermatitis atópica persistente
Problemas respiratorios
mixtos

38. Dr. Blakely
1893
Prueba cutánea
Von Pirquet
1906
Toxina Caballo
Sir Henry Dale
Histamina 1910
Dr Leonard Noon
1910
Vacunas hiposensibilizantes
1966
IgE
Ishizaka / Johansson
1908
Mantoux
1921 primer
extracto estandarizado
1924
Lewis y Grant
pruebas por punción
1970
Pepys modifica la prueba cutánea
1967
Pharmacia
1970
Phadebast
amylase
test
1971
Allergon
B
1972
Phadebast
IgE test
1974
Phadebast
Rast
(IgEs)
1976
Pharmacia
Diagnostic
IgE PRIST
1981
Phadezym
RAST
1986
Wallac Oy
Phadiatop
1989
Immunocap
1990
Procordia /
Kaby
1995
Fusión con
Upjohn
1995
Immunocap
100
Automático
Pharmacia &
Upjohn
Diagnostic
1990
Procordia /
Kaby
1997
Varelisa Elias
Autoinmunidad
Immunocap
2000
Micromatices
2009
ISAC
2010
Phadia
2500
5000
2011

39. Pruebas in vitro
IgE específica
TEST LIBERACIÒN HISTAMINA
DEGRANULACIÒN ÒPTICA BASÒFILOS
MICROARRAY
ISOTÒPICAS
ELISA
FLUORESCEINA
QUIMIOLUMINISCENCIA

40. Inmunoensayo marcado
-Antígeno
- Anticuerpo
- Analito
Depende del tipo de marca es la denominación de origen:
 FLUROINMUNOENSAYO
 RADIOINMUNOENSAYO
 ENZIMOINMUNOENSAYO
 QUIMIOINMUNOENSAYO
 IMMUNOCAP
 IMMULITE(ENZIMOQUIMIOINMUNOENSAYO)

41. Base del IMMUNOCAP
 Unidades de masa arbitraria
 Unidades internacionales de kilo de
anticuerpos específicos por unidad
de volúmen de la muestra (kUa/L)
 1 UI = 2.42 mg s-IgE
 Sistema de clases I-VI es obsoleto.
 No son compatibles las técnicas
entre si.

42. IgE
 Identificar, aislar y purificar múltiples
alérgenos.
 Técnicas de DNA recombinante
(Nanotecnología)
DIAGNÓSTICO MOLECULAR O DIAGNÓSTICO POR COMPONENTES
(component-resolved-diagnosis CRD)
MICROMATRICES (microarrays)

43.  Interesantes expectativas.
 Miniaturización del diagnóstico en Alergia.
 Sueño de conocer la especificidad molecular IgE en
cada paciente.
 Diagnóstico refinado.
 Múltiples perfiles de sensibilización.
 Predecir reacciones severas y la evolución de las
mismas.
 Inmunoterapia más precisa

44. Sitio de corte enzimático
Epítope 1
Epítope 2
 Secuenciales
 Conformacionales
La reactividad cruzada requiere al
menos un 70% de estructura
conformacional.

45. Epítope 1 Epítope 2
La reactividad cruzada
requiere al menos un 70%
de estructura
conformacional.

46. Gal d 4
(lizosima
 Gal d 1 Alta estabilidad térmica , difícil
desnaturalizar, 11% proteína de la clara
 Gal d 2 54% proteína clara. Resistente a
la digestión por la pepsina a pH 1.2,
lábil al calor y se desnaturaliza a 90
grados
 Gal d 3 Ovotransferrina 12% clara, lábil
al calor a 95 grados por 15 min.
 Gal d 4 3.4% clara termolábil a 80
grados, resistente a pepsinas
 Gal d 5 14% proteínas de la yema ,
relacionado s. ave-huevo, cruza con
OVOTRANSFERRINA, termolábil a 90
grados 30 min.
 Gal d 6 resiste calor, lábil a pepsina
Gal d 2
Ovoalbúmina
Gal d 5
alfalivetina
Gal d 6
(Vitelogenina)

47. Alerge
no
Literatura
experimental
Secuencia Pruebas
Immunoblott
Prueba de
función
(degranulación
basófilos)
Prueba
cutánea
Prueba
reto
conjuntival
Prueb
a reto
nasal
Prueba
reto
bronquial
Reto
oral
Datos
epidemiología
Monitoreo tiempo real
sensibilización IgE
Gal
d 1
Gal
d 2
Gal
d 3
Gal
d 4
Gal
d 5
Gal
d 6

48. Alergeno Literatura
experimental
Secuencia Pruebas
Immunoblott
Prueba de
función
(degranulació
n basófilos)
Prueba
cutánea
Prueba
reto
conjuntiv
al
Prueba
reto
nasal
Prueba
reto
bronquial
Reto oral Datos
epidemiologí
a
Monitoreo tiempo real
sensibilización IgE
Der p
1
Der p
2
Der p
3
Der p
4
Der p
5
Der p
6

50. Alergeno Clase Fuera de rango Unidades de referencia
Clara huevo 2 1.03 kU/L
Leche 1 0.63 kU/L
Trigo 1 0.45 kU/L
Maíz 2 0.95 kU/L
Cacahuate 1 0.51 kU/L
Camarón 2 3.10 kU/L
Tomate 1 0.39 kU/L
Papa 1 0.44 kU/L
Nuez 1 0.48 kU/L
Zanahoria 1 0.63 kU/L
Apio 1 0.35 kU/L
Fresa 1 0.43 kU/L
Manzana 1 0.60 kU/L
Plátano 1 0.72 kU/L
Arroz 1 0.68 kU/L
Naranja 1 0.57 kU/L
Immunocap ® específico
IgE total: 5929 UI/ML ( < 100 UI/ml)
Alergeno Clase Fuera de
rango
Unidades de referencia
D.Pteronyssinyus 5 75.4 kU/L
D. Farinae 4 25.5 kU/L
Caspa de perro 3 4.12 kU/L
Pasto Bermuda 2 0.75 kU/L
Pasto timoteo 1 0.49 kU/L
Arce 2 1 kU/L
Aliso 1 0.68 kU/L
Cedro 2 1.74 kU/L
Roble blanco 2 0.78 kU/L
Olmo 2 1.06 kU/L
Olivo 1 0.53 kU/L
Lanaria 2 1.02 kU/L
Lengua vaca 1 0.37 kU/L

51. Enfermedad muy severa
Enfermedad poco severa
IgG 4 Caseína
Bos d 8 (caseína)
Extracto completo de Leche
Ara h 2 (cacahuate) *Mayor reacción e
incremento en reactividad cruzada clínicamente
relevante
Ara h1 Ara h 3 (cacahuate) *Incrementa el riesgo de ANAFILAXIA
Gal d 1 Incrementa riesgo de reacciones
Gal d 2 Gal d 3 menor riesgo al consumo
huevo cocido

52. Alergeno Componentes Comentarios
Cacahuate Ara h1 Ara h 2 Ara h 3 Responsable de la sensibilización inicial
Ara h 8
Ara h 2
Marcador de tolerancia ( aislado) Reducción en los
requerimientos del reto oral
Huevo Gal d 1 Resistencia al calor
Gal d 2 Ovoalbúmina
Modelo matemático: IgE s vs Gal d 1 + Gal d 2 = Alergia a huevo
Soya Gly m 4 Predictor de alergia
Carne res Tri a 19 Alta sensibilidad y especificidad
Veneno
abeja
Api m 1 Fosfolipasa A 2
Veneno
avispa
Ves v 5 Ves v 1 Combinación de ambos eleva la sensibilidad

53. LA ALERGOLOGÍA ES UNA CIENCIA QUE SE
PRACTICA COMO SI FUERA RELIGIÓN.
COMO CIENCIA PUEDES TENER TONELADAS DE
EVIDENCIA, SIN EMBARGO DEBES DUDAR DE
LO QUE VEZ; Y EN MUCHOS CASOS NO TIENES
EVIDENCIA.
 AÚN ASI CREES LO QUE VEZ.