1. UNIVERSIDAD CATÓLICA
SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO
Facultad de Medicina
Escuela de Medicina
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Práctica N°03
Identificación de Enterobacterias
Jesús Alonso Custodio Marroquín
Código: 062ac03464
Ciclo 2009 - IV
2. Aislamiento de Bacterias Gram –
Agar Mc Conkey
La bacteria E. coli forma colonias rojas por un
viraje del indicador de pH (rojo neutro), dando
como resultado lactosa +.
La bacteria Salmonella typhi forma colonias
incoloras y no vira el indicador de pH, por lo
que es lactosa - .
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de
agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color
del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. 1
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0 Suspender 50 g del polvo por litro de agua
Mezcla de sales biliares 1.5 destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2
Cloruro de sodio 5.0 minutos hasta disolver. Esterilizar en
Agar 13.5 autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 ± 0.2
3. Incubación
Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica
Resultados
Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas
Características del medio
Medio preparado: rojo púrpura .1
4. Salmonella Shigella Agar.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp.
a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias
Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del
tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio
haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de
cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación
de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo.2
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0 Suspender 60 g del polvo por litro de agua
Mezcla de sales biliares 8.5 destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
Citrato de sodio 8.5 homogeneizar. Calentar a ebullición durante 2
o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN
Tiosulfato de sodio 8.5 AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y distribuir
Citrato férrico 1.0 unos 20 ml por placa. Secar la superficie del
Agar 13.5 medio unos minutos en la estufa.
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 ± 0.2
Resultados
Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
5. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
Características del medio
Medio preparado: rojo naranja.
Identificación de bacterias Gram negativas
E.coli
E. coli es una de las especies bacterianas más
minuciosamente estudiadas, y no solamente
por sus capacidades patogénicas, sino
también como sustrato y modelo de
investigaciones metabólicas, genéticas,
poblacionales y de diversa índole
Ella está integrada por bacilos Gram negativos
no esporulados, móviles con flagelos
peritricos o inmóviles, aerobios-anaerobios
facultativos, capaces de crecer en agar
MacConkey y en medios simples con o sin
agregado de NaCl, fermentadores y oxidativos
en medios con glucosa u otros carbohidratos,
catalasa positivos, oxidasa negativos,
reductores de nitratos a nitritos, y poseedores
de una proporción G+C de 39 a 59% en su DNA. Se trata de bacterias de rápido crecimiento y amplia
distribución en el suelo, el agua, vegetales y gran variedad de animales.
E. coli es la especie tipo del género Escherichia. Incluye gérmenes generalmente móviles, que producen
ácido y gas a partir de la glucosa, la arabinosa, y habitualmente de la lactosa y otros azúcares. Producen
reacción positiva de rojo de metilo, y negativa de Vogues-Proskauer. Son inhibidos por KCN e
incapaces de crecer en medio con citrato como única fuente de carbono y energía, pero sí en caldo
acetato. Son H2S, ureasa y fenilalanina negativos, pero en general son indol positivos y decarboxilan la
lisina.
Se clasifican en más de 170 serogrupos O según las características antigénicas de su LPS, y en serotipos
por la combinación de antígenos O y H flagelares. Otros antígenos presentes en distintas cepas
(capsulares, fimbriales y otros) han sido empleados para su clasificación o identificación.
E. coli coloniza el tracto gastrointestinal a las pocas horas de vida del niño, y establece con el huésped
una relación estable de mutuo beneficio).Como integrante de la flora normal del hombre y de muchos
animales, se lo considera un germen indicador de contaminación fecal cuando está presente en el
ambiente, agua y alimentos, junto con otros similares agrupados bajo la denominación de "bacterias
coliformes". Estas son enterobacterias que pertenecen al género Escherichia y a otros relacionados
como Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter o Serratia, y que tienen en común la capacidad de fermentar
la lactosa en un lapso no mayor de 48 horas, con producción de ácido y gas.
Son gérmenes de gran ubicuidad y capacidad de proliferación, y a la vez de fácil cultivo e identificación,
y por lo tanto muy útiles como indicadores de contaminación, pero no son enteropatógenos como
grupo (como tampoco lo es E.coli), y por lo tanto su presencia en alimentos, ambiente o pacientes no
certifica la etiología de una infección intestinal o un brote de ETA.
E. coli puede ser causa de enfermedad endógena en pacientes debilitados o en situación de alteración
de la pared intestinal (peritonitis, sepsis, etc.), pero las infecciones entéricas provocadas por este
6. germen no son causadas por las cepas que habitan normalmente el intestino, sino por líneas
especialmente patógenas en esta localización, que se transmiten por vía fecaloral de persona a persona
o a través del agua y alimentos. 3
Salmonella typhi
Salmonella es un género de bacteria que
pertenece a la familia Enterobacteriaceae,
formado por bacilos gram negativos, anaerobios
facultativos, con flagelos perítricos y que no
desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias
móviles que producen sulfuro de hidrógeno
(H2S). Fermentan glucosa por poseer una
enzima especializada, pero no lactosa, y no
producen ureasa.
Es un agente zoonótico de distribución
universal. Se transmite por contacto directo o
contaminación cruzada durante la
manipulación, en el procesado de alimentos o en
el hogar, también por vía sexual.
Para la bacteriología clínica, Salmonella es un bacilo patógeno primario (como Shigella, Yersinia y
ciertas cepas de E. coli), anaerobio facultativo, algunos móviles y no fermentan la lactosa. S. typhi es la
única serovariedad que no produce gas en la fermentación de los azúcares.
Clásicamente se distinguían tres únicas especies patógenas primarias: S. typhy, S. cholerae-suis y S.
enteritidis. A su vez, según la serotipificación de Kauffman y White, eran clasificadas en más de 2000
serotipos en base a los antígenos flagelares H (proteicos) y antígenos somáticos O (fracción
polisacárida del lipopolisacárido bacilar). S. typhi posee además un antígeno de virulencia (Vi).
Salmonella crece con facilidad en agar sangre formando colonias de 2 a 3 milímetros. En laboratorios de
microbiología clínica se aísla con medios selectivos, Selenito, Hektoen, SS o XLD para inhibir el
crecimiento de otras bacterias patógenas y de la flora intestinal saprófita. Tienen los siguientes
antígenos:t
• Somático O, del lipopolisacárido en la pared celular, termoestable y es la base de la
clasificación en subgrupos.
• Flagelar H, de la proteína flagelina, termolábil, es la base de la clasificación de especies.
• Envoltura Vi, termolábil, responsable de la virulencia de varias especies patogénicas.
Patogenia
Produce salmonelosis con un período de incubación de entre 5 horas y 5 días, diarrea y dolor
abdominal, a través de las heces del enfermo se elimina un gran número de esta bacteria y fiebre
entérica con un periodo de incubación de 7 a 28 días, causante de dolor de cabeza, fiebre, dolor
abdominal y diarrea, erupción máculo-papulosa en pecho y espalda, los enfermos presentan un período
de convalecencia entre 1 y 8 semanas, las personas curadas eliminan Salmonella. También puede
ocasionar fiebres entéricas o infección intestinal por intoxicación con algunos alimentos.
7. Virulencia
Salmonella al igual que otras bacterias Gram negativas usan un sistema secretor especializado
(denominado tipo III) para inyectar dentro de células eucariotas ciertas proteínas efectoras que
manipulan las vías de señalización celular y de la bacteria. Se ha observado la entrega de la proteína
SipA a células que debilitan la maquinaria intracelular del huésped y promueven la virulencia en
mamíferos en aproximadamente 10 minutos, dejando la bacteria virtualmente desprovista de SipA,
efectivamente estableciendo un nicho para la multiplicación intracelular de la bacteria.4
Resultados de Pruebas
E. coli Salmonella typhi
INDOL + -
A/A K/A
TSI H2S- H2S-
CO2 + CO2+
CITRATO - -
LIA + +
8. Prueba TSI
Medio diferencial complejo (de color rojo) compuesto por 3 azúcares: 10% lactosa, 10% sucrosa y 1%
dextrosa y un ligador que es en este caso el hierro. La siembra se realiza tanto en la superficie del agar
(aerobiosis) como en la profundidad de éste (anaerobiosis).
Medio K (alcalino) de color rojo. Medio A (ácido) de color amarillo.
K/A
Si la bacteria metaboliza sólo la glucosa: en la superficie la utilizará por vía respiratoria, y donde la
tensión de oxígeno disminuya lo suficiente, empleará una pequeña proporción por vía fermentativa.
Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la
decarboxilación oxidativa de las proteínas.
Como resultado, el medio mantendrá su color rojo en la superficie, al no haber cambiado de pH. Por el
contrario, las bacterias crecidas en la profundidad emplearán desde el primer momento la glucosa por
vía fermentativa, generando ácidos que no serán neutralizados, provocándose un descenso del pH y el
color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo.
A/A
Si la bacteria, además fermenta lactosa: los ácidos producidos modificarán también el pH de la
superficie del medio. Las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en
esta fermentación, ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. El
color del medio en la superficie cambiará a amarillo.
K/K
Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora), el medio permanece de color rojo. Los azúcares
son respirados, degradándose completamente hasta CO2, que se elimina y no modifica el pH.
A/A(g)
Aparición de burbujas, rotura o elevación del agar del fondo del tubo.
K/A(H2S)
Aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Algunas bacterias respiradoras
anoxobiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódio como aceptor final de electrones en la
9. cadena transportadora. Este compuesto se reduce a ácido sulhídrico que reacciona con el hierro Fe2+
presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro.5
Resultados:
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la
glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/
o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción deácido
sulfhídrico
E. coli ATCC 25922 A/A + -
K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -
P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +
S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +
S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +
S. flexneri ATCC 12022 K/A - -
P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -
A: ácido
K: alcalino
Características del medio
Medio preparado: rojo.6
10. INDOL
La prueba del indol es una prueba bioquímica realizada en especies
bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del
aminoácido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie de
enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con
frecuencia triptofanasa.
Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la
molécula intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la
reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de
la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol,
ácido pirúvico, amoníaco (NH3) y energía. Como coenzima de la reacción se
requiere al fosfato de piridoxal
Tal como ocurre con muchas pruebas bioquímicas, los resultados de una prueba de indol se indican con
el cambio de color que sigue a la reacción. El cultivo bacteriano puro debe ser sembrado en un caldo
con triptofano o peptona estériles o ambos por 24 a 48 horas antes de realizar la prueba. Luego de la
incubación, se añaden cinco gotas de reactivo Kovac (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y
ácido clorhídrico concentrado al caldo del cultivo.
Una variante de la prueba se realiza usando el reactivo de Ehrlich's (usando alcohol etílico en lugar del
alcohol isoamilo, desarrollado por Paul Ehrlich), en especial si se tiene un organismo que no sea
fermentador y en organismo anaeróbico.
Los resultados positivos se muestran por la presencia de un color rojo o rojo-violeta en la superficie de
la capa de alcohol en el cultivo. Un resultado negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede
ocurrir cuando se muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, también
conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.7
Bacteria indol positiva • Haemophilus influenzae,
• La mayoría de los Proteus spp. (más no
Las bacterias que resultan indol positivas al el P. mirabilis),
romper el indol del triptófano, incluyen: • Plesiomonas shigelloides,
• Pasturella multocida, Pasturella
• Aeromonas hydrophilia, Aeromonas pneumotropica, y
punctata, • Vibrio spp.
• Bacillus alvei,
• La mayoría de los Citrobacter spp.,
• Edwardsiella spp.,
• Escherichia coli, Bacteria indol negativa
• Flavobacterium spp.,
11. Las bacterias que generan un indol negativo en • La mayoría de los Klebsiella spp.,
esta prueba, incluyen: • Neisseria spp.,
• Pasturella haemolytica, Pasturella
• Actinobacillus spp., ureae,
• Aeromonas salmonicida, • Proteus mirabilis,
• Alcaligenes spp., • Pseudomonas spp.,
• La mayoría de los Bacillus spp., • Salmonella spp.,
• Bordtella spp., • Serratia spp.,
• Enterobacter spp., • Yersinia spp.
• La mayoría de los Haemophilus spp.,
Citrato
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como
única fuente de carbono y energía.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es
la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales
de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene
el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio
alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato
como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la
consiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del
ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato.
Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto
es indicativo de la producción de citrato permeasa.8
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay
cambio de color.
Microorganismo Citrato permeasa Color del medio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Positivo Azul
S. typhimurium ATCC 14028 Positivo Azul
E. coli ATCC 25922 Negativo Verde
S. flexneri ATCC 12022 Negativo Verde
Características del medio
Medio preparado: verde.
12. LIA (Lisina Hierro Agar.)
Medio de cultivo utilizado para
diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación /
desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo
bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para
detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de
bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color
violeta a pH igual o mayor a 6.8
Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce
el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilación de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo
que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa,
producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubación se
observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la
formación de sulfuro de hierro.
Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto
produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma
un color rojizo en la superficie del medio.9
Resultados
1- Decarboxilación de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminación de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de
Morganella spp.
13. 3-Producción de ácido sulfhídrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo)
Color en el pico de flauta Color en la base del Ennegrecimiento del
Microorganismos
tubo medio
Proteus mirabilis ATCC 43071 Rojo Amarillo Negativo
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Púrpura Púrpura Positivo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Púrpura Púrpura Positivo
Providencia spp. Rojo Amarillo Negativo
Citrobacter freundii Púrpura Amarillo Positivo
Morganella spp.* Rojo Amarillo Negativo
Edwarsiella spp. Púrpura Púrpura Positivo
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Púrpura Púrpura Negativo
Escherichia coli ATCC 25922 Púrpura Púrpura Negativo
Características del medio
Medio preparado: color violeta.
14. V. CUESTIONARIO
1. ¿Existen otras coloraciones que permitan la diferenciación de estructuras
bacterianas?
Examen directo:
• Examen en freso.
• KOH al 10%
• Tinta china
• Yodo de lugol
Tinciones diferenciales
• Tinción Gram
• Tinción de hematoxilina férrica
• Tinción de metenamina argéntica
• Tinción de azul O de toluidina
• Tinción tricrómica
• Tinción de Wright-Giemsa
Tinciones acidorresistentes
• Tinción de Zhiehl-Neelsen
• Tinción de Kinyoun
• Tinción auramina-rodamina
• Tinción acidorresistente modificada.
Tinciones fluorescentes
• Tinción naranja de acridina
• Tinción auramina-rodamina
• Tinción blanca de calcoflúor.
• Tinción directa con anticuerpos fluorescentes.10
16. 3. ¿Por qué es importante utilizar Agar Mc Conkey en el aislamiento de enterobacterias
y Cuál es su indicador?
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de
agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color
del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. 1
17. VI. CONCLUSIONES
Los resultados de las pruebas realizadas fueron:
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Britanialab.com. Mc Conkey Agar [Sede Web]. Argentina: Britanialab.com; 2009-[acceso el 04
de septiembre de 2009] Disponible en:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htm
2. Britanialab.com. Salmonella Shigella Agar [Sede Web]. Argentina: Britanialab.com; 2009-
[acceso el 04 de septiembre de 2009] Disponible en:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/salmoshigagar.htm
3. Biblioteca Virtual en Salud. E.coli [Sede Web]. Uruguay: bvsops.org; 2009 –[ acceso el 04 de
septiembre de 2009]. Disponible en: http://www.bvsops.org.uy/php/index.php?lang=es
4. Wikipedia.org. Salmonella [Sede Web]. España: Wikipedia.org; 2009- [actualizado el 28 de
agosto de 2009; acceso el 04 de septiembre de 2009]. Disponible en:
http://es.wikipedia.org/wiki/Salmonella
5. Henríquez K, Donado C. Atlas Virtual de Medicina: Bacterilogía [Sede Web]. Panamá:
Universidad de Panamá; 2009-[actualizado en febrero de 2009; acceso el 04 de septiembre de
2009]. Disponible en:
18. http://www.telmeds.org/AVIM/Abacterio/bacilos%20gram
%20negativos/bacilos_gram_negativos_fermentad.htm
6. Britanialab.com. TSI [Sede Web]. Argentina: Britanialab.com; 2009-[acceso el 04 de
septiembre de 2009] Disponible en:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tsiagar.htm
7. Henríquez K, Donado C. Atlas Virtual de Medicina: Bacterilogía: INDOL [Sede Web]. Panamá:
Universidad de Panamá; 2009-[actualizado en febrero de 2009; acceso el 04 de septiembre de
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8. Britanialab.com. Citrato [Sede Web]. Argentina: Britanialab.com; 2009-[acceso el 04 de
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9. Britanialab.com. LIA [Sede Web]. Argentina: Britanialab.com; 2009-[acceso el 04 de
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10. Murray P. Microbiología Clínica. 5ed. España: Elsevier; 2006.