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Género    Corynebacterium,
       Rhodococcus y Listeria
Instructoras:
 Dra. Mirian Arias
 Dra. María Mercedes Rueda

Laboratorio 435
Mesa # 3




Autor: Jairo Henrriquez
Objetivos

   El estudiante usando los medios de cultivo adecuados aislara
    las cepas de Corynebacterium, Rhodococcus y Listeria que
    se le presenten.
   Realizara a cada cepa las pruebas bioquímicas requeridas
    para la identificación.
   Estudiara la morfología colonial y celular de cada cepa.
   Utilizando las tablas de diferenciación, estudiara las cepas
    en estudio.
Introduccion
   Las especies del genero Corynebacterium son bacilos Gram
positivos o variables al Gram, pleomorficos que se pueden
agrupar en empalizada o letras chinas, con frecuencia tienen
forma de mazo y pueden poseer gránulos metacromaticos de
polifosfatos, ya sea en el extremo del bacilo o en toda la célula,
dando apariencia de rosario.
     La especie mas importante por su patogenicidad es C.
diphtheriae, aunque hay muchas otras especies consideradas
oportunistas.
 Las especies del genero Rhodococcus son bacterias filamentosas
que se fragmentan en cocos y pequeños bacilos, no esporulados,
inmóviles, aerobios, pueden tener gránulos de polifosfatos, su
pared celular contienen acido diaminopimelico, micolico y
tuberculoestatico. Estas características les hacen ser similares
a otras bacterias como Corynebacterium y Mycobacterium.
Listeria

El género Listeria, representa
un grupo de estrechamente
relacionados, bacilos Gram-
positivos, anaerobios
facultativos, no formadoras
de esporas, en forma de
bastoncillos 0,5 m de ancho y
1-1.5 mu m de longitud.
Taxonómico, se divide en seis
especies de los cuales sólo L.
monocytogenes y L. ivanovii
son patógenas
Pruebas bioquimicas

•   Especies de Listeria son
    bacterias estrechamente
    relacionadas que
    comparten muchas
    características
    morfológicas y bioquímicas.
    - Aparte de ser catalasa
       positiva.
    - Indol y oxidasa
      negativos
    -Hidrólisis esculina
      positiva
    - No hidrolizan la urea.
Materiales
1.    Cultivo de 24 – 48 horas en gelosa soya tripticasa inclinada de las diferentes especies de

      Corynebacterium y Rhodococcus existentes en el cepario del Departamento de Microbiología.

2.    Medios de cultivo en placa:

     - Gelosa chocolate telurito de potasio.

     - Gelosa sangre

3.   Medios de cultivo en tubo:

     - Caldo simple 2ml

     - Caldo nitrato con campana de Durham

     - Urea de Christensen

     - Gelatina nutritiva

     - SIM
- Agar esculina
       - Caldo con indicador y campana de los siguientes
         carbohidratos:
         - Glucosa
         - Maltosa
         - Sacarosa
         - Manitol
         - Xilosa
4.   Frascos goteros con los siguientes reactivos:
         - Peroxido de hidrogeno al 3%
         - Acido sulfanilico
         - Alfa niftalamina
5.   Polvo de Zinc
6.   Aplicadores de madera
Método
A. Aislamiento y realización de pruebas
requeridas para la identificación.

1.   Sembrar cada cepa por    2.    Sembrar en la forma
     frobisher:                     habitual en cada uno de los
     - Gelosa chocolate             siguientes medios de
       telurito de potasio.         cultivo:
                                    - Caldo simple
     - Gelosa sangre.              - Caldo nitrato
                                   - Urea de Christensen
                                   - Gelatina
                                   - SIM
                                   - Agar esculina
                                   - Caldo carbohidratado
                                   - Glucosa
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                                   - Sacarosa
                                   - Manitol
                                   - Xilosa
3.   Incubar a 37 °C / 24 – 48 horas.




Medios de cultivo
Métodos de siembra
B. Leer e interpretar los resultados
anteriores.

   Describir morfología colonial de cada cultivo en los
    medios A. 1
   Describir morfología celular de una colonia aislada
    delos medio A. 1 (frotis por Gram) si en este se
    sospecha la presencia de gránulos metacromaticos, se
    puede hacer un frotis y colorearlo con azul de metileno
    de Loeffler.
   Leer las pruebas bioquímicas del numeral A. 2 en la
    forma usual.
   Con los resultados obtenidos, utilizar el cuadro de
    diferenciación para identificar las cepas en estudio.
Identificación de especies del
    genero Corynebacterium y otros

                      Características            Cepas en estudio
                                        Cepa 1       Cepa 2         Cepa 3
Morfología celular
Prueba de catalasa
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  • 1. Género Corynebacterium, Rhodococcus y Listeria Instructoras: Dra. Mirian Arias Dra. María Mercedes Rueda Laboratorio 435 Mesa # 3 Autor: Jairo Henrriquez
  • 2. Objetivos  El estudiante usando los medios de cultivo adecuados aislara las cepas de Corynebacterium, Rhodococcus y Listeria que se le presenten.  Realizara a cada cepa las pruebas bioquímicas requeridas para la identificación.  Estudiara la morfología colonial y celular de cada cepa.  Utilizando las tablas de diferenciación, estudiara las cepas en estudio.
  • 3. Introduccion Las especies del genero Corynebacterium son bacilos Gram positivos o variables al Gram, pleomorficos que se pueden agrupar en empalizada o letras chinas, con frecuencia tienen forma de mazo y pueden poseer gránulos metacromaticos de polifosfatos, ya sea en el extremo del bacilo o en toda la célula, dando apariencia de rosario. La especie mas importante por su patogenicidad es C. diphtheriae, aunque hay muchas otras especies consideradas oportunistas. Las especies del genero Rhodococcus son bacterias filamentosas que se fragmentan en cocos y pequeños bacilos, no esporulados, inmóviles, aerobios, pueden tener gránulos de polifosfatos, su pared celular contienen acido diaminopimelico, micolico y tuberculoestatico. Estas características les hacen ser similares a otras bacterias como Corynebacterium y Mycobacterium.
  • 4. Listeria El género Listeria, representa un grupo de estrechamente relacionados, bacilos Gram- positivos, anaerobios facultativos, no formadoras de esporas, en forma de bastoncillos 0,5 m de ancho y 1-1.5 mu m de longitud. Taxonómico, se divide en seis especies de los cuales sólo L. monocytogenes y L. ivanovii son patógenas
  • 5. Pruebas bioquimicas • Especies de Listeria son bacterias estrechamente relacionadas que comparten muchas características morfológicas y bioquímicas. - Aparte de ser catalasa positiva. - Indol y oxidasa negativos -Hidrólisis esculina positiva - No hidrolizan la urea.
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  • 7. Materiales 1. Cultivo de 24 – 48 horas en gelosa soya tripticasa inclinada de las diferentes especies de Corynebacterium y Rhodococcus existentes en el cepario del Departamento de Microbiología. 2. Medios de cultivo en placa: - Gelosa chocolate telurito de potasio. - Gelosa sangre 3. Medios de cultivo en tubo: - Caldo simple 2ml - Caldo nitrato con campana de Durham - Urea de Christensen - Gelatina nutritiva - SIM
  • 8. - Agar esculina - Caldo con indicador y campana de los siguientes carbohidratos: - Glucosa - Maltosa - Sacarosa - Manitol - Xilosa 4. Frascos goteros con los siguientes reactivos: - Peroxido de hidrogeno al 3% - Acido sulfanilico - Alfa niftalamina 5. Polvo de Zinc 6. Aplicadores de madera
  • 10. A. Aislamiento y realización de pruebas requeridas para la identificación. 1. Sembrar cada cepa por 2. Sembrar en la forma frobisher: habitual en cada uno de los - Gelosa chocolate siguientes medios de telurito de potasio. cultivo: - Caldo simple - Gelosa sangre. - Caldo nitrato - Urea de Christensen - Gelatina - SIM - Agar esculina - Caldo carbohidratado - Glucosa - Maltosa - Sacarosa - Manitol - Xilosa
  • 11. 3. Incubar a 37 °C / 24 – 48 horas. Medios de cultivo
  • 13. B. Leer e interpretar los resultados anteriores.  Describir morfología colonial de cada cultivo en los medios A. 1  Describir morfología celular de una colonia aislada delos medio A. 1 (frotis por Gram) si en este se sospecha la presencia de gránulos metacromaticos, se puede hacer un frotis y colorearlo con azul de metileno de Loeffler.  Leer las pruebas bioquímicas del numeral A. 2 en la forma usual.  Con los resultados obtenidos, utilizar el cuadro de diferenciación para identificar las cepas en estudio.
  • 14. Identificación de especies del genero Corynebacterium y otros Características Cepas en estudio   Cepa 1 Cepa 2 Cepa 3 Morfología celular Prueba de catalasa Β- hemolisis Reducción de nitratatos Ureasa Hidrolisis de gelatina Movilidad Hidrolisis esculina Glucosa Maltosa Fermentación de sacarosa Manitol Xilosa