1. Género Corynebacterium,
Rhodococcus y Listeria
Instructoras:
Dra. Mirian Arias
Dra. María Mercedes Rueda
Laboratorio 435
Mesa # 3
Autor: Jairo Henrriquez
2. Objetivos
El estudiante usando los medios de cultivo adecuados aislara
las cepas de Corynebacterium, Rhodococcus y Listeria que
se le presenten.
Realizara a cada cepa las pruebas bioquímicas requeridas
para la identificación.
Estudiara la morfología colonial y celular de cada cepa.
Utilizando las tablas de diferenciación, estudiara las cepas
en estudio.
3. Introduccion
Las especies del genero Corynebacterium son bacilos Gram
positivos o variables al Gram, pleomorficos que se pueden
agrupar en empalizada o letras chinas, con frecuencia tienen
forma de mazo y pueden poseer gránulos metacromaticos de
polifosfatos, ya sea en el extremo del bacilo o en toda la célula,
dando apariencia de rosario.
La especie mas importante por su patogenicidad es C.
diphtheriae, aunque hay muchas otras especies consideradas
oportunistas.
Las especies del genero Rhodococcus son bacterias filamentosas
que se fragmentan en cocos y pequeños bacilos, no esporulados,
inmóviles, aerobios, pueden tener gránulos de polifosfatos, su
pared celular contienen acido diaminopimelico, micolico y
tuberculoestatico. Estas características les hacen ser similares
a otras bacterias como Corynebacterium y Mycobacterium.
4. Listeria
El género Listeria, representa
un grupo de estrechamente
relacionados, bacilos Gram-
positivos, anaerobios
facultativos, no formadoras
de esporas, en forma de
bastoncillos 0,5 m de ancho y
1-1.5 mu m de longitud.
Taxonómico, se divide en seis
especies de los cuales sólo L.
monocytogenes y L. ivanovii
son patógenas
5. Pruebas bioquimicas
• Especies de Listeria son
bacterias estrechamente
relacionadas que
comparten muchas
características
morfológicas y bioquímicas.
- Aparte de ser catalasa
positiva.
- Indol y oxidasa
negativos
-Hidrólisis esculina
positiva
- No hidrolizan la urea.
6.
7. Materiales
1. Cultivo de 24 – 48 horas en gelosa soya tripticasa inclinada de las diferentes especies de
Corynebacterium y Rhodococcus existentes en el cepario del Departamento de Microbiología.
2. Medios de cultivo en placa:
- Gelosa chocolate telurito de potasio.
- Gelosa sangre
3. Medios de cultivo en tubo:
- Caldo simple 2ml
- Caldo nitrato con campana de Durham
- Urea de Christensen
- Gelatina nutritiva
- SIM
8. - Agar esculina
- Caldo con indicador y campana de los siguientes
carbohidratos:
- Glucosa
- Maltosa
- Sacarosa
- Manitol
- Xilosa
4. Frascos goteros con los siguientes reactivos:
- Peroxido de hidrogeno al 3%
- Acido sulfanilico
- Alfa niftalamina
5. Polvo de Zinc
6. Aplicadores de madera
10. A. Aislamiento y realización de pruebas
requeridas para la identificación.
1. Sembrar cada cepa por 2. Sembrar en la forma
frobisher: habitual en cada uno de los
- Gelosa chocolate siguientes medios de
telurito de potasio. cultivo:
- Caldo simple
- Gelosa sangre. - Caldo nitrato
- Urea de Christensen
- Gelatina
- SIM
- Agar esculina
- Caldo carbohidratado
- Glucosa
- Maltosa
- Sacarosa
- Manitol
- Xilosa
11. 3. Incubar a 37 °C / 24 – 48 horas.
Medios de cultivo
13. B. Leer e interpretar los resultados
anteriores.
Describir morfología colonial de cada cultivo en los
medios A. 1
Describir morfología celular de una colonia aislada
delos medio A. 1 (frotis por Gram) si en este se
sospecha la presencia de gránulos metacromaticos, se
puede hacer un frotis y colorearlo con azul de metileno
de Loeffler.
Leer las pruebas bioquímicas del numeral A. 2 en la
forma usual.
Con los resultados obtenidos, utilizar el cuadro de
diferenciación para identificar las cepas en estudio.
14. Identificación de especies del
genero Corynebacterium y otros
Características Cepas en estudio
Cepa 1 Cepa 2 Cepa 3
Morfología celular
Prueba de catalasa
Β- hemolisis
Reducción de nitratatos
Ureasa
Hidrolisis de gelatina
Movilidad
Hidrolisis esculina
Glucosa
Maltosa
Fermentación de sacarosa
Manitol
Xilosa