Explicación de la demostración Medios_de_cultivo_y_metodos_de_siembra en el laboratorio

1. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SANTO DOMINGO
Primada de América
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Cátedra de Microbiología
Laboratorio de microbiología
MIP-133/111/114
1
Los Medios de Cultivos
Bacteriológicos

2. Valorar la importancia de los medios de cultivo
Clasificar los medios de cultivo
Comparar los diferentes métodos de siembra
Ilustrar los diferentes métodos de siembra
2

3. Medios de Cultivo
Formula básica de los medios de
cultivo
 Clasificación de los medios de cultivo
 Métodos de siembra
Clasificación de los métodos de
siembra
Técnicas de siembra
3

4. Medios de Cultivos bacterianos
• Definición: los medios de cultivos
son sustratos de nutrientes en los
que crecen y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio
4

5. • Nutrientes básicos : agua, carbono, nitrógeno, fosforo, azufre, otros
nutrientes son potasio, magnesio, en pequeñas concentraciones Hierro,
cobre y cobalto.
• Metabolitos esenciales: Acido piruvico,
5

6. Los medios de cultivo son
una mezcla equilibrada de
nutrientes que en
concentraciones
adecuadas y con
condiciones físicas
óptimas permiten un buen
crecimiento de los
microorganismos. 6

7. 7

8. 8

9. Un medio de cultivo es un sustrato o
solución de nutrientes en los que
crecen y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con
el objeto de aislar diferentes especies
bacterianas, proceder a su
identificación y llevara cabo una serie
de estudios complementarios.
9

10. Los sustratos energéticos y la materia orgánica
sintética (sustratos como proteínas derivados de
la celulosa, etc.) pueden suministrarse por
sustancias nutritivas contenidas en la maceración
de carne y vísceras.
Los aminoácidos o péptidos los aportan las
peptonas, que contienen todos los productos de
degradación de las proteínas, sin vitaminas, y su
composición exacta varía según el tipo de
sustrato y enzima utilizados, como pepsina,
tripsina, papaína, entre otras.
Los factores de crecimiento se suministran
por maceración y adición de sangre, suero,
extracto de levadura, líquido ascítico, etc
10

11. 11
Agua
Cloruro de
sodio
Peptona
Extracto de
carne o de
levadura

12. Consistencia
• Líquidos
• Sólidos
• Semisólidos
Origen
• Medios
sintéticos
• Medios
naturales.
Composición
y Utilización
• Medios simples
• Medios
enriquecidos
• Medios
selectivos
• Medios
diferenciales
12

13. Los medios de cultivo se clasifican en
dos grandes grupos
1.- Medios de cultivo vivos o animados,
formado por células vivas; huevo embrionario para
el desarrollo de microorganismos muy exigentes
(Virus, Chlamydias, Rickettsias).
2.- Medios de cultivo muertos o inanimados,
formados por mezclas de sustancias nutritivas para
el desarrollo de microbios menos exigentes
(Bacterias, Hongos); éstos crecen en
medios vivos pero no como una exigencia.
13

14. l. Líquidos. Contienen los nutrientes antes
citados, a los cuales se les adiciona una
sustancia capaz de mantener el pH
adecuado. Entre
los más empleados están: el caldo
nutritivo y el caldo peptona.
Los medios de cultivo pueden clasificarse según su
consistencia en:
14

15. 2. Sólidos. Se obtienen agregando agar, sustancia
polisacárida e inerte obtenida de algas marinas
del género Gellidium, en una concentración
de 1,5 a 2,0%, a un medio líquido determinado.
Este conjunto, debidamente esterilizado, se
vierte en una caja de Petri o en un tubo de ensayo.
Las exigencias nutritivas y las condiciones fisicoquímicas
son similares a las de los medios líquidos.
Pero a diferencia de ellos, ofrecen la
posibilidad de obtener colonias aisladas, siempre
que la cantidad del inóculo esté suficientemente
diluida.
En este caso se observa la existencia de
colonias separadas unas de otras.
15

16. 3. Semisólidos. Son muy semejantes a
los medios sólidos, con la diferencia
que a estos se les disminuye la
concentración del agar agregado a
0,5%.
Se utilizan para la conservación de
cepas bacterianas y la observación y
registro de bacterias móviles .
16

17. Los medios sintéticos o químicamente
definidos: son medios compuestos por
productos químicos conocidos y se usan para
estudios metabólicos. Ejemplo: agar nutritivo,
agar blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de
metileno, etc.
Los medios naturales o químicamente no
definidos: son aquellos medios preparados a
partir de sustancias naturales animales o
vegetales, de composición no rigurosamente
constante. Ejemplo: el suero, la leche, la papa,
etc. 17

18. Según su composición y utilización los medios de cultivo se clasifican en:
Agar nutritivo
18

19. Agar sangre
19

20. Medio de Mac Conkey
20

21. Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante
Medio de cultivo
selectivo y
diferencial
21

22. Agar sangre:
Medio de cultivo
enriquecido
contiene sangre de
carnero desfibrinada al
5 %
.
01/10/2023 22

23. Medio de Mac Conkey:
 Contiene el azúcar
lactosa y un indicador que
es el rojo neutro, este
medio es selectivo para
microorganismos Gram
negativos.
 Y también diferencial
porque contiene el azúcar
lactosa
 Si la lactosa es utilizada
las colonias se observaran
de color rosado
 Si no las colonias se
observaran transparentes.
01/10/2023 23

24. Eosina Azul de metileno
Es un medio selectivo y
diferencial
Es selectivo para
bacterias Gram
negativas si se
observan colonias
con brillo verde
metálico.
Si hay mucha acidez
La E. coli crece con
brillo verde metálico
01/10/2023 24

25. Manitol salado
Medio selectivo y
diferencial
Es un medio utilizado para
los Estafilococos.
El indicador de PH es rojo
fenol.
Si el microorganismo
utiliza el manitol se
observan colonias
amarillas.
Si no lo utiliza, se tornará
color rojo cereza.
Es utilizado por el S.
aureus.
25

26. TSI
Medio de cultivo
Diferencial
Contiene tres azucares
Glucosa, lactosa y sacarosa
01/10/2023 26

27. Eosina Azul de metileno
27

28. 28

29. 29

30. Medio de Stuart
30

31. Sembrar una
bacteria es el acto
de colocarla en un
medio de cultivo
apropiado para
promover su
crecimiento y
desarrollo. 31

32. Asas Y Agujas
Se utilizan para pescar
transportar y sembrar el
material bacteriológico.
Se esterilizan en el
mechero al rojo vivo
antes y después de las
siembras bacteriológicas.
01/10/2023
32

33. El resultado lógico de una siembra, si las
condiciones son apropiadas, es el
desarrollo de un cultivo microbiano.
Las siembras se ejecutan con asas o agujas
de platino generalmente.
En ocasiones se emplean hisopos de
algodón estériles, pipetas, de acuerdo al
tipo de estudio a realizar.
Para desarrollar una bacteria invitro hay que
proporcionarle :
1. Nutrientes con los medios de cultivos que
requieran.
2. La atmósfera apropiada
3. La temperatura optima, entre otros.
33

34. Las siembras pueden ser :
Primarias: cuando el material microbiológico se
inocula en los medios por primera vez.
Secundarias: cuando el material a inocular
procede de una siembra primaria. A esto se le
denomina resiembra
34

35. DIFERENTES METODOS DE SIEMBRA
Medio de Cultivo Método de
Siembra
Instrumento
Finalidad
Medio Líquido Dilución Asa Poner la bacteria
en suspensión
Agar Base en
Placa
Estrías por
Agotamiento
Asa Aislar colonias
Agar Base en
Tubo
Estrías en
Superficie
Asa Poner la bacteria
en superficie
TSI* Punción y Estría
en superficie
Aguja Observar los
cambios en la S y
P
Semisólido Punción Aguja Estudiar la
movilidad
Antibiograma Embarduramient
o
Hisopo Obtener colonias
confluentes

36. Siembra por dilución
El asa o aguja de platino
cargados con el material a
sembrar se introduce en el
seno de los medios de cultivo
líquidos y se agita
moderadamente.
El propósito es el de producir
una dilución uniforme del material
bacteriológico en el
medio líquido o caldo. 36

37. Métodos De Siembra
Medio: Líquidos o caldos
Instrumento: Asa
Método: Dilución
Finalidad: poner la bacteria
en suspensión
01/10/2023 37

38. Siembra por picadura
La aguja de platino con el material a sembrar en su punta se
introduce el fondo de los medios semi-sólidos, como si se
tratara de una punción de los mismos.
La aguja se retira por el mismo trayecto que
formó cuando penetró, evitando en lo posible los
deslizamientos laterales del alambre.
El sitio de penetración en el medio debe ser el centro de su
superficie libre. El propósito es sembrar las bacterias
solamente en el trayecto que crea la aguja. Es utilizado
para demostrar la movilidad de las bacterias.
38

39. Métodos De Siembra
Medio: Semisólido
Instrumento: Aguja
Método: Punción o Picadura
Finalidad: observar la
Movilidad.
Si crece en la línea de siembra es inmóvil.
Si crece fuera de la línea de siembra es móvil
01/10/2023 39

40. Siembra por estrías en superficie
Se puede realizar con la aguja o con el asa, preferentemente con
ésta última, en la superficie de los medios sólidos. Estos medios
están incluidos en tubos de ensayo y su superficie se dispone
inclinado con respecto al eje mayor de los tubos.
La estría se comienza en la parte más profunda de la superficie y se
termina en la parte más cercana a la boca del tubo. La línea
quebrada que resulta no debe quedar ni muy cerrada ni muy abierta.
La superficie del medio se aprisiona delicadamente porque de otra
forma se rompe y la siembra se deteriora.
40

41. Métodos de Siembra
Medio: Sólido en tubo
Inclinado.
Instrumento: Asa o aguja
Método: Estría en superficie
01/10/2023 41

42. Siembra por embadurnamiento
Se practica con hisopos estériles.
pero puede hacerse también con
varillas de cristal, asas o agujas de
platino.
El propósito es embadurnar la
superficie del medio, produciendo
una película sobre el mismo.
42

43. Siembra por estrías por agotamiento en la superficie
de placa (para aislar colonias).
Mediante este método, las bacterias procedentes de un
material puro o mixto, son dispersadas y agotadas en cantidad
en forma progresiva sobre la superficie de un medio sólido.
El propósito es que las bacterias se siembren aisladas unas de
otras y crezcan formando colonias separadas que más tarde se
puedan "pescar“ para realizar cultivos puros y otras pruebas
adecuadas, siempre se ejecuta sobre medios contenidos en
placas de Petri, preferentemente con asa de platino.
43

44. 44

45. Métodos de Siembra
Medio de cultivo: TSI
Método: Punción y
estrías en superficie.
Instrumento: Aguja
Finalidad:
Observar los reacciones
(cambios) que ocurren en
la superficie y la
Profundidad.
01/10/2023 45

46. Interpretación: Lectura De TSI
• Amarillo (A): ácido (utilizo el
azúcar)
• *Rojo (K): alcalino (no utiliza el
azúcar)
• *Negro: presencia de H2S (H2S+)
• *Burbujas o vacíos, con
levantamiento del medio:
• presencia de H2 + CO2
• H2 + CO2+
• Precipitado negro = H2S
01/10/2023 46

47. TECNICA DE BARRY: siembra previa al
vertido del medio en la placa. Para ello se
mantiene el medio de cultivo a una
temperatura de 45 a 50 ºC; se toman de 20 a
25 ml en un tubo de ensayo y se le adiciona
una cantidad de inóculo que
oscila entre 0,1 y 0,4 y se homogeneíza la
muestra en el tubo mediante un vibrador; a
continuación se vierte en la placa de Petri y se
deja solidificar.
47

48. TECNICA DE LOS 4 CUADRANTES: con un rotulador indeleble
se dibujan dos líneas perpendiculares en la base de la placa (reverso),
que se deben cruzar en el centro de la placa, de
forma que esta queda dividida en cuatro cuadrantes iguales. Se
toma con el asa de siembra una cantidad de inóculo y se adiciona al
extremo superior de uno de los cuadrantes, extendiéndose por todo
ese cuadrante en forma de zig-zag. Se realiza la misma operación si
flamear en todos los cuadrantes siguiendo un orden, de tal forma que
iremos arrastrando el microorganismo problema, observándose en el
último cuadrante las colonias más aisladas o separadas.
48

49. TECNICA DE LOS 3 GIROS : se rotula la
placa de forma análoga al caso anterior; se
toma inóculo con el asa y se siembra por
estría la mitad superior de la placa. Sin
flamear se gira la placa unos 90º y se vuelve
a sembrar una segunda vez. Se gira de
nuevo la placa unos 90º y se repite la
operación completándose la siembra. No es
una técnica muy utilizada porque no permite
buenos aislamientos.
49

50. Texto:
Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2.a edición Hugo
Humberto Montoya Villafañe
Imágenes :
http://www.sciencephoto.com/media/206305/enlarge
http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/announcement/view/7445
http://www.elika.net/consumidor/es/preguntas_patogenos.asp
http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Medios+De+Cultiv
o&lang=2
http://www.biocen.cu/producto/indicemc/veccs1.jpg
http://www.flickr.com/groups/microbiolabstraining/pool/23822998@N0
8/ 50