La coloración de Ziehl-Neelsen es una tinción positiva, compuesta y diferencial utilizada para identificar micobacterias como Mycobacterium tuberculosis. Involucra el uso de fucsina fenicada como colorante primario y azul de metileno como contratinción, seguido de una decoloración con alcohol ácido. Las bacterias que retienen la fucsina después de la decoloración (BAAR) se tiñen de rojo, mientras que aquellas que se decoloran (BAANR) se tiñen de azul, permitiendo diferenciar estas dos categorías de

1. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SANTO DOMINGO
Primada de América
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Cátedra de Microbiología
Laboratorio de microbiología
MIP-133/111/114
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Coloración de Ziehl-Neelsen

2. Coloración de Ziehl-Neelsen
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3. Objetivos
• Identificar los géneros de bacterias a los que
se les aplica la coloración de Zielhl Neelsen
• Mencionar los colorantes y el decolorante
usados en la coloración
• Aplicar los pasos para realizar la coloración
• Interpretar los resultados de la coloración
• Valorar la importancia de esta coloración para
el diagnostico del micobacterium tuberculosis

4. 4
Coloración de Ziehl-Neelsen
Introducción
Dentro de las bacterias que se no se pueden clasificar por la coloración de
Gram están las del Género Micobacterias y Nocardias.
Robert Koch, ideo una tinción que fue denominada ácido alcohol resistentes;
actualmente la técnica más utilizada es una modificación de la original que
recibe el nombre de sus autores: Ziehl-Neelsen.
Las especies del género Micobacterium no se tiñen fácilmente con
colorantes simples, por lo que se deben usar tratamientos más: calentando
una mezcla de fucsina básica más fenol

5. 5
Práctica
No. 07
Coloración de Ziehl-Neelsen
Fundamento de la coloración de Ziehl-Neelsen.
La propiedad que posee este grupo de bacterias
esta relacionada con el alto contenido en las
paredes de estas bacterias de ácidos micólicos (
Grupo de lípidos hidroxilos de cadena ramificada),
esta sustancia hace que las bacterias no se
decoloren con la solución ácido alcohólica y se
observen de color rojo
Esta coloración se conoce también como
coloración en caliente, porque durante el proceso
se emplea calor para facilitar la penetración, del
primer colorante utilizado, a través de la pared
celular.

6. Coloración de Ziehl-Neelsen
• Esta coloración se utiliza en el genero de las
miobacterium y el genero Nocardias
• Cuando el colorante penetra a las células
Acido-alcohol resistentes no se decoloran
fácilmente permaneciendo de color rojo
• La propiedad que posee este grupo de
bacterias esta relacionado con el alto
contenido en las paredes de estas bacterias de
ACIDO MICOLICO.

7. Coloración de
Ziehl-Neelsen
Técnica comúnmente usada en el diagnóstico
de tuberculosis.
Permite diferenciar a las bacterias en dos
grupos: aquellas que son capaces de resistir
la decoloración con alcohol-ácido (BAAR) y
aquellos que no lo son (BAANR).
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8. Coloración de
Ziehl-Neelsen
Técnica comúnmente usada en el diagnóstico
de tuberculosis.
Permite diferenciar a las bacterias en dos
grupos: aquellas que son capaces de resistir
la decoloración con alcohol-ácido (BAAR) y
aquellos que no lo son (BAANR).
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9. El agente etiológico de la tuberculosis fue descrito por Heinrich
Hermann Robert Koch.
Basándose en las características de las micobacterias, desarrolló una
de las primeras tinciones utilizando azul de metileno.
Sin embargo, fueron los trabajos de Paul Ehrlich los que definieron
la resistencia a la decoloración por alcohol-ácido.
Las últimas modificaciones a la tinción fueron realizadas por los
científicos alemanes Franz Ziehl y Karl Adolf Neelsen.
Coloración de Ziehl-
Neelsen
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10. La pared celular de las micobacterias es compleja en cuanto
a su composición bioquímica; compuesta por ácido
mesodiaminopimélico, alanina, ácido glutámico,
glucosamida, ácido murámico, arabinosa y galactosa.
Los ácidos micólicos , lípidos libres (ej. trealosa-6,6´-
dimicolato) proveen a la célula de una barrera hidrofóbica.
Otros ácidos grasos importantes son:
ceras, fosfolípidos y ácidos micoséricos.
Coloración de Ziehl-
Neelsen
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11. La tinción se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la
preparación ligeramente para solubilizar las ceras, lípidos
y otros ácidos grasos de la pared celular para que permita
el paso libre del colorante, el cual tiene una enorme
afinidad por los ácidos micólicos presentes en la pared.
Al enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a
solidificar, resistiendo la acción abrasiva del alcohol-
ácido, y el azul de metileno se utiliza como contratinción.
Coloración de Ziehl-
Neelsen
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12. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
1. Frotis o película
(extensión)
2. Dejar secar
3. La fijación
4. Coloración.
Coloración de
Ziehl-Neelsen
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Práctica
No. 07
Coloración de Ziehl-Neelsen
Material necesario
Laminas porta objetos
Colorantes: -Fucsina Fenicada o carbol fucsina
-Azul de metileno
Reactivo: Alcohol ácido
Lampara de alcohol
Microscopio óptico
Aceite de Inmersión

14. Coloración de Ziehl-Neelsen
Práctica
No. 07

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Práctica
No. 07
Coloración de Ziehl-Neelsen
1 2
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16. Frotis y fijación
1.-Poner una gota de
agua en un porta
2.- Tomar la muestra de
un cultivo de
Mycobacterium
3.-Extender sobre
el agua y fijar a la
llama del mechero
4.-Cubrir la
preparación con
Fuchina fenicada
5.-Calentar con un
hisopo de algodón
empapado en alcohol y
prendido con la llama
del mechero hasta la
emisión de vapores.
Mantener durante 5
minutos.
6.-Lavar con agua y
decolorar con
alcohol ácido
7.-Teñir con Azul
de Metileno 1’
Miercoles
Tinción
Procedimiento tinción de ácido-alcohol-
resistente.
8.-Lavar con
agua, dejar
secar y
observar al
microscopio
Tinción
9.-BAAR
Práctica
No. 07

17. 17
Práctica
No. 07
Coloración de Ziehl-Neelsen
Interpretación de resultados
BAAR
(Bacilos alcohol ácido
resistentes) se tiñen de
color rojo.
BAANR
(Bacilos alcohol ácido
no resistentes) se
tiñen de color azul.
Observar en
objetivo de 100 x
Hacer reporte de los esquemas de los 2 tipos de resultados que se
pueden obtener con esta coloración , páginas 54 de su manual de
microbiología.

18. RESUMEN

19. Esta tinción es positiva, compuesta y diferencial.
19

20. Coloración Ziehl Neelsen. Ácido-alcohol resistente
Coloración Colorantes y reactivos Resultados
Coloración Ziehl Neelsen
Acido-alcohol resistente
1. Fucsina fenicada básica
BAAR: Color rojo
Bacilo Alcohol Ácido Resistente (BAAR)
BAANR: Color azul
2. Alcohol ácido
3. Azul de metileno

21. RESULTADOS
Coloración de Ziehl-Neelsen
(BAAR) (BAANR).
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