La electroforesis es una técnica para separación de biomoléculas según su movilidad y naturaleza (generalmente ácidos nucleicos o proteínas) el principio básico de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por acción de un campo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular.
2. BIOTECNOLOGÍA
INFORME DE MAQUETA
EQUIPO DE ELECTROFORESIS
Estudiantes:
Arrazola Ccosi, Maria Milagros
Chipana Condori, Brayan Alexander
Hinojosa Ramirez, Wendy Yaneth
Luque Checalla, Marians Romina
Mamani Mamani, Josselyn Leydi
Docente: Prof. Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales
Ilo – Perú
Diciembre 03, 2021
VII ciclo
Escuela Profesional de
Ingeniería Ambiental
3. Í n d i c e | 3
ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN.................................................................................................... 4
II. OBJETIVOS ............................................................................................................. 5
2.1. Objetivo general..............................................................................................5
2.2. Objetivos específicos.......................................................................................5
III. MARCO TEÓRICO................................................................................................. 5
3.1. Ácido Desoxirribonucleico (ADN).................................................................5
3.2. Ácido Ribonucleico (ARN).............................................................................6
3.3. Electroforesis...................................................................................................7
3.4. Banda...............................................................................................................7
3.5. Calle o carril....................................................................................................8
3.6. Correr ..............................................................................................................8
3.7. Cubeta..............................................................................................................8
3.8. Fuente ..............................................................................................................8
3.9. Peine.................................................................................................................9
3.10. Pocillo...........................................................................................................9
3.11. Métodos de la electroforesis.......................................................................9
3.11.1. Electroforesis en gel .................................................................................. 9
3.11.2. ¿Cómo se mueven los fragmentos de ADN a través del gel? ................. 10
3.11.3. Visualización de los fragmentos de ADN ............................................... 11
IV. METODOLOGÍA................................................................................................... 13
4.1. Materiales......................................................................................................13
4.2. Procedimiento ...............................................................................................13
4.2.1. Cubetas....................................................................................................... 13
4.2.2. Fuente de corriente.................................................................................... 13
4.2.3. Foto documentador.................................................................................... 14
4.2.4. Peine........................................................................................................... 14
V. RESULTADOS....................................................................................................... 14
VI. CONCLUSIONES .................................................................................................. 17
VII. RECOMENDACIONES ........................................................................................ 18
VIII. BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................... 19
4. P á g i n a | 4
I. INTRODUCCIÓN
Los microrganismos son un grupo de seres vivos que se encuentran en una gran variedad de
lugares como lo son las plantas, animales y humanos en donde coexisten con el huésped
ayudando a realizar un sin fin de funciones. Sin embargo, algunos de estos como los
microorganismos patógenos pueden ocasionar enfermedades en los organismos mencionados
provocando la muerte de los mismos. Desde la perspectiva de la salud, en seres humanos es
necesario establecer protocolos que permitan la identificación de estos agentes perjudiciales
y prevenir el efecto patógeno que generan sobre las personas. El estudio del ADN de los
microorganismos ha potenciado la identificación de estos a partir de diferentes técnicas
moleculares, tal es caso de la electroforesis, una técnica que permite el procesamiento de los
fragmentos de ADN que, al ser regiones muy conservadas dentro de cada especie, es posible
identificar a estos.
La electroforesis es una técnica para separación de biomoléculas según su movilidad y
naturaleza (generalmente ácidos nucleicos o proteínas) el principio básico de la electroforesis
consiste en la migración de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza
porosa, en el cual, por acción de un campo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño
o peso molecular. Para la separación de ácidos nucleicos se utilizan matrices de agarosa y
para la separación de proteínas se utilizan matrices de poliacrilamida. Entre las distintas
plataformas de electroforesis, las más utilizadas en análisis de ácidos nucleicos son la
electroforesis en gel de agarosa, la electroforesis de campo pulsado (PFGE) o la electroforesis
en gel con gradiente de desnaturalización (DGGE).
Para controlar el avance de la separación de las moléculas en la matriz y establecer un patrón
de fragmentos, las moléculas deberán ser teñidas con diferentes colorantes. Estos pasos
5. P á g i n a | 5
facilitan la visualización de las moléculas a manera de simples bandas las cuales serán
posteriormente analizadas e interpretadas. Es una técnica muy utilizada en la investigación
básica, muy importante para la comprensión de la función de genes y proteínas, La
electroforesis nos permite ver cuántos fragmentos diferentes de ADN están presentes en una
muestra y cuán grandes son unos con respecto a otros.
II. OBJETIVOS
2.1.Objetivo general
Elaborar una maqueta de electroforesis de ADN Y ARN e identificar cada una de las
partes que la compone.
2.2.Objetivos específicos
- Entender el proceso de la electroforesis y su metodología.
- Identificar las partes del equipo de electroforesis.
- Determinar la función de cada parte del equipo de electroforesis.
III. MARCO TEÓRICO
3.1.Ácido Desoxirribonucleico (ADN)
ADN es el nombre químico de la molécula que contiene la información genética
en todos los seres vivos. La molécula de ADN consiste en dos cadenas que se
enrollan entre ellas para formar una estructura de doble hélice. Cada cadena tiene
una parte central formada por azúcares (desoxirribosa) y grupos fosfato.
Enganchado a cada azúcar hay una de de las siguientes 4 bases: adenina (A),
citosina (C), guanina (G), y timina (T). Las dos cadenas se mantienen unidas por
enlaces entre las bases; la adenina se enlaza con la timina, y la citosina con la
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guanina. La secuencia de estas bases a lo largo de la cadena es lo que codifica las
instrucciones para formar proteínas y moléculas de ARN (NHGRI, s.f.).
3.2.Ácido Ribonucleico (ARN)
El ácido ribonucleico (ARN) es una molécula similar a la de ADN. A diferencia
del ADN, el ARN es de cadena sencilla. Una hebra de ARN tiene un eje
constituido por un azúcar (ribosa) y grupos de fosfato de forma alterna. Unidos a
cada azúcar se encuentra una de las cuatro bases adenina (A), uracilo (U), citosina
(C) o guanina (G). Hay diferentes tipos de ARN en la célula: ARN mensajero
(ARNm), ARN ribosomal (ARNr) y ARN de transferencia (ARNt). Más
7. P á g i n a | 7
recientemente, se han encontrado algunos ARN de pequeño tamaño que están
involucrados en la regulación de la expresión génica (NHGRI, s.f.).
3.3.Electroforesis
La electroforesis es una técnica que emplean los científicos en el laboratorio
utilizada para separar el ADN, el ARN, o moléculas o proteínas en base a su
tamaño y carga eléctrica. Se utiliza una corriente eléctrica para mover las
moléculas y que se separen a través de un gel. Los poros del gel actúan como un
colador, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que
las grandes. Las condiciones utilizadas durante la electroforesis se pueden ajustar
para separar moléculas en el rango de tamaño que se desee (NHGRI, s.f.).
3.4.Banda
Línea (o mancha) corta y horizontal (paralela al pocillo de carga) en la foto de un
gel, constituida por la agrupación de moléculas o fragmentos de DNA o proteína
con un mismo tamaño. Todos los del mismo tamaño migrarán al mismo lugar del
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gel, formando la banda. Las bandas sólo son visibles tras la tinción del DNA o las
proteínas. El DNA se revela habitualmente con un compuesto intercalante (por
ej., bromuro de etidio) e iluminación con luz UV (Biomodel, s.f.).
3.5.Calle o carril
Cada zona en un gel correspondiente a la trayectoria de las moléculas
componentes de una misma muestra (aplicada en un pocillo). Las moléculas de
DNA o de proteína de una muestra van recorriendo la calle del gel a diferentes
velocidades, dependiendo de su tamaño, y terminan ubicándose en forma
de bandas separadas (Biomodel, s.f.).
3.6.Correr
De forma coloquial se habla de "correr la electroforesis" o "correr un gel" para
referirnos al proceso de desarrollo de la separación electroforética de los
componentes de la muestra. Corresponde al periodo en que se mantiene conectada
la corriente eléctrica. Literalmente, las moléculas "corren" por el interior de la
malla tridimensional del gel, desde el pocillo a lo largo de una calle del gel
(Biomodel, s.f.).
3.7.Cubeta
La cubeta electroforética (o tanque) es el depósito con dos compartimentos que
contienen el tampón de electroforesis, entre los cuales se coloca el gel. La cubeta
incorpora los electrodos entre los que se establecerá el campo eléctrico
(Biomodel, s.f.).
3.8.Fuente
La fuente de corriente es el dispositivo que proporciona una corriente eléctrica
continua (transformando la corriente alterna del suministro eléctrico). Al
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conectarle los dos electrodos de la cubeta se establece a través de gel el campo
eléctrico que impulsará a los componentes de la muestra y así producirá la
separación electroforética. Normalmente, las fuentes para electroforesis permiten
regular y mantener constante la diferencia de potencial (voltaje) o la intensidad
de corriente (Biomodel, s.f.).
3.9.Peine
Una pieza plana de plástico en forma de rectángulo al que se le han cortado en un
lado muescas, dejando salientes o "dientes". Cada diente genera un hueco al
formarse el gel, con lo que el gel acabado tiene una fila de huecos (los pocillos)
adecuados para cargar en ellos la muestra (Biomodel, s.f.).
3.10. Pocillo
Cada uno de los huecos creados en el gel como consecuencia de la inserción del
peine, en la agarosa fundida o en la acrilamida aún no polimerizada, y su retirada
tras la solidificación del gel. Los pocillos se llenan luego de tampón y se
introducen en ellos las muestras de DNA o proteínas (carga de las muestras).
3.11. Métodos de la electroforesis
Uno de los métodos más utilizadas por los científicos
3.11.1. Electroforesis en gel
La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos
de ADN (u otras macromoléculas, como ARN y proteínas) por su tamaño
y carga. La electroforesis consiste en aplicar una corriente a través de un
gel que contiene las moléculas de interés. Con base en su tamaño y carga,
las moléculas se desplazarán por el gel en diferentes direcciones o a
distintas velocidades, con lo que se separan unas de otras.
10. P á g i n a | 10
Todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa.
Debido a esto, la electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN
únicamente por su tamaño. La electroforesis nos permite ver cuántos
fragmentos diferentes de ADN están presentes en una muestra y cuán
grandes son unos con respecto a otros. También podemos determinar el
tamaño absoluto de un fragmento de ADN examinándolo junto a una
"escala" estándar de fragmentos de tamaño conocido.
3.11.2. ¿Cómo se mueven los fragmentos de ADN a través del gel?
Una vez que el gel está en la cámara, cada una de las muestras de ADN
que queremos analizar (por ejemplo, cada reacción de PCR o cada
plásmido digerido con enzimas de restricción) se transfiere
cuidadosamente a uno de los pozos. Un pozo se reserva para el marcador
de peso molecular, un estándar de referencia que contiene fragmentos de
ADN de longitudes conocidas. Los marcadores de ADN comerciales
cubren diferentes intervalos de tamaños, por lo que trataremos de usar
uno con buena "cobertura" en el intervalo de tamaños en el que esperamos
encontrar nuestros fragmentos.
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A continuación, se aplica energía eléctrica a la cámara y empieza a fluir
corriente a través del gel. Los grupos fosfato de su esqueleto de azúcares-
fosfato le otorgan una carga negativa a las moléculas de ADN, por lo que
comienzan a moverse a través de la matriz de gel hacia el polo positivo.
Cuando el sistema está encendido y pasa corriente por el gel, se dice que
el gel está corriendo.
3.11.3. Visualización de los fragmentos de ADN
Una vez que los fragmentos se han separado, podemos examinar el gel y
saber el tamaño de las bandas que se encuentran en él. Cuando un gel se
tiñe con un pigmento que se une al ADN y se coloca bajo luz UV, los
fragmentos de ADN brillarán, lo cual nos permite ver el ADN presente
en distintos lugares a lo largo del gel.
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El pb que está al lado de cada número en el marcador indica cuántos pares de bases tiene el
fragmento de ADN.
Una "línea" de ADN bien definida en un gel se llama banda. Cada banda
contiene un gran número de fragmentos de ADN del mismo tamaño que
han viajado juntos a la misma posición. Un fragmento único de ADN (o
incluso un pequeño grupo de fragmentos de ADN) no sería visible por sí
mismo en un gel.
Al comparar una banda en una muestra con el marcador de peso
molecular, podemos determinar su tamaño aproximado. Por ejemplo, la
banda brillante del gel anterior tiene un tamaño aproximado de
700700700 pares de bases (pb).
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IV. METODOLOGÍA
4.1.Materiales
- Temperas
- Pinceles
- Plancha de cartón
- Cajas de cartón
- Táper
- Regla
- Silicona líquida y en barra
- Pistola para silicona
- Lápiz
- Borrador
- Cúter
- Tijeras
- Palitos de paleta
4.2.Procedimiento
4.2.1. Cubetas
La primera cubeta fue realizada con un táper el cual fue cortado en la
parte inferior para darle forma, así mismo se recortaron 2 pedazos de
cartón para hacer las divisiones que corresponde a la conexión directa con
la fuente eléctrica. Así mismo, se cortó un cuadrado de cartón para la base
en la que se va a colocar la segunda cubeta, además se colocó una tapa de
botella en los dos lados extremos junto con un cable (en cada lado) de tal
manera que estén conectados con la fuente eléctrica.
La segunda cubeta fue recortada de una caja de cartón y se recortó unos
espacios laterales para colocar el peine.
4.2.2. Fuente de corriente
Se realizo a partir de una caja pequeña la cual fue pintada, y después de
esperar el secado respectivo se procedió a graficar la pantalla, botones,
entre otras características de la fuente de la corriente
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4.2.3. Foto documentador
Se dividió en dos partes, primero se pinto una caja particularmente grande
de color café por fuera y color negro por dentro. Así mismo, se le añadió
una “Puerta” la cual previamente fue cortada de la plancha de cartón
(previo a ello se había realizado las medidas respectivas)
La segunda parte de la foto documentador se realizó a partir de una caja
mediana y se procedió a darle los colores y características respectivas
(botones, pantalla, etc.).
4.2.4. Peine
Se utilizo bajalenguas gruesas y delgadas. Para ello, se usó 2 bajalenguas
gruesas para la parte central para sostener los dientes y para los dientes se
utilizó bajalenguas delgados. Es donde se procedió a pegar para así poder
armar el peine
V. RESULTADOS
Después de seguir paso a paso el procedimiento para el armado de cada parte del
equipo de electroforesis, los resultados fueron los siguientes:
5.1.Cubetas
Se construyeron dos cubetas:
a) La cubeta de la Figura 1 es la que va directamente conectada a la fuente
eléctrica por medio de dos cables que yacen al extremo, uno opuesto al otro.
b) La cubeta de la Figura 2 es la que se colocará dentro de la cubeta conectada a
la fuente eléctrica. Así mismo, en ella se colocará el peine y posteriormente
el gel.
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Figura 1. Cubeta conectada directamente a la fuente eléctrica
Figura 2. Cubeta donde se coloca el gel
5.2.Fuente eléctrica
La fuente eléctrica o fuente de potencia está conectada directamente a la cubeta
más grande (cámara) conectando dos cables distintos, el cable color rojo
(electrodo positivo) y el cable color negro (electrodo negativo).
Figura 2. Cubeta donde se coloca el gel
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5.3.Foto documentador
La función del fotodocumentador es mediante la luz UV fluorescente, iluminar
los geles, así mismo la cámara que yace incorporada en el fotodocumentador
mostrará las muestras de ADN o ARN cargadas en los pozos siendo los
fragmentados de ADN o ARN separados por tamaño.
Figura 3. Fotodocumentador
5.4.Peine
El peine posee dientes que tienen el mismo grosor de los espaciadores y su
función es moldear los pocillos donde se colocarán las muestras.
Figura 4. Fotodocumentador
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5.5.Equipo de electroforesis
Colocando cada parte que se elaboró por separado en el lugar correspondiente, se
obtiene el equipo de electroforesis.
Figura 5. Equipo de electroforesis
VI. CONCLUSIONES
- Logramos identificar los componentes que conforman el proceso de
electroforesis de ADN y ARN, esto previo al reconocimiento y entendimiento
de la funcionalidad de cada una de las partes en el diseño del prototipo, como
las cubetas, la fuente eléctrica, el fotodocumentador, el peine de barrido.
- Ya teniendo el producto final, se puede comprender de manera más perceptible
y espacial el mecanismo y proceso de la electroforesis en gel de agarosa,
infiriendo a un proceso de separación de moléculas en función de su carga,
tamaño, forma.
- La construcción de esta maqueta explica la razón de un analyzer biotecnológico
haciendo referencia a un medio de separación especialmente eficaz para las
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biomoléculas cargadas como el ADN, el ARN y las proteínas lo cual ayudaría a
la Ingeniería Ambiental con la identificación caracterización y pureza de nuevos
patógenos y contramedidas para dichos microorganismos.
- El principio básico de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas
a través de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por
acción de un campo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso
molecular.
VII. RECOMENDACIONES
- Fue primordial comenzar a revisar la literatura bibliográfica en cuanto al equipo
que hace posible la electroforesis, entendiendo el mecanismo de
funcionabilidades de cada componente y sus nexos conectores.
- También fue indispensable revisar videos para elaborar un boceto inicial y la
repartición de tareas con los demás miembros del grupo.
- Finalmente, no es omiso mencionar el tener el debido cuidado con las
herramientas a usar para la realización de la maqueta, como la manipulación de
objetos punzo cortantes, tijera, cuchillas, entre otros.
- Muy recomendable el de disponer un botiquín, esto para dar frente a cualquier
instancia inesperado como cortes en la mano, brazos, etc.
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VIII. BIBLIOGRAFÍA
EDVOTEK. (2018). Principios y práctica de la electroforesis en gel de agarosa . Obtenido de
https://www.edvotek.com
INS, I. N. (2003). MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ELECTROFORESIS PARA PROTEÍNAS
Y ADN. Lima: ARTES & DISEÑOS LASER S.R.LTDA.
Salud, C. d. (27 de Octubre de 2017). ADN y ARN concepto, diferencias y funciones. Obtenido de
https://www.universidadviu.com/pe
Antonio2, M. N. (2016). ELECTROFORÉSIS: FUNDAMENTOS,AVANCES Y APLICACIONES.
California: EPISTEMUS: www.epistemus.uson.mx.
Biomodel (s.f.). Argot en Electroforesis.
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/argot.htm#:~:text=calle%20del%20gel.-
,Cubeta,se%20establecer%C3%A1%20el%20campo%20el%C3%A9ctrico.
NHGRI (s.f.). Electroforesis. https://www.genome.gov/es/genetics-
glossary/Electroforesis#:~:text=La%20electroforesis%20es%20una%20t%C3%A9cnica,a%
20trav%C3%A9s%20de%20un%20gel.