candida glabrata

1. J Química antimicrobiana
doi: 10.1093 / jac / dkz565
Impacto de la inhibición de calmodulina por fl uphenazine sobre la susceptibilidad,
formación de biopelícula y patogenicidad de caspofungina resistente
Candida glabrata
Andrés Ceballos Garzón1,2, Daniela Amado1, Estelle Robert2, Claudia M. Parra Giraldo1 y Patrice Le Pape 2 *
1Unidad de Proteómica y Micosis Humanas, Grupo de Enfermedades Infecciosas Departamento de Microbiolog´ı́a, Facultad de Ciencias,
Ponti fi cia Universidad Javeriana, Bogotá DC, Colombia; 2Departamento de Parasitología y Micología Médica, Universidad de Nantes,
Universidades de Nantes Atlantique, Facultad de Farmacia, Nantes, Francia
* Autor correspondiente. Correo electrónico: patrice.le-pape@univ-nantes.fr
Recibido el 13 de agosto de 2019; regresó el 30 de septiembre de 2019; revisado el 13 de noviembre de 2019; aceptado el 19 de diciembre de 2019
Fondo: En décadas recientes, Candida glabrata se ha convertido en una causa frecuente de infección micótica
potencialmente mortal. EnC. glabrata, La resistencia a la equinocandina se asocia con mutaciones en FKS1 / FKS2 (B-1,3-
glucano sintasa). La vía de la calmodulina / calcineurina está implicada en la respuesta al estrés antifúngico y la alteración del
gen de la calcineurina revierte específicamente la resistencia mediada por Fks2 de los aislados clínicos.
Objetivos: Evaluamos el impacto de la inhibición de calmodulina por fl uphenazine en dos casos resistentes a caspofungina.
C. glabrata aislamientos.
Métodos: C. glabrata los aislamientos fueron identificados por ITS1 / ITS4 (donde ITS significa espaciador transcrito interno)
secuenciación y el objetivo de equinocandina FKS1 / FKS2 se secuenciaron los genes. La prueba de susceptibilidad de caspofungina en
presencia de fl uphenazine se realizó mediante un método de dilución de microcaldo CLSI modificado. Se analizó el efecto de la
combinación de fl uphenazina / caspofungina sobre el estrés por calor (37 C o 40 C), el estrés oxidativo (menadiona 0,2 y 0,4 mM) y la
formación de biopelículas (catéter de poliuretano). AGalleria mellonella modelo que utiliza blastosporas (1% 109 ufc / mL) fue
desarrollado para evaluar el impacto de esta combinación en la supervivencia de las larvas.
Resultados: F659del se encontró en el FKS2 gen de ambas cepas resistentes. En estos aislados clínicos, la flufenazina
aumentó la susceptibilidad a la caspofungina y redujo su termotolerancia. Además, la combinación de fl uphenazine /
caspofungin perjudicó significativamente la formación de biopelículas en unin vitro modelo de catéter de poliuretano. Todas
estas características participaron en la creciente supervivencia de los infectados.G. mellonella después del tratamiento
combinado en comparación con caspofungina sola.
Conclusiones: En una estrategia de reutilización, nuestros hallazgos confirman que la calmodulina podría proporcionar un objetivo relevante en
enfermedades infecciosas fúngicas potencialmente mortales.
Introducción limitado ya que hay pocas clases de medicamentos antimicóticos y su uso
cada vez mayor en la profilaxis ha llevado a la selección de cepas resistentes,
lo que hace que el tratamiento sea un gran desafío.7
El estudio de las vías de señalización intracelular (ISP) como dianas
terapéuticas, combinado con el diseño químico de moléculas que funcionan
de forma autónoma o como adyuvantes de fármacos antifúngicos, constituye
una nueva vía en la búsqueda de alternativas terapéuticas.8 Algunos de los ISP
más estudiados son la cascada de la proteína quinasa C (PKC), la vía de
integridad celular activada por mitógenos (MAP), la respuesta de glicerol de
alta osmolaridad (HOG) y la vía de calmodulina / calcineurina (CaM / Cal), entre
otras.9-12 La vía CaM / Cal (Figura1), formado por un complejo de proteínas
Cnb1, Cna1, Hsp90 y el factor de transcripción Crz1 en la levadura está
involucrado en el calcio.
Las enfermedades fúngicas invasivas son cada vez más frecuentes y su incidencia es
alta debido al mayor número de pacientes inmunodeprimidos.1-3 Aunque el principal
agente etiológico sigue siendo Candida albicans, la prevalencia de no-albicans
especies (p. ej. Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida tropicalis y Candida
krusei) esta incrementando. C. glabrata es la segunda especie más comúnmente
aislada en América del Norte, la tercera en Europa y la cuarta en América Latina.1,2
Esta especie es comúnmente resistente al fl uconazol. En algunos países, las tasas
de resistencia a las equinocandina son muy bajas.3,4 Sin embargo, esta característica
está cambiando y la frecuencia de resistencia a las equinocandinas está
aumentando, lo que da como resultado aislamientos de MDR.1,5,6
Desafortunadamente, las opciones de tratamiento para las enfermedades fúngicas son
V
C El autor (es) 2020. Publicado por Oxford University Press en nombre de Para obtener
permisos, envíe un correo electrónico a: journals.permissions@oup.com.
la Sociedad Británica de Quimioterapia Antimicrobiana. Reservados todos los derechos.
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2. Ceballos-Garzón et al.
Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar el impacto de la
inhibición de CaM de caspofungina resistente C. glabrata por fl
uphenazine sobre susceptibilidad, formación de biofilm, termotolerancia
y patogenicidad enGalleriamellonella.
Calcio
Materiales y métodos
Fph Leva Cepas y drogas
Uno susceptible y dos resistentes a caspofungina C. glabrata Se estudiaron los
aislamientos. El primero,C. glabrata PUJ / HUSI 0916, se recuperó de un hemocultivo
de un receptor de TCMH ingresado en el Hospital Universitario San Ignacio, Bogotá,
Colombia. Los aislados resistentes a caspofungina, CAGL1875 y CAGL1256, se
obtuvieron de hemocultivos y urocultivos de pacientes hospitalizados en la UCI del
Centre Hospitalier Universitaire de Nantes, Francia. Las cepas se clasificaron como
susceptibles o resistentes a caspofungina según los puntos de corte interpretativos
de los criterios CLSI M60 2017 (0,5 mg / L: resistente). Además, la referenciaC.
glabrata ATCC
2001, C. parapsilosis ATCC 22019 y C. krusei Se utilizaron ATCC 6258 en algunos
experimentos. La caspofungina y la fl uphenazine se obtuvieron de Sigma-Aldrich.
Se prepararon reservas de fármacos en DMSO al 100% (Sigma-Aldrich) y se
almacenaron a # 20 C.
FK506
CsA
Cna1 Cnb1
Hsp90
pag RCN2
Crz1
YPS
FKS
Crz1 > 87 genes
CDRE
Identificación de levadura
C. glabrata las cepas fueron identificadas por MALDI-TOF MS19 y por amplificación y
secuenciación de las regiones de ADNr del espaciador transcrito interno (ITS)
después de la extracción de ADN. La amplificación del ADNr de ITS se logró
utilizando los cebadores universales ITS1 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG) e ITS4
(TCCTCCGCTTATTGATA TGC).20 Las secuencias de nucleótidos se ensamblaron
utilizando el software SeqScape (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE. UU.) Y se
compararon con la base de datos GenBank utilizando el algoritmo BLAST. Se utilizó
una similitud del 98% entre la secuencia desconocida y la secuencia coincidente más
cercana de la base de datos de referencia como criterio para identificar un aislado a
nivel de especie. Estudiar los mecanismos de resistencia implicados en los aislados
clínicos CAGL1875 y CAGL1256,FKS1 y FKS2 hotspot (HS) 1 y HS2 se analizaron
mediante secuenciación como se describió anteriormente.21 Las secuencias de
nucleótidos se compararon con la secuencia de referencia de un C. glabrata
cepa susceptible (acceso GenBank HM366440.1 y HM366442.1) usando SeqScape.
Figura 1. Vía CaM / Cal. EnC. glabrata, La activación del canal Cch1-Mid1 conduce a la
acumulación de Ca intracelular2 !, que está unido por CaM en sus cuatro dominios de
calcio (codificados por LEVA), que lleva a la activación de Cal. La chaperona
molecular Hsp90 interactúa físicamente con la subunidad catalítica de Cal, Cna1,
estabilizándola y manteniéndola preparada para la activación. Una vez activado, Cal
desfosforila el factor de transcripción Crz1 así como otros efectores desconocidos
para regular una miríada de respuestas celulares. Las flechas rojas representan
regulación positiva, las líneas T negras representan regulación negativa y los
inhibidores se representan como rectángulos verdes [tacrolimus (FK506-FKBP12),
ciclosporina A (CsA-ciclofilina A) y flufenazina (Fph-CaM)]. Esta figura aparece en
color en la versión en línea deJAC y en blanco y negro en la versión impresa de JAC.
homeostasis, biosíntesis de esfingolípidos y pared celular, tráfico de
proteínas, señalización de ubiquitina, autofagia, adaptación a los cambios
ambientales y, lo que es más importante, la respuesta a los antifúngicos.11,13-19
El inhibidor bien reconocido de la interacción CaM / Cal, tacrolimus (FK506), se
ha descrito como una posible herramienta para restaurar la susceptibilidad en
C. albicans aislamientos resistentes tanto a azoles como a decinocandinas, lo
que caracteriza a esta interacción proteína-proteína como un objetivo
potencial para el diseño de nuevos antifúngicos.15 En C. glabrata, La
resistencia a la equinocandina se asocia con mutaciones en FKS1 y su
parálogo FKS2, codificando el dimérico B-
1,3-glucano sintasa. La alteración del gen Cal revierte específicamente la
resistencia mediada por Fks2 de los aislados clínicos.dieciséis
La flufenazina pertenece a la familia de las fenotiazinas de fármacos
antipsicóticos utilizados para el tratamiento de las manifestaciones de
los trastornos psicóticos. Recientemente, se han estudiado fármacos
antipsicóticos con miras a reutilizarlos para quimioterapias
antimicrobianas.17 La flufenazina, siendo un CaMantagonist, se une a
CaM en un Ca2! -de manera dependiente y altera su capacidad para
activar el factor de transcripción Crz1p responsable de la activación de
los genes implicados en la vía de señalización que se une al elemento de
respuesta dependiente de Cal (CDRE).18
Prueba de susceptibilidad a los antifúngicos
La prueba de susceptibilidad antifúngica se llevó a cabo utilizando el método de
microdilución en caldo CLSI, siguiendo las pautas M27-A3 con ligeras modificaciones
para la combinación de caspofungina con el inhibidor de CaM fl uphenazina.22
Brevemente, las cepas se subcultivaron en agar peptona dextrosa de extracto de levadura
(YPD) y se cultivaron durante 24 ha 35 C. Las suspensiones de inóculo se prepararon en
medio líquido RPMI 1640 (Sigma-Aldrich) hasta una concentración final de
0,5% 103–2,5% 103 células / mL. Un 100lSe añadió un volumen de l de inóculo de levadura a
una placa de 96 pocillos que contenía diluciones seriadas al doble de caspofungina con o
sin flufenazina (15 mg / L). Las CIM se determinaron visualmente y por densitometría como
la concentración más baja de fármaco que causó una disminución del 50% (CMI-2) en
comparación con la del control de crecimiento libre de fármaco después de 48 h.
de incubación. El micrófono50 El valor de flufenazina (50 mg / L) fue determinado
previamente por CLSI. El control de calidad se aseguró probando el CLSI-
cepas recomendadas C. parapsilosis ATCC 22019 yC. krusei ATCC 6258.23
Ensayos fenotípicos relacionados con el estrés
Examinar el papel potencial de CaM / Cal en C. glabrata Se evaluó la protección
celular frente al calor y el estrés oxidativo, el impacto de la caspofungina, asociada o
no a la fl uphenazine. Para el estrés por choque térmico, las pruebas de caída se
realizaron detectando diluciones en serie deC. glabrata células (106 a 103 células /
ml) en placas de agar YPD con fl uphenazine (15 mg / L),
2 de 7
M
i
d
1
C
c
h
1
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3. Flufenazina contra resistentes Candida glabrata JAC
caspofungina (1 mg / L) o ambos compuestos. Las placas se incubaron a 37 C o 40 C
durante 24 h. Para el estrés oxidativo, se prepararon placas de YPD como se
describió previamente, excepto que el medio se complementó con la naftoquinona
menadiona (0,2 y 0,4 mM). Las placas se incubaron a 37 ° C durante 24 h.24
inoculación. Para comparar la mortalidad, se realizaron tres réplicas biológicas con
10 larvas por cada aislamiento evaluado.C. glabrata Las cepas se cultivaron en agar
dextrosa Sabouraud y se incubaron durante 48 ha 35 C. Suspensiones ajustadas al
1% 109 ufc / mL utilizando una cámara de Neubauer se utilizaron para inocular 10
larvas por Candida aislar. Las larvas recibieron 10lL de inóculo y 10lL de
caspofungina (100 mg / L), flufenazina (15 mg / L) o su combinación por inyección en
el último prolego izquierdo y derecho usando un
Jeringa de insulina de calibre 0,5 ml. Después de la inoculación, las larvas se colocaron en
placas de Petri y se incubaron en la oscuridad a 37 C; el número de larvas muertas se
registró diariamente. El análisis de supervivencia se realizó mediante el método de Kaplan-
Meier en la versión 5.0 del software PRISM.
Formación de biopelículas
Brevemente, el C. glabrata las cepas se cultivaron en medio Sabouraud (bioMérieux,
Francia) y se incubaron a 30 C durante 24 h. Doscientos microlitros deCandida
suspensiones celulares (106 células / ml) en RPMI-1640 con MOPS ajustado a pH 7 se
sembró en pocillos de microdilución de 96 pocillos con o sin piezas de catéter de
poliuretano GDHK-1325 Gam de 250 mm (Hechingen, Alemania) y se dejó adherir
durante 24 ha 37 C. Luego, las células adherentes se eliminaron lavando
suavemente dos veces con 300lL de PBS o transfiriendo piezas de catéter en nuevos
pocillos de microplacas. Se añadió caspofungina a 1 mg / L con y sin 15 mg / L del
inhibidor de CaM (fl uphenazine) durante 24 h de incubación a 37 C para la fase de
biopelícula de adhesión, luego se lavaron dos veces los pozos o piezas de catéter
con PBS y, finalmente, 100lL de RPMI-1640 más 10lL de 700lSe añadió M resazurina
(Sigma-Aldrich) a cada pocillo y se incubó a 37 C durante 4 h.25 Luego se midió la
fluorescencia a 560 nm con emisión a 590 nm. Los resultados se expresan en
unidades de fl uorescencia arbitrarias (AU). El análisis estadístico se realizó
utilizando el software PRISM versión 5.0.
Resultados
Aislamientos resistentes de C. glabrata albergaron la mutación FKS2
Identificación MALDI-TOF MS de los aislamientos CAGL1875 y CAGL1256
como C. glabrata fue con fi rmado por la secuencia ITS. Secuenciación de
las regiones HS1 y HS2 delFKS1 y FKS2 genes exhibieron una deleción
(F659del) en FKS2 HS1 que ya estaba implicado en la resistencia a las
equinocandina.27
La flufenazina aumentó la susceptibilidad de resistencia
C. glabrata a caspofungina
Modelo de invertebrado de G. mellonella La flufenazina usada sola no mostró ninguna disminución estadísticamente
significativa de C. glabrata el crecimiento y la adición de flufenazina a
caspofungina no modificó la susceptibilidad de ATCC 2001 o PUJ / HUSI 0916.
Por el contrario, utilizando aislados resistentes a caspofungina (CMI> 16 mg /
L) (CAGL1875 y CAGL1256), la fl uphenazina redujo los valores de
caspofungina MIC a 4 y 8 mg / L, respectivamente (Figura2).
Los ensayos de matanza se realizaron en G. mellonella como lo describe Fallon et al.26
Brevemente, las larvas se obtuvieron de una instalación de cría de Scientia
(CaliColombia); Se seleccionaron larvas de estadios tardíos (quinta y sexta) entre 250
y 330 mg y con una longitud aproximada de 2 cm. Se utilizó un grupo de 10 larvas
para cada uno de los controles: control absoluto, desinfección y
Concentración de caspofungina (mg / L)
0 dieciséis 8 4 2 1 0,5 0,25 0,12 0,06 0,03
ATCC 2001
Fph 15 mg / L
PUJ / HUSI 0916
Fph 15 mg / L
CAGL1875
Fph 15 mg / L
CAGL1256
Fph 15 mg / L
MIC
0 0,2 0.4 0,6 0,8 1
Figura 2. CIM de caspofungina (indicadas por estrellas) solo
crecimiento.
y en combinación con fl uphenazine (Fph). La barra de color verde indica pliegue relativo
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4. Ceballos-Garzón et al.
(a)
MEDICINA
YPD + MED Fph + MED CAS + MED
ATCC 2001
PUJ / HUSI 0916
CAGL1875
0,2 mM
CAGL1256
ATCC 2001
PUJ / HUSI 0916
CAGL1875
CAGL1256
0,4 mM
(B)
37°C 40°C
YPD Fph YPD Fph
ATCC 2001
PUJ / HUSI 0916
CAGL1875
CAGL1256
ATCC 2001
PUJ / HUSI 0916
CAGL1875
CAGL1256
CAS
CAS + Fph CAS + Fph
Figura 3. Respuestas al estrés. Las cepas se cultivaron en presencia de menadiona (MED) 0,2 o 0,4 mM, con o sin 1 mg / L de caspofungina (CAS) y
fueron sometidos a choque térmico a 37 C o 40 C. Fph, fl uphenazine.
La flufenazina redujo la termotolerancia de C.
glabrata resistente a caspofungina
Aumento de la combinación de flufenazina / caspofungina
Supervivencia de G. mellonella
El estrés oxidativo generado por la menadiona 0.4 mM mostró una reducción
significativa del crecimiento que no fue revertida ni por la flufenazina ni por la
caspofungina. La combinación no generó cambios significativos aparentes en
comparación con el control (Figura3a). Con respecto al estrés por calor, el
crecimiento a 37 ° C bajo fl uphenazine no se vio significativamente afectado
en comparación con el control YPD. En contraste, la asociación del inhibidor
de CaM con caspofungina comprometió seriamente el crecimiento de cepas
resistentes a caspofungina ya sea a la temperatura del cuerpo humano oa 40
° C (Figura3B).
C. glabrata cepas llevaron a una mortalidad completa 4-6 días después de la
infección en el G. mellonella modelo de infección. No se observó muerte de
larvas en las larvas de control inyectadas con un volumen equivalente de PBS
(Figura5). El tratamiento con caspofungina a 100 mg / L aumentó la tasa de
supervivencia de las larvas infectadas por cepas susceptibles, pero no mostró,
como se esperaba, ninguna modificación estadística para las cepas resistentes
a caspofungina. Sin embargo, en este último experimento, la adición de fl
uphenazine a caspofungin demostró ser eficaz para prolongar la
supervivencia (P <0,05) en comparación con caspofungina sola.
La combinación de flufenazina / caspofungina reduce la
capacidad de formación de biopelículas
Discusión
Dado que CaM regula las respuestas celulares adaptativas cruciales a las condiciones de
estrés, comprometer su función reduce la resistencia a las equinocandina de los aislados
clínicos.28 Debido al 92% de homología con la CaM humana, asumimos que su contraparte
fúngica es la proteína diana de la flufenazina, un fármaco antipsicótico que actúa como
inhibidor de la CaM.29 En una estrategia de reutilización, nuestros resultados establecen un
papel para la fl uphenazine en contrarrestar la resistencia a la equinocandina en la
levadura patógena.
C. glabrata. De hecho, en un modelo invertebrado de diseminación
C. glabrata infección, la combinación de caspofungina / fl uphenazine
Todos los aislamientos seleccionados tenían la capacidad de formar
biopelícula en pocillos de microplacas de poliestireno y en piezas de catéter de
poliuretano. Como se describió anteriormente, la caspofungina redujo el
desarrollo de biopelículas de cepas susceptibles, siendo la actividad más
potente en el modelo de catéter que en la técnica convencional (Figura4a y B).
Se destacó que la combinación de caspofungina / flufenazina redujo
significativamente la formación de biopelículas en comparación con la
caspofungina sola.
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5. Flufenazina contra resistentes Candida glabrata JAC
(a) Placas de 96 pocillos mejora la eficacia de la caspofungina sola, lo que permite un aumento
significativo de la supervivencia de las larvas. Este muy alentadoren vivo El
resultado fue apoyado por algunos de nuestros hallazgos que implican a CaM
como el mediador clave aguas arriba de Cal. Los datos anteriores han
evidenciado mediante un enfoque proteómico la regulación a la baja de
proteínas implicadas en la vía fúngica CaM / Cal y la evolución convergente del
papel de la vía Cal en la virulencia deC. glabrata.30 La activación de los
mecanismos de protección celular representa una importante estrategia de
supervivencia en la levadura.31 Además, la vía CaM / Cal se cruza con otras vías
de respuesta al estrés, como la vía PKC.32
Aquí, se estudió la inhibición de CaM usando fl uphenazine en dos condiciones
de estrés. Los resultados concuerdan con los de estudios anteriores, que
mostraron que la vía CaM / Cal está involucrada en la termotolerancia a las
levaduras.30 La importancia de Ca2! La homeostasis en el mantenimiento de la
integridad mitocondrial se describió previamente.33
Sin embargo, de acuerdo con nuestros resultados, la inhibición de CaM no
afecta el crecimiento en condiciones de estrés oxidativo como se describe
para C. glabrata por Juvvadi et al.34 y Ghoshet al.35
Formación de Candida Las biopelículas en superficies de dispositivos
médicos como catéteres son un elemento fundamental en la aparición y
persistencia de la candidiasis invasiva, caracterizándose esta condición
clínica por una alta mortalidad.36,37 La erradicación de la biopelícula como
estrategia terapéutica suele ser eficaz con fármacos equinocandina,
siempre que el aislado sea susceptible al fármaco.38 De hecho, las células
planctónicas resistentes a la caspofungina mantienen esta característica
en el estado biológico-comunitario, incluso en presencia de altas dosis
de caspofungina. Sin embargo, esta situación puede revertirse mediante
la adición de fl uphenazine, como se demuestra en elin vitro modelo con
piezas de catéter de poliuretano. En conclusión, nuestros hallazgos
40000
1256
1875
2001
0916
30000
*
20000
10000
0
(B) Catéter
40000
1256
1875
2001
0916
30000
20000
*
10000
0
Figura 4. Formación de biopelícula de C. glabrata aislamientos en microplaca pozos (a)
y en piezas de catéter (b), expuestas a fl uphenazine (Fph), caspofungin (CAS) y su
combinación. Los datos se expresan como AU. Un asterisco indica una diferencia
estadísticamente significativa entre el tratamiento y
el control correspondiente.
(a) 2001 (B) 916
100 100
2001
2001 + Fph
2001 + CAS
2001 + CAS + Fph
Control
0916
0916 + Fph
0916 + CAS
0916 + CAS + Fph
Control
80 80
60 60
40 40
20 20
0 0
0 2 4 6
Tiempo (días)
8 10 0 2 4
Tiempo (días)
6 8 10
(C) 1256 (D) 1875
100 100
1256
1256 + Fph
1256 + CAS
1256 + CAS + Fph
Control
1875
1875 + Fph
1875 + CAS
1275 + CAS + Fph
Control
80 80
60 60
40 40
20 20
0 0
0 2 4
Tiempo (días)
6 8 10 0 2 4
Tiempo (días)
6 8 10
Figura 5. Curvas de matar el tiempo de C. glabrata aislados susceptibles (ayb) y resistentes (cyd) expuestos a fl uphenazine (Fph), caspofungin (CAS) y su combinación. Los
datos se expresan como porcentajes de supervivencia.
5 de 7
C
o
n
t
r
o
l
C
A
S
F
p
h
C
o
n
t
r
o
l
C
A
S
+
F
p
h
C
A
S
F
p
h
C
A
S
+
F
p
h
Fluorescencia
(AU)
Fluorescencia
(AU)
Supervivencia
(%)
Supervivencia
(%)
Supervivencia
(%)
Supervivencia
(%)
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6. Ceballos-Garzón et al.
confirman que la vía CaM / Cal puede proporcionar un objetivo muy relevante
para las enfermedades infecciosas fúngicas que amenazan la vida. Sin
embargo, la utilidad de los inhibidores de Cal como el tacrolimus en la terapia
antifúngica se ha visto complicada por sus efectos inmunosupresores.39
De lo contrario, se demostró que in vitro La exposición a la fl uphenazine
induce transportadores de múltiples fármacos Cdr1 y Cdr2 en C. albicans,
lo que podría afectar negativamente la eficacia del fl uconazol.40 Por lo
tanto, el desafío para explotar con éxito esta estrategia radica en
desarrollar inhibidores más selectivos de estos dos objetivos fúngicos o
en centrarse en el factor de transcripción Crz1,41 que está presente en las
levaduras, pero no en los humanos.41 C. glabrata Crz1 está implicado en
la expresión del gen FKS2, que está involucrado en la resistencia a la
9 Shapiro RS, Robbins N, Cowen LE. Circuitos regulatorios que gobiernan el desarrollo de hongos, la
resistencia a los medicamentos y las enfermedades.Microbiol Mol Biol Rev 2011; 75:
213–67.
10 LaFayette SL, Collins C, Zaas AK et al. La señalización de PKC regula la resistencia
a los medicamentos del hongo patógeno Candida albicans a través de un circuito
compuesto de Mkc1, calcineurina y Hsp90. PLoS Pathog2010; 6: e1001069.
11 Munro CA, Selvaggini S, de Bruijn I et al. El PKC, HOG y Ca2! las vías de
señalización regulan coordinadamente la síntesis de quitina en Candida albicans.
Mol Microbiol2007; 63: 1399–413.
12 Reinoso-Mart´ı́n C, Schüller C, Schuetzer-Muehlbauer M et al. La vía de integridad celular
de la proteína quinasa C de levadura media la tolerancia al fármaco antifúngico
caspofungina a través de la activación de la señalización de la proteína quinasa activada
por mitógenos Slt2p. Célula eucariota 2003; 2: 1200–10.
equinocandinas.42
13 Chen YL, marca A, Morrison EL et al. La calcineurina controla la tolerancia al fármaco, el
crecimiento de hifas y la virulencia en Candida dubliniensis. Célula eucariota2011; 10:
803-19.
Agradecimientos 14 OnyewuC, Wormley FL, Perfect JRet al. El objetivo de calcineurina, Crz1, funciona en la
tolerancia a los azoles, pero no es necesario para la virulencia de Candida albicans. Infectar
inmunidad2004; 72: 7330–3.
Agradecemos a la Ciencia Colombiana, Tecnología e Innovación
Departamento (COLCIENCIAS) para el patrocinio de la formación de doctorados en
Colombia, en el marco del Programa Nacional de Promoción de la Formación en
Investigación (Convocatoria 757).
15 Juvvadi PR, Lee SC, Heitman J et al. Calcineurina en virulencia fúngica y resistencia
a fármacos: perspectivas para aprovechar la inhibición dirigida de calcineurina para
un enfoque terapéutico antifúngico. Virulencia 2017; 8:
186–97.
Fondos dieciséis Katiyar SK, Alastruey-IzquierdoA, Healey KR et al. Fks1 y Fks2 son funcionalmente
redundantes pero regulados diferencialmente en Candida glabrata: implicaciones para la
resistencia a las equinocandinas. Agentes antimicrobianos Chemother 2012; 56:
6304–9.
Este estudio contó con el apoyo financiero del Programa ECOSNord / COLCIENCIAS
C17S01 y una beca con ID 7710 de la vicerrectoría de investigación de la Ponti fi cia
Universidad Javeriana en Bogotá, Colombia.
17 Rajasekharan SK, Lee JH, Lee J. Aripiprazol reutilizado como inhibidor de la
formación de biopelículas y biosíntesis de esteroles en multirresistentes. Candida
albicans. Int J AntimicrobAgents2019; 54: 518–23.
Declaraciones de transparencia 18 Motohashi N, Kawase M, Saito S et al. Potencial antitumoral y posibles dianas de
compuestos relacionados con la fenotiazina. Objetivos de drogas Curr 2000; 1:
237–46.
PLP ha recibido subvenciones de Astellas, Basilea, MSD y P fi zer, y honorarios de
conferenciantes de Gilead, Basilea, P fi zer y MSD. Todos los demás autores:
ninguno para declarar. 19 Ceballos-Garzón A, Cortes G, Morio F et al. Comparación entre MALDITOF MS y
MicroScan en la identificación de levaduras emergentes y multirresistentes en un
hospital de cuarto nivel en Bogotá, Colombia. BMCMicrobiol 2019;
19: 106.
Referencias
20 Blanco TJ, Bruns T, Lee S et al. Amplificación y secuenciación directa de genes de
ARN ribosómico fúngico para filogenia. En: Innis MA, Gelfand DH, Sninsky SJet al.,
eds. Protocolos de PCR: una guía de métodos y aplicaciones. Prensa académica,
1990; 315-22.
1 Pfaller MA, Pappas PG, Wingard JR. Patógenos fúngicos invasores: tendencias
epidemiológicas actuales.Epidemiol Micosis invasivas 2006; 43: 3-14.
2 Nucci M, Queiroz-Telles F, Tobón AM et al. Epidemiología de las infecciones
fúngicas oportunistas en América Latina. Clin Infect Dis 2010; 51: 561–70.
21 Dudiuk C, Gamarra S, Leonardeli F et al. Conjunto de PCR clásicas para la detección de
mutaciones en Candida glabrata Genes FKS relacionados con la resistencia a
equinocandina. J ClinMicrobiol 2014; 52: 2609-14.
3 Arikan-Akdagli S, Gülmez D, Dogan Ö et al. Primer informe multicéntrico de tasas
de resistencia in vitro en cepas de candidemia en Turquía. Resistencia
antimicrobiana J Glob 2019; 18: 230–4.
22 CLSI. Método de referencia para las pruebas de susceptibilidad antifúngica de levaduras por
dilución en caldo — Tercera edición: M27. 2008.
4 Pfaller MA, Moet GJ, Messer SA et al. Las variaciones geográficas en la distribución de
especies y las tasas de resistencia a los antifúngicos azoles y equinocandina entre
Candidaaislados de infección del torrente sanguíneo: informe del Programa de Vigilancia
Antimicrobiana SENTRY (2008 a 2009). J ClinMicrobiol 2011; 49: 396–9.
23 CLSI. Método de referencia para las pruebas de susceptibilidad antifúngica de levaduras por
dilución en caldo — Cuarta edición: M27. 2012.
24 Gil-Bona A, Reales-Calderon JA, Parra-Giraldo CM et al. La proteína de la pared celular
Ecm33 de Candida albicans participa en la duración cronológica de la vida, la morfogénesis,
la regeneración de la pared celular, la tolerancia al estrés y la interacción célula huésped.
Microbiol delantero 2016; 7: 64.
5 Arendrup MC, Perlin DS. Resistencia a las equinocandinas: ¿un problema clínico
emergente?Curr Opin Infect Dis 2014; 27: 484–92.
6 Perlin DS. Resistencia a la equinocandina enCandida. Clin Infect Dis2015; 61
Supl. 6: S612–7.
25 Le Pape P, Pagniez F, Abdala-Valencia H. Un nuevo método fl uorométrico para
anti-Leishmania detección de drogas en amastigotes axénicos. Acta Parasitol 2003;
48: 301–5.
7 Marr KA, Seidel K, Slavin MA et al. La profilaxis prolongada con fl uconazol se asocia con
una protección persistente contra la muerte relacionada con la candidiasis en los
receptores de trasplantes alogénicos de médula ósea: seguimiento a largo plazo de un
ensayo aleatorizado controlado con placebo. Sangre2000; 96: 2055–61.
26 Fallon J, Kelly J, Kavanagh K. Galleria mellonella como modelo para las pruebas de
patogenicidad fúngica. En: Brand AC, MacCallum DM, eds.Interacciones huésped-
hongo: métodos y protocolos. Prensa de Humana, 2012; 469–85.
8 Parente-Rocha JA, Baila ~o AM, Amaral AC et al. Resistencia a los antifúngicos,
rutas metabólicas como dianas de fármacos y nuevos agentes antifúngicos: una descripción
general sobre los hongos dimórficos endémicos. Mediadores Inflamación 2017; 2017:
9870679.
27 Sasso M, Roger C, Lachaud L.Rápida aparición de mutaciones de FKS en
Candida glabrata se aísla en una candidiasis peritoneal. Representante de caso de Med Mycol
2017; dieciséis: 28-30.
6 de 7
Descargado
de
https://academic.oup.com/jac/advance-article-abstract/doi/10.1093/jac/dkz565/5721438
por
el
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de
Karolinska
Institutet
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02
de
marzo
de
2020

7. Flufenazina contra resistentes Candida glabrata JAC
28 Cruz MCC, Goldstein AL, Blankenship JR et al. La calcineurina es esencial para la
supervivencia durante el estrés de la membrana en Candida albicans. EMBO J2002; 21:
546–59.
36 Perlin DS, Rautemaa-Richardson R, Alastruey-Izquierdo A. El problema global de
la resistencia a los antifúngicos: prevalencia, mecanismos y manejo. Lancet Infect
Dis 2017; 17: e383–92.
29 LéJohn HB. Estructura y expresión del gen de la calmodulina fúngica.J Biol Chem
1989; 264: 19366–72.
37 Rajendran R, Sherry L, Nile CJ et al. La formación de biopelículas es un factor de riesgo
de mortalidad en pacientes con Candida albicans Infección del torrente sanguíneo: Escocia,
2012-2013. ClinMicrobiol Infect 2016; 22: 87–93.
30 Chen YL, Konieczka JH, Springer DJ et al. Evolución convergente de las funciones
de la vía de la calcineurina en la termotolerancia y la virulencia en Candida glabrata.
G3 (Bethesda)2012; 2: 675–91.
38 Wiederhold NP. Resistencia a los antifúngicos: tendencias actuales y estrategias futuras
para combatir.Infectar DrugResist 2017; 10: 249–59.
31 Longo VD, Fabrizio P. Regulación de la longevidad y la resistencia al estrés: ¿estrategia
molecular conservada de la levadura a los humanos? Cell Mol Life Sci 2002; 59:
903–8.
39 Reedy JL, Husain S, IsonMet al. La inmunoterapia con tacrolimus (FK506) no selecciona la
resistencia a los inhibidores de la calcineurina en Candida albicans aislamientos de
pacientes con trasplante de hígado. Agentes antimicrobianos Chemother 2006; 50:
1573–7.
32 Levin DE. Señalización de integridad de la pared celular enSaccharomyces cerevisiae.
Microbiol Mol Biol Rev2005; 69: 262–91. 40 Karababa M, Coste AT, Rognon B et al. Comparación de los perfiles de expresión génica de
Candida albicans cepas de laboratorio y cepas de laboratorio resistentes a los azoles expuestas a
fármacos que inducen transportadores de múltiples fármacos. Agentes antimicrobianos Chemother
2004; 48: 3064–79.
33 Choudhary R, Mishra KP, SubramanyamC. Interrelaciones entre estrés oxidativo
y calcineurina en la atenuación de la apoptosis cardíaca por eugenol.
Mol Cell Biochem2006; 283: 115-22.
34 Juvvadi PR, Lamoth F, Steinbach WJ. Calcineurina como regulador multifuncional:
desentrañar funciones novedosas en las respuestas al estrés fúngico, el crecimiento de
hifas, la resistencia a los fármacos y la patogénesis.Fungal Biol Rev 2014; 28: 56–69.
41 Karababa M, Valentino E, Pardini G et al. CRZ1,un objetivo de la vía de la
calcineurina enCandida albicans. Mol Microbiol2006; 59: 1429–51.
42 Singh-Babak SD, Babak T, Diezmann S et al. Análisis global de la evolución y
mecanismo de la resistencia a las equinocandina en Candida glabrata. PLoS Pathog
2012; 8: e1002718.
35 GhoshMC, Wang X, Li S et al. Regulación de la calcineurina por estrés oxidativo.
Metanfetamina enzimática 2003; 366: 289-304.
7 de 7
Descargado
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https://academic.oup.com/jac/advance-article-abstract/doi/10.1093/jac/dkz565/5721438
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02
de
marzo
de
2020