Universidad Pontificia Bolivariana. Seminario Biología molecular. Tercer semestre.

1. I R I S C A R O L I N A V A R G A S M O R E N O | T E R C E R S E M E S T R E
F A C U L TA D D E M E D I C I N A | U N I V E R S I D A D P O N T I F I C I A B O L I V A R I A N A

2. INTRODUCTION
A s p e r g i l l u s
f u m i g a t u s
A Z O L E S
N A T U R A L
E C O L O G I C A L
N I C H E I S T H E
S O I L
I S A
S A P R O P H Y T I C
F U N G U S
H E L P S
R E C Y C L I N G
E N V I R O N M E N T A L
C A R B O N A N D
N I T R O G E N
A N T I F U N G A L S
A G E N T S . T R E A T
F U N G A L
I N F E C T I O N S O F
T H E B O D Y A N D
S K I N
C L A S S I F I E D
I N
I M I D A Z O L E S
A N D
T R I A Z O L E S
I N H I B I T S T H E
S T E R O L 1 4 -
D E M E T H Y L A S E

3. VIRULENCE FACTORS
Are the different agents used by pathogens to
sneak diseases into the human system.
Enzymes: -Elastase-serin proteases
-Alkaline protease
-Acid protease
Toxins: -Endotoxin
-Aflatoxin
Morphological: forms Conidia
(hydrophobic).
Thermotolerance: growth as high as
55°C and survives up to 70°C.
RESISTANCE
Is the loss of susceptibility to an extent that
the drug is no longer effective for clinical use
against an organism.
AZOLES
Gene cyp51A /
erg11A
Encodes for
14-a sterol
demethylas
e
MUTATED

4. OBJECTIVE
• Investigate if ATM and ATR
homologs (named AtmA and
AtrA) are important for virulence
and the evolution of drug
resistance in A. fumigatus.

5. MÉTODOS
CEPAS: A.
fumigatus y S.
cerevisiae.
En medios y
condiciones
El estudio presenta
aval ético
Producir suficiente ADN
de la región blanco para
secuenciarse, visualizar
por electroforesis en gel o
clonarse por plásmidos.
PCR
Consiste en la
amplificación in
vitro de un
fragmento de
ADN específico

6. CUANTIFICACIÓN DNA
Si la muestra contiene
grandes cantidades de
impurezas, la estimación
se realiza por intensidad
de fluorescencia.
POR FLUORESCENCIA EXPOSICIÓN A UV
Se genera una distorsión
en la estructura de las
cadenas del DNA,
generando una mutación.
Sirve para
estimar la
concentración
de ácidos
nucleicos en una
preparación.
Para determinar la
viabilidad de las
células no
divididas.

7. PFGE
Sirve para conocer la
clonalidad de diferentes
aislados en situaciones
epidémicas con tiempo y
espacio definido
Permite la separación de
grandes fragmentos de DNA
mediante cambios periódicos
en el campo eléctrico
Mínima cantidad
de antimicrobiano
que es capaz de
impedir el
crecimiento de un
microorganismo
en condiciones
normalizadasInforma sobre
la sensibilidad
de la bacteria
S(sensible)
I(intermedia
R(resistente).
MIC

8. PCRQ
Ayuda a
detectar en
tiempo real la
amplificación
del genoma
de interés.
Se añade un
componente
fluorescente
que permite
medir la luz. A
más luz, más
cantidad del
ADN detectado.
División
celular,
produce dos
células hijas
genéticamente
idénticas entre
sí.
Para identificar
la respuesta en
los puntos de
control en la
replicación de
ADN
MITOSIS

9. RESULTADOS

13. DISCUSION
AUTHOR CONCEPT AGREE OR NO
Awasthi et al In mammalian cells, ATM and ATR play an
important role in telomere shortening and
stabilization.
Legrand et al The C. albicans mec1 (Mec1p is the
homologous of AtrA) mutant was also
shown to exhibit an increase in genome
instability in an assay for chromosome 1
integrity.
Wakabayashi et
al
Neurospora crassa atmAmus-21 and
atrAmus-9 are involved in the DNA
response, normal growth, maintenance of
chromosome integrity, and the regulation
different pathways; double conditional
mutants for these two genes indicate that
least one of the pathways must be
functional for survival
da Silva Ferreira
et al
In vitro evolution of itraconazole resistance
in A. fumigatus involves multiple
mechanisms of resistance, such as the
overexpression of drug efflux pumps

14. CONCLUSION
The lack of atmA and atrA did
not cause any significant
virulence reduction in A.
fumigatus.
AtmA and AtrA genes are
important for genetic stability
but individual mutations do
not affect the A. fumigatus
virulence in spite of discrete
chromosomal polymorphisms
in these mutants strains