1. ENSAYO EN TIRA INMUNOABSORBENTE HCV 3.0 RIBA* CHIRON* (SIA)
Ensayo en Tira Inmunoabsorbente para la detección de anticuerpos al virus de la
hepatitis C (anti-HCV) en suero o plasma humano.
NOMBRE Y USO PREVISTO
El test SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON* es un enzimoinmunoensayo cualitativo in vitro
para la detección de anticuerpos al virus de la hepatitis C (anti-HCV) en suero o plasma
humano. Está previsto utilizarlo como un test adicional más específico en las muestras
de suero o plasma humano que sean repedidamente reactivas con los procedimientos de
escrutinio anti-HCV del tipo del enzimoinmunoensayo absorbente (ELISA).
7.6 RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL TEST
El ensayo en Tira Inmunoabsorbente (SIA), descrito por Ebling y otros, ha demostrado
su utilidad para dilucidar la especificidad de la respuesta de anticurpos al virus de la
hepatitis C (HCV). La detección de anti-HCV mediante la metodología SIA se basa en
las técnicas de absorción Western y de puntos, en las que inmunogenes específicos (es
decir, poliproteínas antigénicas) codificadas por el genoma HCV son inmobilizados
sobre una membrana como soporte. La visualización de la reactividad anti-HCV en las
muestras a las proteínas HCV-codificadas individuales se logra utilizando conjugados
enzimáticos de IgG antihumana en conjunción con un substrato enzimático
colorimétrico.
El test SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON* es un enzimoinmunoensayo cualitativo in vitro
que utiliza antígenos HCV-codificados recombinantes y péptidos sintéticos HCV-
codificados como bandas individuales en las tiras del ensayo. Los dos antígenos
recombinantes (c33c y NS5) y dos los péptidos sintéticos (c100p y 5-1-1p) se derivan
de regiones putativas no estructurales del virus, mientras que el tercer péptido (c22p) se
corresponde con la proteína putativa de la nucleocápside (core) viral. Dado que los
antígenos recombinantes c33c y NS5 del HCV se producen como proteínas individuales
de fusión con superóxido dismutasa humana (SODh), también se ha incluido SODh
recombinante como banda de control en la tira. La banda de control SODh permite la
detección de anticuerpos contra SODh que no son específicos para las porciones HCV-
codificadas de los antígenos recombinantes del HCV. El antígeno c33c del HCV se
produce en bacterias (E. coli) genéticamente manipuladas, mientras que el antígeno NS5
y el SODh del HCV se producen en levadura (S. cerevisiae) manipulada genéticamente.
Se han publicado numerosos artículos que demuestran el valor de los primeros SIAs
para HCV RIBA* basados en antígenos recombinantes como ensayos suplementarios
para los procesos de escrutinio de antígenos anti-HCV simples y múltiples. No obstante,
hay una proporción de las muestras repetidamente reactivas por un proceso de escrutinio
anti-HCV multi-antígeno que son calificativos de indeterminadas por el SIA HCV 2.0

2. RIBA*CHIRON*. El SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON* puede proporcionar información
adicional sobre dichas muestras indeterminadas.
El test SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON*, cuando se utiliza en la forma indicada en el
prospecto, pueda detectar anticuerpos a HCV en el suero o plasma humano. Las bandas
individuales de antígeno HCV presentes en las tiras del test permiten que la
identificación de la reactividad anti-HCV se asocie con antígenos virales putativos
específicos.
7.7 PRINCIPIOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS DEL PROCEDIMIENTO
El SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON* es un test de tres etapas que utiliza antígenos HCV
recombinates y péptidos sintéticos inmobilizados como bandas individuales en las tiras
del test.
En la primera etapa, la muestra o el control del ensayo se diluye e incuba con la tira. Si
la muestra contiene anticuerpos específicos a HCV, éstos se fijarán a las
correspondientes bandas de antígeno y/o péptidos de la tira. Los componentes séricos o
plasmáticos no fijados se eliminarán por aspiración y lavado.
En la segunda etapa, la tira se incuba en presencia de un conjugado de IgG antihumana
de cabra marcada con peroxidasa. El conjugado se fija a la porción de IgG humana del
complejo antígeno-anticuerpo. La eliminación del conjugado no fijado se realiza por
decantación y los posteriores pasos de lavado.
En la tercera etapa, se añade un sistema colorimétrico de detección enzimática
compuesto por agua oxigenada y 4-cloro-1-naftol. Si la muestra contiene conjugado
fijado, la reacción enzimática originará un producto de reacción de color azul-negro
insoluble en cada banda específica de antígeno, péptido o control HCV. La reacción de
color implica la oxidación divalente inicial de la enzima peroxidasa por el agua
oxigenada. La posterior reducción de la peroxidasa a su estado inicial mediante dos
interacciones univalentes sucesivas con 4-cloro-1-naftol soluble resulta en el producto
de reacción de color azul-negro insoluble. Una vez desarrollado el color de la tira, la
reacción se detiene eliminando los reactantes por decantación y los pasos de lavado
final. Los patrones visuales de la banda que aparecen en cada tira individual son el
resultado de la fijación de anticuerpos específicos a cada uno de los antígenos y/o
péptidos recombinantes individuales en esa tira. La reactividad de las muestras hacia
cada banda de antígeno se determina comparando visualmente la intensidad de la banda
antigénica individual con la de las bandas de control interno con IgG humana alta y baja
absorbidas en cada tira.
7.8 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
La reactividad anti-HCV en una muestra se determina comparando la intensidad de cada
banda de antígeno con la intensidad de las bandas del control interno de IgG humana
(Nivel I, control bajo y Nivel II, control alto) de cada tira.
La interpretación NEGATIVA, INDETERMINADA o POSITIVA se basa en el patrón
de reacción presente en la tira.

3. 7.9 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Aunque actualmente se sabe que el virus de la hepatitis C (HCV) es el agente causal
primario de la hepatitis no-A no-B (NANBH) hemotransportada, puede haber causas de
NANBH debidas a patógenos distintos de HCV.
El SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON* se limita a la detección de anti-VHC en el suero o
plasma humano. La presencia de anti-HCV es indicativa de una infección pasada o
presente por el virus de la hepatitis C, pero no siempre constituye un diagnóstico
definitivo de una hepatitis no-A no-B (hepatitis C).
Puesto que una reactividad a cualquiera de los antígenos codificados por el virus en la
tira constituye una posible evidencia de infección pasada o presente con HCV, todos los
individuos que resulten ser INDETERMINADOS deberán someterse a seguimiento
durante por lo menos un período de 6 a 12 meses para comprobar si se ha producido un
aumento de reactividad. Se recomienda que los individuos que son
INDETERMINADOS se sometan a un nuevo test transcurridos seis meses utilizando la
muestra original además de una muestra de reciente extracción.
El hecho de que una muestra sea REACTIVA en un procedimiento de escrutinio anti-
HCV y que resulta ser negativa con SIA HCV 3.0 RIBA* CHIRON*, no excluye la
posibilidad de infección con HCV.
Durante las primeras fases de la infección, los niveles de anti-HCV pueden ser
indetectables.