La prueba de Coombs detecta anticuerpos o componentes del complemento unidos a los glóbulos rojos. Puede ser directa para detectar anticuerpos unidos in vivo, o indirecta para detectar anticuerpos en el suero que pueden unirse a los glóbulos rojos in vitro. El reactivo de Coombs contiene anticuerpos policlonales o monoclonales contra inmunoglobulinas o componentes del complemento. La prueba de Coombs es útil para diagnosticar anemias hemolíticas.

1.  1. Seminario de prueba de Coombs.
 1. Concepto de prueba de Antiglobulina.
 R//. Es un análisis de sangre que puede detectar la presencia de anticuerpos en el
suero que reaccionan con antígenos en la superficie de los GR.
 Coombs directo: detecta anticuerpos ya unidos a la superficie de los GR Coombs
indirecto: detecta anticuerpos libres que pueden reaccionar en vitro con los GR
 2. ¿Para qué se utilizó primeramente la prueba de Anti globulina y quienes la
describieron inicialmente?
 R//. En 1945, Coombs, Mourant y Race; describieron una prueba para detectar en
suero los anticuerpos
 3. Principio de la prueba.
 R//. Las moléculas de anticuerpos y los componentes del complemento son globulinas.
 Al inyectar a un animal globulina humana se estimula la producción de anticuerpos
frente a dicha proteína extraña.
 Además se usan varios reactivos incluyendo anti-IgG, anticuerpos contra el
componente C3d y reactivos poli específicos con anti-IgG y anti-C3d.
 La AGH reaccionara con moléculas de globulina humana tanto si están unidas a GR
como libres en el suero.
 Si los Gr no son previamente lavados para eliminar completamente las globulinas libres,
esta pueden neutralizar la AGH y causar falsos positivos. Los GR recubiertos con
globulina humana, una vez lavados, son aglutinados por la AGH.
 4. Fragmento de la molécula de AGH que reacciona con el fragmento Fc delas
moléculas de anticuerpo humano unida a cada una de las células separadas.
 R//. Este es el fragmento Fab.
 5. Obtención del reactivo de Coombs.
 R//. Se obtiene al inmunizar animales con globulinas del suero humano, estas pueden
ser inmunoglobulinas purificadas (IgG, IgM, IgA) y o fracciones de complemento (C3b,
C3d), produciéndose anti proteínas humanas en el suero animal, las que se purifican
tras absorción con eritrocitos humanos lavados que eliminan las aglutininas no
deseadas. Sueros antiglobulinicos se obtienen de forma policlonal y mediante la
tecnología de hibrido más, pueden ser mono o poli específicos.
 6. Tipos de reactivos, composición y características de cada SAG.
 R//.Reactivo Definición Poli específico Contiene anti-IgG y anti-C3d. puede contener
otros anticuerpos, anti-complemento y anti-inmunoglobulinas.Poliespecífico Contiene
anti-IgG humano de conejo yanti-C3b y C3d monoclonal del ratón. Anti-IgG Contiene

2. anti-IgG sin anti-complemento. Anti-IgG (cadenas pesadas) Contiene solo anticuerpos
que reaccionan con las cadenas gamma humanas.
Anti-C3d y anti C3b, anti C3d Contiene solo anticuerpos que reaccionan con uno o
varios componentes del complemento designado.
No tiene actividad anti-globulina.
Anti-C3d (monoclonal) y anti-C3b, anti-C3d (monoclonal) Contiene solo anticuerpos
reactivos contra el componente designado del complemento, sin actividad anti-inmunoglobulina.
 a) ¿Por qué el reactivo de AGH Poli específico debe contener anti-C3d?
Porque es muy importante en la prueba directa ya que se usa en la investigación de la
anemia hemolítica autoinmune debido a que el C3d puede ser la única globulina que
pueda detectarse sobre los eritrocitos en dicha enfermedad
b) ¿A qué se debe que en algunos casos se prefiera utilizar un reactivo anti-IgG, a
un reactivo AGH Poli específico?
 3. Debido a que no reacciona con el complemento unido a las células mediantes auto
anticuerpos fríos, que son clínicamente poco significativos
c) ¿Para qué se utilizan los reactivos AGH mono específicos?
Para determinar las proteínas responsables del resultado positivo en la prueba directa
de AGH con AGH poli específica.
7. Obtención de los reactivos AGH mono clonado por vía intraperitoneal a ratones un
hibrido más secretor de anti-C3b. se onales.
R//. Se prepara anti-C3d monoclonal del ratón inyecta recoge y procesa el líquido
ascítico para purificar el reactivo. El anti-C3b y anti-C3d monoclonal de ratón es
unamezcla de líquido ascítico extraído de ratones a los que se han inyectadohibridomas
secretores de anti-C3b y antiC3d.
8. Finalidad de estudio de la PAD.R//. Detectar los anticuerpos o componentes del
complemento fijados en vivo enlos hematíes de un paciente.
9. Uso y aplicaciones de la prueba de Coombs Directa.R//. Se puede aplicar el en el
estudio de EHRN y anemias hemolíticas; de tipoinmune, inducidas por fármacos o por
transfusiones sanguíneas, además en:mononucleosis infecciosa, sífilis, leucemia
linfocítica, Lupus eritotomatosa, etc.
10.Fuentes de error de la PAD: falsos positivos y falsos negativos.Fasos positivos
Falsos negativosContaminación bacteriana de lasmuestras o reactivos.Células viejas
no permiten una buenaactividad entre antígenos y anticuerpos.Exceso de
centrifugación. Contaminación de las células conproteínas.Reticulocitosis. Elución del
anticuerpo cuando elprocedimiento no es continuo
11.Significado de una PAD positiva.R//. Significa que ocurrió una reacción antígeno
anticuerpo in vivo, el pacientetiene fijados anticuerpos o complemento en los GR.
12.Finalidad de estudio de la PAI.R//. Se utiliza para comprobar in vitro el recubrimiento
de los hematíes conanticuerpos o complemento.
 4. 13.Uso y aplicaciones de la prueba de Coombs indirecta.R//. Prueba de
compatibilidad: detecta anticuerpos irregulares en el suero delreceptor que reaccionan

3. con GR del donante. Rastreo de anticuerpos. Prueba de identificación de
anticuerpos Detección de antígenos eritrocitarios.
 14.Fases de la PAI: explique en que consiste cada una de ellas.Fase Salina:Fase
albumina:Fase de Coombs:
 15.Elución: concepto, cuando se produce, que resultados se obtiene con esta yde qué
forma se puede evitar.R//. Es la causa error que se produce en la realización de la
prueba cuando nose lleva la secuencia correcta de la misma. Esta se evita realizando
de maneracontinua el procedimiento técnico.
 16.Fuentes de error de la PAI: falsos positivos y falsos negativos.Fasos positivos Falsos
negativosContaminación bacteriana de lasmuestras o reactivos.Contaminación del
reactivo con suerohumano.Exceso de centrifugación. Elución del anticuerpo cuando
elprocedimiento no es continuo.Escasa o falta de incubación en laetapa de
sensibilización.Lavado incorrecto e insuficiente de losGR.Suspensión de células muy
fuerte omuy débil.Uso de suero viejo o plasma.
 17.Significado de una PAI positivaR//. Indica que el paciente tiene anticuerpos
incompletos libres en el suero.
 5. 18.Diferencias entre la PAD y la PAI.
 R//. La diferencia radica en que el PAD detecta anticuerpos que fueron fijados invivo en
los eritrocitos del paciente mientras la PAI detecta los anticuerpos fijado sin vitro.
 19.Factores que afectan la sensibilidad de la prueba
 .R//. Temperatura: los GR y el suero se deben incubar a 37oCa)
 Diga a cuál de las dos afecta y explique brevemente cada uno Fuerza iónica:
 los GR pueden suspenderse en varios medios (sol Salina, Albumina, Reactivos de baja
fuerza iónica “LISS”).Proporción suero/hematíes: si se aumenta la proporción
suero/hematíes, aumenta la cantidad de anticuerpos que recubren las células. Se
aconseja una proporción de 2 gotas de suero por 1 gota de suspensión de 2-5% de GR
Tiempo de incubación: en las técnicas con sol. Salina o Albumina se debe incubar por
30 minutos para detectar la mayoría de anticuerpos.
 b) ¿Por qué no debe tapar el tubo con la punta del dedo para mezclar o resuspender
los eritrocitos? Porque pone en peligro la salud del técnico y además se pueden
introducir globulinas en la suspensión si las manos están contaminadas con suero o
sangre.
 c) ¿Por qué para realizar la prueba no debe utilizarse plasma?
 Por la presencia de proteínas en este derivado sanguino.

4.  20.¿Qué es el Control Coombs y para que se utiliza?
 R//. Son células sensibilizadas con anticuerpos anti-D de tipo IgG y se utiliza
paravalidar todas las pruebas negativas.
 21.¿Cuál es el papel del complemento en las reacciones de Antiglobulina?R//. Los
complemento pueden recubrir los hematíes, tanto in vivo como in vitromediante dos
mecanismos.Los anticuerpos fijadores del complemento unen a este a la superficie
celularcuando reaccionan con los antígenos de los GR.Los complejos inmunes
presentes en el plasma pueden activan a los componentesdel complemento que
pueden fijarse a los GR de forma no especifica.
 6. 22.Anticuerpos de grupos sanguíneos que fijan el complemento a la
membranaeritrocitaria. Haga una lista de anticuerpos y a la par escriba el nombre
delgrupo sanguíneo al cual pertenecen.R//.Sistema AnticuerpoABO Anti-A, anti-BMNNS
anti-S, anti-sP anti-P1, anti-Pk, anti-PKell anti-KDuffy anti-Fya, anti-FybKidd anti-Jka,
anti-JkbIi anti-I, anti-iLewis anti-Lea, anti-Leb