3. TRANSCRIPCIÓN
• El proceso de síntesis de ARN o transcripción, se efectúa haciendo
una copia complementaria de un segmento de ADN
• La RNA pol. Une ribonucleótidos de 5’ – 3’ para formar RNA.
• Necesita nucleósidos trifosfatados(ATP,CTP,GTP y UTP)
• Una plantilla, por lo que es dependiente del DNA
• La polimerasa se une a una secuencia llamada promotor que
normalmente está delante de la secuencia que especifica el RNA.
El primer nucleótido que está en el RNA (incluyendo en el promotor)
es el +1 y todas las bases se toman desde ese punto de referencia,
delante - y detrás +. El resto del promotor no se transcribe
10. EN EUCARIONTES SE ENCUENTRAN 3 TIPOS
DE
RNA POLIMERSAS I, II Y III
Las distintas RNA polimerasas de eucariotas
expresan distintos genes:
• I.- RNA precursor de los rRNAs (28s, 5,8s y 18s)
• II.- Genes que codifican para proteínas y 4
RNAs pequeños (snRNAs) implicados en
“splicing”
• III.- tRNA, rRNA5s y otros RNAs pequeños
(snRNAs)
11. Sububidades de las polimerasas eucariotas
• 2 subunidades grandes
similares a β y β’ de E.coli
• 2 subunidades similares a α y α’
de E.coli
• 5 subunidades comunes entre I,
II y III pero no homólogas a
E.coli
• Subunidades adicionales entre
I, II y III
12. SECUENCIAS QUE DETERMINAN LOS SITIOS
DE INICIO DE LA TRANSCRIPCION
1. TATA Box
2. Iniciador (Inr)
3. Secuencias ricas en GC
13. 1. TATA BOX
• Ubicada entre -25 y -35
• Mutaciones de sólo una base disminuyen
drásticamente la velocidad de la transcripción
• Cambios en la secuencia entre la caja TATA y la
posición +1 no afecta la expresión
LA CAJA TATA FUNCIONA CON EL PROMOTOR
COLOCANDO A LA POLIMERASA EN SU SITIO
CORRECTO PARA INICIAR LA TRANSCRIPCIÓN
14. 1. …
2. INICIADOR
• Secuencia poco conservada
• Puede sustituir la caja TATA
• Puede acompañar la caja TATA
(5’) Y-Y-A +1 – N- T/ A -Y- Y- Y (3’)
15. 1. …
2. …
3. SECUENCIAS RICAS EN GC
• Pueden acompañar a la caja TATA
• Aparecen en promotores sin caja TATA (pero son
débiles)
16. PROMOTOR
1. Secuencias que determinan el sitio de
inicio de la transcripción (regiones que
contiene la caja TATA y/o el iniciador
2. Conjunto de secuencias cercanas al sitio
de inicio de la transcripción que activan
el proceso de la expresión génica.
17. Factores y complejos de iniciación
• TIFs (Transcrip.Inic.factors)
• TAFs (Transc.Asoc.factors)
• TBP (TATA bind.prot.)
• Los TIFs se unen a al DNA
formando el complejo que
atrae a la RNA pol.
• Los genes que no poseen caja
TATA necesitan de estos
factores.
18. INICIO DE LA TRANSCRIPCIÓN
Factores generales
complejo de iniciación (FG+RNA pol.)
Características
RNA
Polimerasas
Genes
transcritos
Factores
generales
Elementos de
control
RNA pol. I rRNAs UAF, core factor
RNA pol. II mRNAs TFIIB,TFIIF,
TFIIE,TFIIA,
TFIIH (helicasa)
Caja TATA
RNA pol. III tRNA
rRNA 5s
TFIIB y TFIIC
TFIIA,TFIIB y C
Caja A,caja B
caja C
20. ELONGACIÓN DE UN mRNA
La molécula de ARN se transcribe por la ARN polimerasa
a partir de una sola de las dos hebras de la molécula de
ADN. Contrariamente a las ADN polimerasas, las ARN
polimerasas no tienen necesidad de un cebador para
iniciar ésta transcripción y son incapaces de identificar y
de eliminar un nucleótido mal aparejado dentro de una
cadena en síntesis.
21. CAP
• El primer nt. (guanina)
• Es modificado por metilación
de la mRNA guaniltransferasa
• m7Gppp o Cap
• Rol de protección anta la
degradación de nucleasas
• Rol de reconocimiento para la
traducción
22. Señales de poliadenilación
• En secuencias AATAAA (AAUAAA)
• Corte de una endonucleasa
• Una segunda enzima agrega una cola de A (15-20 nts.)
• Estabilidad al m RNA
26. Genes eucarióticos
Las secuencias que no codifican son
removidas entre las secuencias
codificadoras de los genes. Estas
secuencias se conocen como
intrones. Las secuencias
codificadoras se llaman exones.
La transcripción forma primero un
transcripto primario ó pré-ARN para
cada gen, aún para aquellos que no
son expresados de manera proteíca.
28. SPLICING
El empalme se lleva a cabo por 2 reacciones de trans-esterificación
1. El 2’ OH de una adenosina cerca del 3’de un intrón ataca el sitio
de empalme en 5’ liberando al exón como en un lazo.
2. El 3’OH del exón ataca el sitio de empalme, uniendo 2 exones y
liberando el intrón
29. Moléculas involucradas en el Splicing
• 5 moléculas de
sRNA
• U1,U2,U4,U5,U6
• Una docena de
proteínas
• U5 mantiene
exones alineados
• U6 catálisis
34. Los activadores o inhibidores a veces lejanos del
promotor, a veces cercanos e incluso en el mismo
transcrito, no son indispensables para la transcripción
sólo aceleran o retardan en un sentido de control.