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Ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica
para identificar bacterias cocos gram - positivos

Preparado por: Francheska Camilo González
Noviembre 10, 2013
ABSTRACT
Las bacterias patógenas como Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Streptococcus
pneumoniae pertenecen al grupo de las bacterias cocos gram - positivos, que causa la
enfermedad y la infección nosocomial que afecta cada vez más a los individuos sanos en la
comunidad. Esta situación ha provocado que las pruebas de laboratorio clínico y microbiológico
estén siendo utilizadas consecutivamente para encontrar tratamientos para cepas bacterianas
resistentes y para identificar las bacterias que causan una enfermedad específica y de esta manera
dar el antibiótico o el tratamiento adecuado. A través de este ejercicio de laboratorio se llevaron
a cabo la prueba de la catalasa, la tinción Gram, la hemólisis, y la prueba de susceptibilidad para
la bacitracina y optoquina en bacterias patógenas (Staphylococcus aureus, Streptococcus
pneumoniae y Streptococcus pyogenes). Se determinó que el Staphylococcus aureus es catalasa
positiva, Streptococcus pneumoniae es susceptible a la optoquina, y Streptococcus pyogenes es
susceptible a bacitracina. También se determinó que Staphylococcus aureus y Streptococcus
pyogenes son hemólisis beta, mientras que, Streptococcus pneumoniae es alfa hemolítico, y que
las tres bacterias son gram - positivos.

Keywords: Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes,
Laboratorio de Microbiología, pruebas de laboratorio, las bacterias cocos gram - positivos,
estafilococo.

i
CONTENIDO
ABSTRACT....................................................................................................................................................... i
LISTA DE ILUSTRATIONES ........................................................................................................................ iii
INTRODUCCION............................................................................................................................................. 1
Parte 1: ¿Que son las bacterias cocos Gram - positivos?.............................................................................. 2
STAPHYLOCOCCUS ........................................................................................................................................ 2
STAPHYLOCOCCUS AUREUS .......................................................................................................................... 3
Figure 1: Staphylococcus aureus ........................................................................................................... 4
Figure 2: Cutaneous abscess located on the back and caused by Methicillin-resistant Staphylococcus
aureus bacteria (MRSA). ....................................................................................................................... 5
STREPTOCOCCUS........................................................................................................................................... 6
Figure 3: Streptococcus pneumoniae ................................................................................................... 6
STREPTOCOCCUS PYOGENES ........................................................................................................................ 7
Figure 4: Pharyngitis by Streptococcus pyogenes................................................................................. 7
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE................................................................................................................... 8
Figure 5: Pneumoonia-infected right lung by Streptococcus pneumoniae .......................................... 8
Tabla 1: Enfermedades e infecciones por Staphylococcus aureus, Streptcoccus pyogenes, y
Streptococcus pneumoniae ................................................................................................................ 10
Parte 2: Ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica para identificar bacterias cocos gram-positivos
.................................................................................................................................................................... 12
Grupo de Laboratorio: Kelvin Garced

, José Noy

, Francheska Camilo

........ 12

BACKGROUND ............................................................................................................................................. 12
MATERIALES/METODOS

............................................................................................. 12

Figure 6: Hemolysis Beta (β) for the bacteria Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus in
blood agar plate (Laboratory exercise: plate 3) .................................................................................. 14
RESULTADOS ............................................................................................................................................... 15
Table 2: Results for the Medical Microbiology Laboratory's Exercise for identify bacteria coccus
gram positive....................................................................................................................................... 15
RECOMENDACIONES: .................................................................................................................................. 16
CONCLUSION............................................................................................................................................... 17
REFERENCIAS............................................................................................................................................... 19
ii
LISTA DE ILUSTRATIONES
Figure 1: Staphylococcus aureus ……. ………………. 4
Figure 2: Cutaneous abscess located on the back and caused by Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus bacteria (MRSA) …… 5
Figure 3: Streptococcus pneumoniae …… 8
Figure 4: Pharyngitis by Streptococcus pyogenes…… 9
Figure 5: Pneumoonia-infected right lung by Streptococcus pneumoniae…… 11
Figure 6:

Hemolysis Beta (β) for the bacteria Streptococcus pyogenes and Staphylococcus

aureus in blood agar plate (Laboratory exercise: plate 3) …… 15

iii
INTRODUCCION
La presencia de microorganismos tales como virus, hongos, parásitos, y bacterias patógenas
provoca que sea necesario el uso de técnicas microbiológicas para la identificación de estos
agentes infecciosos presentes en la orina, heces, sangre, esputo, y en otros fluidos corporales en
personas con sistemas inmunes comprometidos o enfermedades relacionada con estos
microorganismos. Los microbiólogos constantemente realizan pruebas inmunológicas y otros
experimentos químicos, genéticos, y microbiológicos, en donde se utilizan métodos y técnicas de
investigación para identificar microorganismos patógenos. El cultivo de esputo, coprocultivo,
cultivo de orina, sensibilidad de quemaduras y heridas, y cultivos de sangre, son algunos
ejemplos

de pruebas

microbiológicas.

Los

microbiólogos

también utilizan

pruebas

microbiológicas como la tinción Gram, prueba de catalasa, y prueba de sensibilidad para
optoquina o bacitracina, entre otros métodos experimentales de análisis para identificar una
bacteria en un grupo compuesto por diferentes especies, como ejemplo, nuestro ejercicio de
laboratorio, en donde hicimos una análisis utilizando estas pruebas experimentales para
identificar bacterias cocos gram - positivos (Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes
y Staphylococcus aureus), que causan enfermedades e infecciones graves

1
Parte 1: ¿Que son las bacterias cocos Gram
- positivos?
Los cocos gram - positivos son células bacterianas esféricas. Estas bacterias se caracterizan por
la reacción a la tinción Gram y por la ausencia de endoesporas

Dentro de este grupo de

bacterias se analizo la especie Staphylococcus aureus del genero Staphylococcus, y las especies:
Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes, del genero Streptococcus.

STAPHYLOCOCCUS
Los Staphylococcus, también conocidos como estafilococos, son un género de bacterias de
cocos gram - positivos, que se encuentran habitualmente en la flora normal de la piel y en
superficies mucosas. Este grupo de bacterias que puede ser clasificado como patógenos, ya que
pueden causar infecciones en la piel, tejidos blandos, huesos, y en el tracto genitourinario. Estas
células tienen un patrón similar a un racimo de uvas, pero en muestras a nivel clínico, estos
microorganismos pueden presentarse como células individuales, en pareja, o en cadenas cortas.
En su mayoría, estas bacterias son anaerobias facultativas (pueden crecer en ambientes aerobios
o anaerobios), y son capaces de crecer en concentraciones en medios con concentraciones
elevadas en sal, y en temperaturas de 18- 40°C

2
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Staphylococcus aureus es una bacteria Gram - positiva, catalasa – positiva, que está caracterizada
por la presencia de una capa gruesa de peptidoglucanos, y por la ausencia de una membrana
externa. Estas bacterias pueden encontrarse en la flora normal de la piel y en superficies
mucosas, y se transmite de persona a persona, o por contacto con superficies contaminadas. Estas
bacterias pueden subsistir en áreas secas por largos periodos de tiempo, y entre los factores de
virulencia de esta bacteria están los componentes estructurales (Capsula, Capa de polisacáridos
extracelulares, Peptidoglucanos, Acido teicoico, Proteína A), las toxinas (Citotoxinas, Toxinas
exfoliativas(ETA, ETB), Enterotoxinas, y la Toxina 1 del síndrome del shock tóxico), y las
enzimas (Coagulasa, Hialuronidasa, Fibrinolisina, Lipasas, y Nucleasas). Los factores de riesgo
son la presencia de cuerpos extraños (ej: prótesis, catéter), cirugías previas, y el uso de
antibióticos que inhiben la flora microbiana normal necesaria en el cuerpo humano.
Staphylococcus aureus resistente a la meticilina, (SARM, “MRSA” siglas en ingles), es una
bacteria que causa infecciones nosocomiales severas, e infecciones extra-hospitalarias en niños y
adultos previamente sanos
Los antibióticos que deben ser utilizados para Staphylococcus aureus son
 Oxacilina (u otras penicilinas resistentes a la penicilinasa)
 Vancomicina (para las cepas que muestran resistencia a oxacilina)
 Trimetoprim-sulfametoxazol, clindamicina, linezolida, daptomicina o quinupristinadalfopristina (Todos los antibióticos mencionados pueden ser utilizados como
antibióticos alternativos para el tratamiento de infecciones causadas por MRSA).
3
Figure 1: Staphylococcus aureus
Source: Samaritan Infectious Disease page.
<http://www.samaritanid.com/staphylococcus_aureus.html> Accessed: 11/8/13.

Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), es un problema de gran importancia a
nivel mundial, ya que esta se ha convertido en una de las causas de infección en la piel, y en
casos más recientes, es la causante de infecciones invasivas en niños y adultos sanos en la
comunidad

En la Publicación de Investigación, "Vancomycin versus linezolid in the

treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus meningitis in an experimental rabbit
model", se realizo una comparación de la eficacia antibacteriana de tratamientos como la
vancomicina y linezolid, en un modelo experimental de conejo (MRSA) meningitis. En este
estudio se indujo meningitis por inoculación intracisternal utilizando la cepa ATCC 43300.
Después de 16 horas de incubación y el desarrollo de la meningitis , el grupo de control no
recibió antibiótico , el grupo experimental “vancomicina” recibió ( vancomicina 20mg/kg ) cada
12 horas , el grupo experimental “linezolid 10” recibió ( linezolid 10mg/kg ) cada 12 horas y el e
grupo experimental “linezolid 20” recibió ( linezolid 20mg/kg ) cada 12 horas . Se procedió a
hacer recuento de bacterias del líquido cefalorraquídeo a 16 horas de incubación y 24 horas
después del tratamiento, y se encontró que a las 16 horas, el recuento de bacterias fue similar en
todos los grupos experimentales, pero al final del tratamiento (24 horas), en el grupo de
4
vancomicina se obtuvieron 2 registros más alto que en el grupo de linezolid 20 (p > 0,05), y 4
registros más altos que en el grupo linezolid 10 (p = 0,037). Obteniéndose que la respuesta
bacteriológica total o parcial fuese mayor en vacomicina vs “Linezolid – 10”, pero no cuando se
hizo la comparación de los resultados obtenidos por la vancomicina frente a “linezolid -20”. Por
lo tanto, por este estudio de investigación se sugiere que el tratamiento “linezolid” no es
estadísticamente inferior al tratamiento con la vancomicina, cuando estos fueron analizados en el
tratamiento (SARM) meningitis, utilizando un modelo experimental de conejo con una dosis de
linezolid 20 mg / kg, pero que el tratamiento era menor si se utilizaba una dosis de linezolid 10
mg / kg.

Figure 2: Cutaneous abscess located on the back and caused by
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus bacteria (MRSA).
Photo credit: Gregory Moran, M.D.
Source: Centers for Disease Control and Prevention page.

<http://www.cdc.gov/mrsa/community/photos/photo-mrsa-10.html>
Accessed: 11/8/13.

5
STREPTOCOCCUS
El género Streptococcus se compone de bacterias cocos gram - positivos, que se disponen en
pares o en cadenas. En su mayoría son bacterias anaerobias facultativas, no obstante, algunas
solo crecen en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono (

). Estas bacterias de

crecimiento capnofílico, requieren que para poder ser aisladas se utilice un medio enriquecido
con sangre o suero. Los Streptococcus pueden fermentar carbohidratos y mediante este proceso
generar ácido láctico. Las especies de estreptococos son catalasa-negativos, y estos destacan
como bacterias patógenas para los seres humanos. Las especies de este género se clasifican
mediante los siguientes tres sistemas: 1) las propiedades serológicas: grupos de Lancefield (A W); 2) patrones hemolíticos: hemólisis completa (beta [β]), hemólisis incompleta (alfa [α]) y
ausencia de hemólisis (gamma [γ]); y 3) las propiedades bioquímicas (fisiológicas)

Figure 3: Streptococcus pneumoniae
Source: International Society of Microbial Resistance page.

<http://www.microresistance.org/amdr.cfm?CEProgramID=95&HeaderCEPr
ogramContentID=85> Accessed: 11/8/13.

6
STREPTOCOCCUS PYOGENES
Streptococcus pyogenes es una especie del género Streptococcus. Estas son bacterias cocos gram
- positivos que se disponen en cadenas y tienen crecimiento rápido. En el interior de la pared
celular de esta bacteria se encuentra el antígeno del grupo A de Lancefield y la proteínas
proteína M, que está asociada a los estreptococos virulento. Streptococcus pyogenes se transmite
de persona a persona a través de gotitas respiratorias (faringitis) o a través de heridas en la piel
por contacto directo con una persona infectada, y esta bacteria se identifica porque es positiva
para PYR y porque es susceptible a la bacitracina, por lo cual el tratamiento general que se
utiliza para los pacientes con esta bacteria es la penicilina.
Las personas con mayor riesgo de desarrollar una enfermedad por Streptococcus pyogenes
son
 Niños de 5 a 15 años (faringitis)
 Niños entre 2-5 años con falta de higiene (pioderma)
 Pacientes con infección en tejidos blandos (síndrome de shock tóxico por estreptococos)
 Pacientes con antecedentes de faringitis (fiebre reumática, glomerulonefritis)

Figure 4: Pharyngitis by Streptococcus pyogenes
Source: Grupo de Infecciosas SoMaMFYC page.

<http://grupoinfeccsomamfyc.wordpress.com/category/microorganismos/bacterias/strept
ococcus-pyogenes> Accessed: 11/8/13.

7
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
Streptococcus pneumoniae es una especie del género Streptococcus que está formado por las
bacterias cocos gran-positivos, que tienen forma de " lanceta " y se disponen en pares
(diplococos), o en cadenas cortas. Estas bacterias tienen ácido teicoico rico en Polisacárido C
(fosfocolina) y una enzima autolítica en la pared
celular.

Los

virulencia

de

Streptococcus

pneumoniae se debe a que estas bacterias
pueden colonizar la orofaringe, extenderse a
tejidos estériles, incitar la respuesta inflamatoria
local

(ácido

teicoico,

fragmentos

de

peptidoglucano, neumolisina) y escapar de la
fagocitosis. Las infecciones por Streptococcus
pneumoniae se transmiten de persona a persona,
y son ocasionadas por la propagación endógena

Figure 5: Pneumoonia-infected
right lung by Streptococcus
pneumoniae
Source: University of Michigan page.
<http://sitemaker.umich.edu/mc2/pneumo
nia> Accessed: 11/10/13.

desde la nasofaringe a regiones distantes (ej:
pulmones, oídos, sangre, meninges y senos). La colonización es más alta en los niños pequeños,
y las enfermedades causadas por este microorganismo son más comunes en los meses fríos,
porque la gente se queda en casa y tienden a tener más contacto en espacios reducidos. Esta cepa
bacteriana puede ser identificada porque es en la actividad de catalasa esta es catalasa-negativa, y
por otras pruebas de laboratorio en las cuales se obtiene que es susceptible a la optoquina y
soluble en bilis. El tratamiento general es la penicilina y métodos inmunización (vacuna

8
conjugada de 7 serotipos para los niños de 2 años de edad, vacuna polisacárida de 23 serotipos
para adultos en riesgo de contraer enfermedades causadas por Streptococcus pneumoniae).

9
Tabla 1: Enfermedades e infecciones por Staphylococcus aureus, Streptcoccus
pyogenes, y Streptococcus pneumoniae

Enfermedad
Síndrome de la piel
escaldada

Enfermedades
Enfermedades causadas por Staphylococcus aureus
Descripción
Es una enfermedad mediada por toxinas en donde ocurre descamación diseminada del
epitelio en lactantes.

Shock toxico

Enfermedad medida por toxinas donde ocurre intoxicación multisistémica (síntomas:
presencia de fiebre, hipotensión y un exantema maculo-eritematoso)

Impétigo

Infección supurativa cutánea, caracterizada por la presencia de vesículas rellenas de pus
sobre una base eritematosa

Forúnculos

Infección supurativa en la cual se observan grandes nódulos cutáneos rellenos de pus

Carbuncos

Infección supurativa caracterizada por la unión de forúnculos, que se extienden hasta los
tejidos subcutáneos

Bacteriemia y
endocarditis

Infección supurativa caracterizada por la diseminación de bacterias hacia la sangre desde
un foco de infección, en donde la endocarditis causa daños al revestimiento endotelial
del corazón

Neumonía y
empiema

Infección supurativa en donde ocurre la formación de abscesos en los pulmones

Osteomielitis

Infección supurativa donde ocurre destrucción de huesos(mayormente en el área
metafisaria de los huesos largos)

Artritis séptica
Enfermedad

Infección supurativa en la cual se observa articulación eritematosa dolorosa con
presencia de acumulación de material purulento en el espacio articular
Enfermedades causadas por Streptococcus pyogenes
Descripción

Faringitis

Infección supurativa que provoca una faringe enrojecida con presencia de exudados

Celulitis

Infección supurativa cutánea que afecta a los tejidos subcutáneos
Infección supurativa profunda de la piel que provoca destrucción de capas musculares y
tejido adiposo

Fascitis necrosante
Síndrome del shock
tóxico
estreptocócico

Infección supurativa multiorgánica similar al síndrome del shock toxico estafilocócico, y
los pacientes presentan bacteriemia e indicios de fascitis

Fiebre reumática

Infección no supurativa que se caracteriza por alteraciones inflamatorias del corazón,
articulaciones desde artralgias hasta artritis, vasos sanguíneos y tejidos subcutáneos

Glomerulonefritis
aguda

Infección no supurativa en la cual ocurre inflamación aguda de los glomérulos renales
con edema, hematuria, hipertensión y proteinuria
10
Enfermedad
Neumonía

Enfermedades causadas por Streptococcus pneumoniae
Descripción
Enfermedad con un cuadro clínico inicial de escalofríos intensos y fiebre persistente, y
tos productiva que incluye esputo con sangre

Meningitis

Enfermedad o Infección grave que afecta a las meninges y cursa con cefalea, fiebre y
septicemia, y puede provocar deficiencias neurológicas para los sobrevivientes

Bacteriemia

Enfermedad que ocurre con mayor frecuencia en pacientes con meningitis que en
pacientes con neumonía, otitis media o sinusitis.

11
Parte 2: Ejercicio de Laboratorio de
Microbiología Médica para identificar
bacterias cocos gram-positivos
Grupo de Laboratorio: Kelvin Garced

, José Noy

Método y ejercicio de laboratorio: Livier González

, Francheska Camilo
, William Arias

Profesor de Microbiología Médica en la Universidad Interamericana de Puerto Rico.
Profesor de Microbiología en la Universidad Interamericana de Puerto Rico.
Estudiantes de la Universidad Interamericana de Puerto Rico.

BACKGROUND
El objetivo de este estudio fue identificar las bacterias cocos gram - positivos en pruebas de
laboratorio (tinción Gram, pruebas de catalasa, y la susceptibilidad a la bacitracina o optoquina).

MATERIALES/METODOS
Para el análisis se utilizó el procedimiento del Ejercicio práctico: Streptococcus, del Dr. Livier
González

Las bacterias utilizadas en el experimento fueron: Staphylococcus aureus,

Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae. Para el ejercicio de laboratorio, se
procedió a dividir cuatro placas de agar sangre en el centro (con un Sharpie), para preparar
cultivos individuales de las bacterias cocos gram-positivos. Para las placas (3A y 4A), llevamos a
12
cabo una simple estriado y en las placas de agar sangre (3B y 4B), hicimos un estriado
confluente, para realizar en estas la prueba de susceptibilidad a la bacitracina y optoquina. Las
placas de agar sangre se inocularon como sigue: Placa 3A (Streptococcus pyogenes y
Staphylococcus aureus), placa de 4A (Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus), la
placa 3B (Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus) y la placa 4B (Streptococcus
pneumoniae y Staphylococcus aureus).
Se procedió a añadir un disco de bacitracina para cada bacteria en la placa 3B, y un disco
optoquina a cada bacteria en la placa 4B. Después, se procedió a incubar las cuatro placas a 37 °
C utilizando un frasco de

por un periodo de 24 horas. Para este ejercicio de laboratorio,

también se llevó a cabo una prueba para determinar la producción de la enzima catalasa, en la
cual, procedimos a preparar tres laminillas de microscopio con una o dos gotas de 3 % de
peróxido y una colonia de una de las bacterias ( Staphylococcu aureus , Streptococcus pyogenes
y Streptococcus pneumoniae) para cada laminilla, y de esta forma observar y analizar la
producción de burbujas (

) . En el siguiente período de laboratorio (después de incubar las

placas de agar sangre durante un período de tiempo > 24 horas), se preparó la tinción Gram con
cada bacteria utilizando el procedimiento de Laboratorio N º 5: la tinción Gram, por el Dr.
William Arias

. Para hacer la tinción de Gram, el procedimiento fue llevado a cabo de la

siguiente manera para cada laminilla que contenía las bacterias a analizar : preparar frotis, secar
este a temperatura ambiente, fijar con calor, cubrir con el colorante cristal violeta durante 1
minuto, lavar con agua durante 30 segundo , cubrir con una solución de yodo (mordante) durante
1 minuto, lavar con agua durante 30 segundos , decolorar con alcohol ( etanol al 95 % ) durante
15-30 segundos, lavar con agua durante 30 segundos, teñir con safranina (contratinte) durante 1
13
minuto, lavar con agua durante 30 segundo, secar dichas laminillas con papel bibuloso (“blot
dry”), y observar en el microscopio utilizando el aceite de inmersión

Luego de completar

nuestra práctica de laboratorio, se procedió a recopilar y analizar los resultados para la prueba de
catalasa, tinción Gram, hemólisis y prueba de susceptibilidad utilizando bacitracina y optoquina.

Figure 6: Hemolysis Beta (β) for the bacteria Streptococcus
pyogenes and Staphylococcus aureus in blood agar plate
(Laboratory exercise: plate 3)
Photo credit: Kelvin Garced

–

, Jose Noy

–

Francheska Camilo

Source: Medical Microbiology Laboratory's Exercise for identify bacteria coccus
gram positive.

14
RESULTADOS
Para el ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica “ identificación de bacterias cocos
gram-positivos”, se realizó la prueba de catalasa, hemólisis, tinción Gram y la prueba de
susceptibilidad utilizando optoquina y bacitracina en muestras preparadas con bacterias de
Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyongenes. En la prueba de
catalasa, se encontró que la bacteria Staphylococcus aureus son catalasa - positivos, mientras que
Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes son catalasa - negativos. Para la prueba de
susceptibilidad a la bacitracina y optoquina, encontramos que Streptococcus pneumoniae es
susceptible a la optoquina y Streptococcus pyogenes es susceptible a bacitracina. También en
este ejercicio de laboratorio se obtuvo, que Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus son
hemólisis beta [β], mientras que Streptococcus pneumoniae es alfa hemolítico [α].
Table 2: Results for the Medical Microbiology Laboratory's Exercise for identify
bacteria coccus gram positive

Gram
staining

Hemolysis

Catalase test

Susceptibility
test to
bacitracin

Susceptibility
test Optochin

Staphylococcus
aureus

Gram
positive

Beta [β]

+

-

-

Streptococcus
pyogenes

Gram
positive

Beta [β]

-

+

-

Streptococcus
pneumoniae

Gram
positive

Alfa [α]

-

-

+

Bacteria

15
RECOMENDACIONES:
Se requieren el uso de distintas pruebas experimentales para identificar las bacterias que causan
una enfermedad o infección. El proceso de análisis microbiológico debe ser aséptico, utilizando
métodos adecuados que promuevan la protección de la piel, para evitar el contagio o transmisión
de enfermedades causadas por estas bacterias oportunistas. En el laboratorio, las pruebas deben
realizarse más de una vez para obtener resultados fiables.

16
CONCLUSION
Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae, son bacterias
cocos gram – positivos, que tienen una gran importancia para la industria clínica y
microbiológica, ya que estas bacterias se consideran patógenas y causan un gran número de
enfermedades e infecciones nosocomiales o en individuos sanos en la comunidad.
Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la flora de la piel y en la superficie de
las mucosas, y esta es una bacteria que muestra resistencia a la penicilina y puede causar
impétigo, y otras infecciones supurativas más graves, tales como bacteriemia, lo que provoca la
difusión de bacterias en la sangre, y endocarditis, la cual es una enfermedad que provoca daños a
el revestimiento endotelial del corazón. Streptococcus pyogenes es una bacteria importante en el
área de investigación , ya que se transmite fácilmente de persona a persona a través de gotitas
respiratorias o en las heridas de la piel por contacto con la persona infectada, y esta bacteria es la
causante de infecciones o enfermedades como la faringitis y la fiebre reumática. Streptococcus
pneumoniae, es una bacteria que causa neumonía, la cual es una enfermedad en donde el
paciente puede desarrollar una infección pulmonar. En este estudio microbiológico se realizó la
prueba de catalasa, hemólisis, tinción Gram y prueba de susceptibilidad a la bacitracina y
optoquina. Mediante estas pruebas de laboratorio se obtuvo que el Staphylococcus aureus es
catalasa positiva, Streptococcus pneumoniae es susceptible a la optoquina y Streptococcus
pyogenes es susceptible a bacitracina. Además, cuando se cultivaron estas bacterias en agar
sangre, se determinó que Streptococcus pneumoniae es alfa - hemolítico, mientras que
Streptococcys pyogenes y Staphylococcus aureus poseen una hemolisis completa (Hemolisis
Beta). Por lo tanto, al analizar los resultados, se determinó que es necesario realizar varias
17
pruebas para la identificación exacta de una bacteria causante de enfermedad o infección, y de
esta forma ser capaz de asignar un tratamiento eficaz. Se concluye, que tal como en obtuvimos
en nuestro ejercicio de laboratorio, es necesario utilizar distintos métodos experimentales, ya sea
para diferenciar distintos géneros (Staphylococcus y Streptococcus), o para identificar distintas
especies en un genero bacteriano (Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae), y pues
cada bacteria puede o no reaccionar igual a una misma prueba, lo que hace necesario realizar
varias para confirmar la presencia de una bacteria con exactitud.

18
REFERENCIAS
1. Murray, P. & Rosenthal, K. & Pfaller, M. (2009). Microbiología Medica.209223p.Staphylococcus y cocos grampositivos relacionados. ISBN 978-84-8086-465-7.
2. Murray, P. & Rosenthal, K. & Pfaller, M. (2009). Microbiología Medica.224242p.Streptococcus. ISBN 978-84-8086-465-7.
3. Facultas Ciencias de la Salud, Universidad del Cauca. Cocos Gram Positivos.
<www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Cocos_gram_positi
vos.pdf> Disponible: Noviembre 10, 2013
4. Gorwitz R, Jernigan D, Powers J, Jernigan J and Participants in the Centers for Disease
Control and Prevention-Convened Experts’ Meeting on Management of MRSA in the
Community. (2006). Strategies for Clinical Management of MRSA in the Community:
Summary of an Experts’ Meeting Convened by the Centers for Disease Control and
Prevention.
<http://www.colorado.gov/cs/Satellite?blobcol=urldata&blobheadername1=ContentDisposition&blobheadername2=ContentType&blobheadervalue1=inline%3B+filename%3D%22Clinical+Management+of+MRS
A+in+the+Community+(CDC+website).pdf%22&blobheadervalue2=application%2Fpdf
&blobkey=id&blobtable=MungoBlobs&blobwhere=1251811742663 >
Disponible: Noviembre 10, 2013
5. Calik S, Turhan T, Yurtseven T, Sipahi OR, Buke C. Vancomycin versus linezolid in the
treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus meningitis in an experimental
rabbit model. Med Sci Monit. 2012; 18(11): SC5–SC8.
19
6. Amador, C. Laboratorio No. 5: tinción Gram, del Dr. William Arias.
<http://www.studyblue.com/#file/view/4596192 > Disponible: Noviembre 10, 2013
7. NIH (National Institutes of Health). Neumonía.
<http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/pneumonia.html >
Disponible: Noviembre 10, 2013

20

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Cocos gram positivos by francheska camilo

  • 1. www.FrancheskaCamilo.com Ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica para identificar bacterias cocos gram - positivos Preparado por: Francheska Camilo González Noviembre 10, 2013
  • 2. ABSTRACT Las bacterias patógenas como Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae pertenecen al grupo de las bacterias cocos gram - positivos, que causa la enfermedad y la infección nosocomial que afecta cada vez más a los individuos sanos en la comunidad. Esta situación ha provocado que las pruebas de laboratorio clínico y microbiológico estén siendo utilizadas consecutivamente para encontrar tratamientos para cepas bacterianas resistentes y para identificar las bacterias que causan una enfermedad específica y de esta manera dar el antibiótico o el tratamiento adecuado. A través de este ejercicio de laboratorio se llevaron a cabo la prueba de la catalasa, la tinción Gram, la hemólisis, y la prueba de susceptibilidad para la bacitracina y optoquina en bacterias patógenas (Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes). Se determinó que el Staphylococcus aureus es catalasa positiva, Streptococcus pneumoniae es susceptible a la optoquina, y Streptococcus pyogenes es susceptible a bacitracina. También se determinó que Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes son hemólisis beta, mientras que, Streptococcus pneumoniae es alfa hemolítico, y que las tres bacterias son gram - positivos. Keywords: Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Laboratorio de Microbiología, pruebas de laboratorio, las bacterias cocos gram - positivos, estafilococo. i
  • 3. CONTENIDO ABSTRACT....................................................................................................................................................... i LISTA DE ILUSTRATIONES ........................................................................................................................ iii INTRODUCCION............................................................................................................................................. 1 Parte 1: ¿Que son las bacterias cocos Gram - positivos?.............................................................................. 2 STAPHYLOCOCCUS ........................................................................................................................................ 2 STAPHYLOCOCCUS AUREUS .......................................................................................................................... 3 Figure 1: Staphylococcus aureus ........................................................................................................... 4 Figure 2: Cutaneous abscess located on the back and caused by Methicillin-resistant Staphylococcus aureus bacteria (MRSA). ....................................................................................................................... 5 STREPTOCOCCUS........................................................................................................................................... 6 Figure 3: Streptococcus pneumoniae ................................................................................................... 6 STREPTOCOCCUS PYOGENES ........................................................................................................................ 7 Figure 4: Pharyngitis by Streptococcus pyogenes................................................................................. 7 STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE................................................................................................................... 8 Figure 5: Pneumoonia-infected right lung by Streptococcus pneumoniae .......................................... 8 Tabla 1: Enfermedades e infecciones por Staphylococcus aureus, Streptcoccus pyogenes, y Streptococcus pneumoniae ................................................................................................................ 10 Parte 2: Ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica para identificar bacterias cocos gram-positivos .................................................................................................................................................................... 12 Grupo de Laboratorio: Kelvin Garced , José Noy , Francheska Camilo ........ 12 BACKGROUND ............................................................................................................................................. 12 MATERIALES/METODOS ............................................................................................. 12 Figure 6: Hemolysis Beta (β) for the bacteria Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus in blood agar plate (Laboratory exercise: plate 3) .................................................................................. 14 RESULTADOS ............................................................................................................................................... 15 Table 2: Results for the Medical Microbiology Laboratory's Exercise for identify bacteria coccus gram positive....................................................................................................................................... 15 RECOMENDACIONES: .................................................................................................................................. 16 CONCLUSION............................................................................................................................................... 17 REFERENCIAS............................................................................................................................................... 19 ii
  • 4. LISTA DE ILUSTRATIONES Figure 1: Staphylococcus aureus ……. ………………. 4 Figure 2: Cutaneous abscess located on the back and caused by Methicillin-resistant Staphylococcus aureus bacteria (MRSA) …… 5 Figure 3: Streptococcus pneumoniae …… 8 Figure 4: Pharyngitis by Streptococcus pyogenes…… 9 Figure 5: Pneumoonia-infected right lung by Streptococcus pneumoniae…… 11 Figure 6: Hemolysis Beta (β) for the bacteria Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus in blood agar plate (Laboratory exercise: plate 3) …… 15 iii
  • 5. INTRODUCCION La presencia de microorganismos tales como virus, hongos, parásitos, y bacterias patógenas provoca que sea necesario el uso de técnicas microbiológicas para la identificación de estos agentes infecciosos presentes en la orina, heces, sangre, esputo, y en otros fluidos corporales en personas con sistemas inmunes comprometidos o enfermedades relacionada con estos microorganismos. Los microbiólogos constantemente realizan pruebas inmunológicas y otros experimentos químicos, genéticos, y microbiológicos, en donde se utilizan métodos y técnicas de investigación para identificar microorganismos patógenos. El cultivo de esputo, coprocultivo, cultivo de orina, sensibilidad de quemaduras y heridas, y cultivos de sangre, son algunos ejemplos de pruebas microbiológicas. Los microbiólogos también utilizan pruebas microbiológicas como la tinción Gram, prueba de catalasa, y prueba de sensibilidad para optoquina o bacitracina, entre otros métodos experimentales de análisis para identificar una bacteria en un grupo compuesto por diferentes especies, como ejemplo, nuestro ejercicio de laboratorio, en donde hicimos una análisis utilizando estas pruebas experimentales para identificar bacterias cocos gram - positivos (Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus), que causan enfermedades e infecciones graves 1
  • 6. Parte 1: ¿Que son las bacterias cocos Gram - positivos? Los cocos gram - positivos son células bacterianas esféricas. Estas bacterias se caracterizan por la reacción a la tinción Gram y por la ausencia de endoesporas Dentro de este grupo de bacterias se analizo la especie Staphylococcus aureus del genero Staphylococcus, y las especies: Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes, del genero Streptococcus. STAPHYLOCOCCUS Los Staphylococcus, también conocidos como estafilococos, son un género de bacterias de cocos gram - positivos, que se encuentran habitualmente en la flora normal de la piel y en superficies mucosas. Este grupo de bacterias que puede ser clasificado como patógenos, ya que pueden causar infecciones en la piel, tejidos blandos, huesos, y en el tracto genitourinario. Estas células tienen un patrón similar a un racimo de uvas, pero en muestras a nivel clínico, estos microorganismos pueden presentarse como células individuales, en pareja, o en cadenas cortas. En su mayoría, estas bacterias son anaerobias facultativas (pueden crecer en ambientes aerobios o anaerobios), y son capaces de crecer en concentraciones en medios con concentraciones elevadas en sal, y en temperaturas de 18- 40°C 2
  • 7. STAPHYLOCOCCUS AUREUS Staphylococcus aureus es una bacteria Gram - positiva, catalasa – positiva, que está caracterizada por la presencia de una capa gruesa de peptidoglucanos, y por la ausencia de una membrana externa. Estas bacterias pueden encontrarse en la flora normal de la piel y en superficies mucosas, y se transmite de persona a persona, o por contacto con superficies contaminadas. Estas bacterias pueden subsistir en áreas secas por largos periodos de tiempo, y entre los factores de virulencia de esta bacteria están los componentes estructurales (Capsula, Capa de polisacáridos extracelulares, Peptidoglucanos, Acido teicoico, Proteína A), las toxinas (Citotoxinas, Toxinas exfoliativas(ETA, ETB), Enterotoxinas, y la Toxina 1 del síndrome del shock tóxico), y las enzimas (Coagulasa, Hialuronidasa, Fibrinolisina, Lipasas, y Nucleasas). Los factores de riesgo son la presencia de cuerpos extraños (ej: prótesis, catéter), cirugías previas, y el uso de antibióticos que inhiben la flora microbiana normal necesaria en el cuerpo humano. Staphylococcus aureus resistente a la meticilina, (SARM, “MRSA” siglas en ingles), es una bacteria que causa infecciones nosocomiales severas, e infecciones extra-hospitalarias en niños y adultos previamente sanos Los antibióticos que deben ser utilizados para Staphylococcus aureus son  Oxacilina (u otras penicilinas resistentes a la penicilinasa)  Vancomicina (para las cepas que muestran resistencia a oxacilina)  Trimetoprim-sulfametoxazol, clindamicina, linezolida, daptomicina o quinupristinadalfopristina (Todos los antibióticos mencionados pueden ser utilizados como antibióticos alternativos para el tratamiento de infecciones causadas por MRSA). 3
  • 8. Figure 1: Staphylococcus aureus Source: Samaritan Infectious Disease page. <http://www.samaritanid.com/staphylococcus_aureus.html> Accessed: 11/8/13. Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), es un problema de gran importancia a nivel mundial, ya que esta se ha convertido en una de las causas de infección en la piel, y en casos más recientes, es la causante de infecciones invasivas en niños y adultos sanos en la comunidad En la Publicación de Investigación, "Vancomycin versus linezolid in the treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus meningitis in an experimental rabbit model", se realizo una comparación de la eficacia antibacteriana de tratamientos como la vancomicina y linezolid, en un modelo experimental de conejo (MRSA) meningitis. En este estudio se indujo meningitis por inoculación intracisternal utilizando la cepa ATCC 43300. Después de 16 horas de incubación y el desarrollo de la meningitis , el grupo de control no recibió antibiótico , el grupo experimental “vancomicina” recibió ( vancomicina 20mg/kg ) cada 12 horas , el grupo experimental “linezolid 10” recibió ( linezolid 10mg/kg ) cada 12 horas y el e grupo experimental “linezolid 20” recibió ( linezolid 20mg/kg ) cada 12 horas . Se procedió a hacer recuento de bacterias del líquido cefalorraquídeo a 16 horas de incubación y 24 horas después del tratamiento, y se encontró que a las 16 horas, el recuento de bacterias fue similar en todos los grupos experimentales, pero al final del tratamiento (24 horas), en el grupo de 4
  • 9. vancomicina se obtuvieron 2 registros más alto que en el grupo de linezolid 20 (p > 0,05), y 4 registros más altos que en el grupo linezolid 10 (p = 0,037). Obteniéndose que la respuesta bacteriológica total o parcial fuese mayor en vacomicina vs “Linezolid – 10”, pero no cuando se hizo la comparación de los resultados obtenidos por la vancomicina frente a “linezolid -20”. Por lo tanto, por este estudio de investigación se sugiere que el tratamiento “linezolid” no es estadísticamente inferior al tratamiento con la vancomicina, cuando estos fueron analizados en el tratamiento (SARM) meningitis, utilizando un modelo experimental de conejo con una dosis de linezolid 20 mg / kg, pero que el tratamiento era menor si se utilizaba una dosis de linezolid 10 mg / kg. Figure 2: Cutaneous abscess located on the back and caused by Methicillin-resistant Staphylococcus aureus bacteria (MRSA). Photo credit: Gregory Moran, M.D. Source: Centers for Disease Control and Prevention page. <http://www.cdc.gov/mrsa/community/photos/photo-mrsa-10.html> Accessed: 11/8/13. 5
  • 10. STREPTOCOCCUS El género Streptococcus se compone de bacterias cocos gram - positivos, que se disponen en pares o en cadenas. En su mayoría son bacterias anaerobias facultativas, no obstante, algunas solo crecen en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono ( ). Estas bacterias de crecimiento capnofílico, requieren que para poder ser aisladas se utilice un medio enriquecido con sangre o suero. Los Streptococcus pueden fermentar carbohidratos y mediante este proceso generar ácido láctico. Las especies de estreptococos son catalasa-negativos, y estos destacan como bacterias patógenas para los seres humanos. Las especies de este género se clasifican mediante los siguientes tres sistemas: 1) las propiedades serológicas: grupos de Lancefield (A W); 2) patrones hemolíticos: hemólisis completa (beta [β]), hemólisis incompleta (alfa [α]) y ausencia de hemólisis (gamma [γ]); y 3) las propiedades bioquímicas (fisiológicas) Figure 3: Streptococcus pneumoniae Source: International Society of Microbial Resistance page. <http://www.microresistance.org/amdr.cfm?CEProgramID=95&HeaderCEPr ogramContentID=85> Accessed: 11/8/13. 6
  • 11. STREPTOCOCCUS PYOGENES Streptococcus pyogenes es una especie del género Streptococcus. Estas son bacterias cocos gram - positivos que se disponen en cadenas y tienen crecimiento rápido. En el interior de la pared celular de esta bacteria se encuentra el antígeno del grupo A de Lancefield y la proteínas proteína M, que está asociada a los estreptococos virulento. Streptococcus pyogenes se transmite de persona a persona a través de gotitas respiratorias (faringitis) o a través de heridas en la piel por contacto directo con una persona infectada, y esta bacteria se identifica porque es positiva para PYR y porque es susceptible a la bacitracina, por lo cual el tratamiento general que se utiliza para los pacientes con esta bacteria es la penicilina. Las personas con mayor riesgo de desarrollar una enfermedad por Streptococcus pyogenes son  Niños de 5 a 15 años (faringitis)  Niños entre 2-5 años con falta de higiene (pioderma)  Pacientes con infección en tejidos blandos (síndrome de shock tóxico por estreptococos)  Pacientes con antecedentes de faringitis (fiebre reumática, glomerulonefritis) Figure 4: Pharyngitis by Streptococcus pyogenes Source: Grupo de Infecciosas SoMaMFYC page. <http://grupoinfeccsomamfyc.wordpress.com/category/microorganismos/bacterias/strept ococcus-pyogenes> Accessed: 11/8/13. 7
  • 12. STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Streptococcus pneumoniae es una especie del género Streptococcus que está formado por las bacterias cocos gran-positivos, que tienen forma de " lanceta " y se disponen en pares (diplococos), o en cadenas cortas. Estas bacterias tienen ácido teicoico rico en Polisacárido C (fosfocolina) y una enzima autolítica en la pared celular. Los virulencia de Streptococcus pneumoniae se debe a que estas bacterias pueden colonizar la orofaringe, extenderse a tejidos estériles, incitar la respuesta inflamatoria local (ácido teicoico, fragmentos de peptidoglucano, neumolisina) y escapar de la fagocitosis. Las infecciones por Streptococcus pneumoniae se transmiten de persona a persona, y son ocasionadas por la propagación endógena Figure 5: Pneumoonia-infected right lung by Streptococcus pneumoniae Source: University of Michigan page. <http://sitemaker.umich.edu/mc2/pneumo nia> Accessed: 11/10/13. desde la nasofaringe a regiones distantes (ej: pulmones, oídos, sangre, meninges y senos). La colonización es más alta en los niños pequeños, y las enfermedades causadas por este microorganismo son más comunes en los meses fríos, porque la gente se queda en casa y tienden a tener más contacto en espacios reducidos. Esta cepa bacteriana puede ser identificada porque es en la actividad de catalasa esta es catalasa-negativa, y por otras pruebas de laboratorio en las cuales se obtiene que es susceptible a la optoquina y soluble en bilis. El tratamiento general es la penicilina y métodos inmunización (vacuna 8
  • 13. conjugada de 7 serotipos para los niños de 2 años de edad, vacuna polisacárida de 23 serotipos para adultos en riesgo de contraer enfermedades causadas por Streptococcus pneumoniae). 9
  • 14. Tabla 1: Enfermedades e infecciones por Staphylococcus aureus, Streptcoccus pyogenes, y Streptococcus pneumoniae Enfermedad Síndrome de la piel escaldada Enfermedades Enfermedades causadas por Staphylococcus aureus Descripción Es una enfermedad mediada por toxinas en donde ocurre descamación diseminada del epitelio en lactantes. Shock toxico Enfermedad medida por toxinas donde ocurre intoxicación multisistémica (síntomas: presencia de fiebre, hipotensión y un exantema maculo-eritematoso) Impétigo Infección supurativa cutánea, caracterizada por la presencia de vesículas rellenas de pus sobre una base eritematosa Forúnculos Infección supurativa en la cual se observan grandes nódulos cutáneos rellenos de pus Carbuncos Infección supurativa caracterizada por la unión de forúnculos, que se extienden hasta los tejidos subcutáneos Bacteriemia y endocarditis Infección supurativa caracterizada por la diseminación de bacterias hacia la sangre desde un foco de infección, en donde la endocarditis causa daños al revestimiento endotelial del corazón Neumonía y empiema Infección supurativa en donde ocurre la formación de abscesos en los pulmones Osteomielitis Infección supurativa donde ocurre destrucción de huesos(mayormente en el área metafisaria de los huesos largos) Artritis séptica Enfermedad Infección supurativa en la cual se observa articulación eritematosa dolorosa con presencia de acumulación de material purulento en el espacio articular Enfermedades causadas por Streptococcus pyogenes Descripción Faringitis Infección supurativa que provoca una faringe enrojecida con presencia de exudados Celulitis Infección supurativa cutánea que afecta a los tejidos subcutáneos Infección supurativa profunda de la piel que provoca destrucción de capas musculares y tejido adiposo Fascitis necrosante Síndrome del shock tóxico estreptocócico Infección supurativa multiorgánica similar al síndrome del shock toxico estafilocócico, y los pacientes presentan bacteriemia e indicios de fascitis Fiebre reumática Infección no supurativa que se caracteriza por alteraciones inflamatorias del corazón, articulaciones desde artralgias hasta artritis, vasos sanguíneos y tejidos subcutáneos Glomerulonefritis aguda Infección no supurativa en la cual ocurre inflamación aguda de los glomérulos renales con edema, hematuria, hipertensión y proteinuria 10
  • 15. Enfermedad Neumonía Enfermedades causadas por Streptococcus pneumoniae Descripción Enfermedad con un cuadro clínico inicial de escalofríos intensos y fiebre persistente, y tos productiva que incluye esputo con sangre Meningitis Enfermedad o Infección grave que afecta a las meninges y cursa con cefalea, fiebre y septicemia, y puede provocar deficiencias neurológicas para los sobrevivientes Bacteriemia Enfermedad que ocurre con mayor frecuencia en pacientes con meningitis que en pacientes con neumonía, otitis media o sinusitis. 11
  • 16. Parte 2: Ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica para identificar bacterias cocos gram-positivos Grupo de Laboratorio: Kelvin Garced , José Noy Método y ejercicio de laboratorio: Livier González , Francheska Camilo , William Arias Profesor de Microbiología Médica en la Universidad Interamericana de Puerto Rico. Profesor de Microbiología en la Universidad Interamericana de Puerto Rico. Estudiantes de la Universidad Interamericana de Puerto Rico. BACKGROUND El objetivo de este estudio fue identificar las bacterias cocos gram - positivos en pruebas de laboratorio (tinción Gram, pruebas de catalasa, y la susceptibilidad a la bacitracina o optoquina). MATERIALES/METODOS Para el análisis se utilizó el procedimiento del Ejercicio práctico: Streptococcus, del Dr. Livier González Las bacterias utilizadas en el experimento fueron: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae. Para el ejercicio de laboratorio, se procedió a dividir cuatro placas de agar sangre en el centro (con un Sharpie), para preparar cultivos individuales de las bacterias cocos gram-positivos. Para las placas (3A y 4A), llevamos a 12
  • 17. cabo una simple estriado y en las placas de agar sangre (3B y 4B), hicimos un estriado confluente, para realizar en estas la prueba de susceptibilidad a la bacitracina y optoquina. Las placas de agar sangre se inocularon como sigue: Placa 3A (Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus), placa de 4A (Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus), la placa 3B (Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus) y la placa 4B (Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus). Se procedió a añadir un disco de bacitracina para cada bacteria en la placa 3B, y un disco optoquina a cada bacteria en la placa 4B. Después, se procedió a incubar las cuatro placas a 37 ° C utilizando un frasco de por un periodo de 24 horas. Para este ejercicio de laboratorio, también se llevó a cabo una prueba para determinar la producción de la enzima catalasa, en la cual, procedimos a preparar tres laminillas de microscopio con una o dos gotas de 3 % de peróxido y una colonia de una de las bacterias ( Staphylococcu aureus , Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae) para cada laminilla, y de esta forma observar y analizar la producción de burbujas ( ) . En el siguiente período de laboratorio (después de incubar las placas de agar sangre durante un período de tiempo > 24 horas), se preparó la tinción Gram con cada bacteria utilizando el procedimiento de Laboratorio N º 5: la tinción Gram, por el Dr. William Arias . Para hacer la tinción de Gram, el procedimiento fue llevado a cabo de la siguiente manera para cada laminilla que contenía las bacterias a analizar : preparar frotis, secar este a temperatura ambiente, fijar con calor, cubrir con el colorante cristal violeta durante 1 minuto, lavar con agua durante 30 segundo , cubrir con una solución de yodo (mordante) durante 1 minuto, lavar con agua durante 30 segundos , decolorar con alcohol ( etanol al 95 % ) durante 15-30 segundos, lavar con agua durante 30 segundos, teñir con safranina (contratinte) durante 1 13
  • 18. minuto, lavar con agua durante 30 segundo, secar dichas laminillas con papel bibuloso (“blot dry”), y observar en el microscopio utilizando el aceite de inmersión Luego de completar nuestra práctica de laboratorio, se procedió a recopilar y analizar los resultados para la prueba de catalasa, tinción Gram, hemólisis y prueba de susceptibilidad utilizando bacitracina y optoquina. Figure 6: Hemolysis Beta (β) for the bacteria Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus in blood agar plate (Laboratory exercise: plate 3) Photo credit: Kelvin Garced – , Jose Noy – Francheska Camilo Source: Medical Microbiology Laboratory's Exercise for identify bacteria coccus gram positive. 14
  • 19. RESULTADOS Para el ejercicio de Laboratorio de Microbiología Médica “ identificación de bacterias cocos gram-positivos”, se realizó la prueba de catalasa, hemólisis, tinción Gram y la prueba de susceptibilidad utilizando optoquina y bacitracina en muestras preparadas con bacterias de Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyongenes. En la prueba de catalasa, se encontró que la bacteria Staphylococcus aureus son catalasa - positivos, mientras que Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes son catalasa - negativos. Para la prueba de susceptibilidad a la bacitracina y optoquina, encontramos que Streptococcus pneumoniae es susceptible a la optoquina y Streptococcus pyogenes es susceptible a bacitracina. También en este ejercicio de laboratorio se obtuvo, que Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus son hemólisis beta [β], mientras que Streptococcus pneumoniae es alfa hemolítico [α]. Table 2: Results for the Medical Microbiology Laboratory's Exercise for identify bacteria coccus gram positive Gram staining Hemolysis Catalase test Susceptibility test to bacitracin Susceptibility test Optochin Staphylococcus aureus Gram positive Beta [β] + - - Streptococcus pyogenes Gram positive Beta [β] - + - Streptococcus pneumoniae Gram positive Alfa [α] - - + Bacteria 15
  • 20. RECOMENDACIONES: Se requieren el uso de distintas pruebas experimentales para identificar las bacterias que causan una enfermedad o infección. El proceso de análisis microbiológico debe ser aséptico, utilizando métodos adecuados que promuevan la protección de la piel, para evitar el contagio o transmisión de enfermedades causadas por estas bacterias oportunistas. En el laboratorio, las pruebas deben realizarse más de una vez para obtener resultados fiables. 16
  • 21. CONCLUSION Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae, son bacterias cocos gram – positivos, que tienen una gran importancia para la industria clínica y microbiológica, ya que estas bacterias se consideran patógenas y causan un gran número de enfermedades e infecciones nosocomiales o en individuos sanos en la comunidad. Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la flora de la piel y en la superficie de las mucosas, y esta es una bacteria que muestra resistencia a la penicilina y puede causar impétigo, y otras infecciones supurativas más graves, tales como bacteriemia, lo que provoca la difusión de bacterias en la sangre, y endocarditis, la cual es una enfermedad que provoca daños a el revestimiento endotelial del corazón. Streptococcus pyogenes es una bacteria importante en el área de investigación , ya que se transmite fácilmente de persona a persona a través de gotitas respiratorias o en las heridas de la piel por contacto con la persona infectada, y esta bacteria es la causante de infecciones o enfermedades como la faringitis y la fiebre reumática. Streptococcus pneumoniae, es una bacteria que causa neumonía, la cual es una enfermedad en donde el paciente puede desarrollar una infección pulmonar. En este estudio microbiológico se realizó la prueba de catalasa, hemólisis, tinción Gram y prueba de susceptibilidad a la bacitracina y optoquina. Mediante estas pruebas de laboratorio se obtuvo que el Staphylococcus aureus es catalasa positiva, Streptococcus pneumoniae es susceptible a la optoquina y Streptococcus pyogenes es susceptible a bacitracina. Además, cuando se cultivaron estas bacterias en agar sangre, se determinó que Streptococcus pneumoniae es alfa - hemolítico, mientras que Streptococcys pyogenes y Staphylococcus aureus poseen una hemolisis completa (Hemolisis Beta). Por lo tanto, al analizar los resultados, se determinó que es necesario realizar varias 17
  • 22. pruebas para la identificación exacta de una bacteria causante de enfermedad o infección, y de esta forma ser capaz de asignar un tratamiento eficaz. Se concluye, que tal como en obtuvimos en nuestro ejercicio de laboratorio, es necesario utilizar distintos métodos experimentales, ya sea para diferenciar distintos géneros (Staphylococcus y Streptococcus), o para identificar distintas especies en un genero bacteriano (Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae), y pues cada bacteria puede o no reaccionar igual a una misma prueba, lo que hace necesario realizar varias para confirmar la presencia de una bacteria con exactitud. 18
  • 23. REFERENCIAS 1. Murray, P. & Rosenthal, K. & Pfaller, M. (2009). Microbiología Medica.209223p.Staphylococcus y cocos grampositivos relacionados. ISBN 978-84-8086-465-7. 2. Murray, P. & Rosenthal, K. & Pfaller, M. (2009). Microbiología Medica.224242p.Streptococcus. ISBN 978-84-8086-465-7. 3. Facultas Ciencias de la Salud, Universidad del Cauca. Cocos Gram Positivos. <www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Cocos_gram_positi vos.pdf> Disponible: Noviembre 10, 2013 4. Gorwitz R, Jernigan D, Powers J, Jernigan J and Participants in the Centers for Disease Control and Prevention-Convened Experts’ Meeting on Management of MRSA in the Community. (2006). Strategies for Clinical Management of MRSA in the Community: Summary of an Experts’ Meeting Convened by the Centers for Disease Control and Prevention. <http://www.colorado.gov/cs/Satellite?blobcol=urldata&blobheadername1=ContentDisposition&blobheadername2=ContentType&blobheadervalue1=inline%3B+filename%3D%22Clinical+Management+of+MRS A+in+the+Community+(CDC+website).pdf%22&blobheadervalue2=application%2Fpdf &blobkey=id&blobtable=MungoBlobs&blobwhere=1251811742663 > Disponible: Noviembre 10, 2013 5. Calik S, Turhan T, Yurtseven T, Sipahi OR, Buke C. Vancomycin versus linezolid in the treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus meningitis in an experimental rabbit model. Med Sci Monit. 2012; 18(11): SC5–SC8. 19
  • 24. 6. Amador, C. Laboratorio No. 5: tinción Gram, del Dr. William Arias. <http://www.studyblue.com/#file/view/4596192 > Disponible: Noviembre 10, 2013 7. NIH (National Institutes of Health). Neumonía. <http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/pneumonia.html > Disponible: Noviembre 10, 2013 20