Cinética de crecimiento microbiano

1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y
CIENCIAS DEL MAR
FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO
Hoja 1 de 13
CÓDIGO
MATERIA
Microbiología FMAR03749
NOMBRE David Quiñonez Acosta
Julio Nivelo
PARALELO
1
TEMA DE LA PRÁCTICA
Cinética de crecimiento microbiano
OBJETIVOS GENERALES:
 Determinar el crecimiento microbiano mediante conteo de células y turbidimetría para obtener la
curva de crecimiento.
INTRODUCCIÓN:
Cinética de Crecimiento Microbiano
El crecimientomicrobianohace referenciaal aumentodel númerode microorganismosalo largodel tiempo
y no al aumento de tamaño de un microorganismo. El aumentodel número de microorganismos permite la
formación de colonias o de poblaciones. Es por eso que en microbiología el crecimiento se estudia por
poblaciones y no en microorganismos individuales. Las bacterias se reproducen generalmente por fisión
binaria.El resultadode lafisiónbinariasondoscélulashijasporcadacélulamadre,así,unacélulase divideen
dos, dos en cuatro y cuatro en ocho y así sucesivamente. (Magallanes, Castillo, & Rodríguez, 2010)
El intervalo de tiempo que transcurre para la formación de dos células a partir de la célula madre se llama
tiempode generacióno tiempogeneracional yal igual que la tasa de crecimientoocambioen el númerode
células por unidad de tiempo, varía en dependencia de las condiciones genéticas de las bacterias y de los
factores nutricionales. (Magallanes, Castillo, & Rodríguez, 2010)
La curva de crecimiento de la población tiene cuatro fases:
1) Fase lag o fase de latencia: esel periodode adaptaciónde losmicroorganismosaun nuevoambiente,en
este periodoelnúmerodecélulasnose incrementa,sinoquese mantieneconstanteporunlargoperíodoque
puede durar desde 1 hora hasta varios días. En esta fase las células presentan gran actividad metabólica. Al
final de la fase la mayoría de las células aumentan su tamaño. (Cruz, 2007)

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2) Fase log.ologarítmicao de crecimientoexponencial: duranteesteperiodolascélulasse empiezanadividir
enformaconstante,laactividadmetabólica:respiracióncelular,lasíntesisde proteínasesmáxima.El número
de célulasvivasenreproducciónesmuchomayorque lascélulasvivasde lapoblaciónque comienzanamorir.
El tiempo generacional es mínimo y constante. Las células muestran su morfología: color agrupación forma
entre otras. En el momentofinal de estafase y como resultadode la alta tasa de reproducción,comienzana
escasearlos nutrientesyel ambiente se tornatóxicopor el excesode productosde desecho.Es el momento
en el cual las células son más sensibles a los antimicrobianos o a las radiaciones que pueden intervenir
negativamente en su crecimiento. Esta fase se representa por una línea recta ascendente. (Cruz, 2007)
3) Fase estacionaria: en este periodo se genera un factor limitante del crecimiento, razón por la cual se
detiene elcrecimientodelosmicroorganismos,generandounatasareproductivaigual alatasade mortalidad.
Si la poblaciónnose reproduce ni muere,el númerode célulaspermanece constante yla longitudde la fase
varía y depende del balance que logrenlascélulasconel medioambiente.Esunperiodode equilibrio. (Cruz,
2007)
4) Fase de muerte, o de declive logarítmico: en esta fase las células no se reproducen, solo mueren y son
destruidasporlisisenformaexponencial acausa del incrementoenlascantidadesde ácidoyotros desechos
dañinos en el ambiente. (Cruz, 2007)
Fig1.- Cultivo monofásico

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Turbidimetría
En una suspensión microbiana, la cantidad de microorganismos está directamente relacionada con la
turbiedad o densidad óptica. La metodología es útil con suspensiones de densidad microbiana baja y con
cultivos en donde los microorganismos son unicelulares y con un tamaño de unos cuantos micrómetros,
características que lespermitenmantenerse suspendidosyhomogéneamente distribuidos;entantoque con
microorganismos de mayor tamaño y con aquellos productores de polisacáridos esta metodología no es
adecuada. (Cruz, 2007)
EQUIPOS Y MATERIALES:
Agua destilada
Tubos Eppendorf
Mechero
Pipeta
Probiótico
Cámara de Neubauer
Microscopio
Caldo de cultivo
PROCEDIMIENTO:
Procedimiento para preparar preparación de probiótico:
1.-Pesar 5gr de probiótico.
2.-Colocar los 5 gr de probiótico previamente pesados en 400 mL de caldo de cultivo Lb Broth.
3.-Homogenizar la dilución.
Procedimiento para Diluciones Seriadas:
1.-Colocar 900 micro-litros de agua destilada en 3 diferentes tubos de Eppendorf.
2.-Colocar 100 micro-litros de dilución en el primer tubo de Eppendorf.
3.-Homogenizar dicho tubo
4.-Colocar 100 micro-litros de muestra del tubo Eppendorf #1 al tubo de Eppendorf #2.
5.-Homogenizar el tubo de Eppendorf #2.
6.-Colocar 100 micro-litros de muestra del tubo Eppendorf #2 al tubo de Eppendorf #3.
7.-Homogenizar el tubo de Eppendorf #3.
Conteo Directo:
Por medio de la cámara de Neubauer
1.-Se cuentan los bacilos en los cuadrantes extremos; y en sus cuadrantes centrales se cuentan los cocos.
2.-Calcular el resultado promedio tanto de las celdas superior e inferiores para las tres.
3.-Anotar los resultados finales tanto para los cocos y bacilos.

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RESULTADOS:
Probiótico
1000 uL------ 1 ml probiótico
X -----------0.1ml Agua destilada
X= 100 uL probiótico, entonces, 900 uL agua destilada
Conteo de bacterias
Día 22/07/15 Hora=3:30
Muestra 10^-1
1.- Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 0 bacilos
3.-Cuadrante = 1 bacilo
1x 1x107
0.0625x 1
= 16x107 Ufc
4.-Cuadrante = 0 bacilos
Cuadrante central = 5 cocos
5x250.000= 1.25x106 ufc
Promedio Bacilos: 8x107 ufc
Promedio Cocos: 1.25x106ufc
Muestra 10^-2
1.- Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
3.-Cuadrante = 1 bacilo
1x 1x107
0.0625x 1
= 16x107 Ufc
4.-Cuadrante = 0 bacilos
Cuadrante central = 3 cocos
3x250.000= 0.75x106 ufc
Promedio Bacilos: 12x107 ufc
Promedio Cocos: 0.75x106ufc

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Hoja 5 de 13
Muestra 10^-3
1.- Cuadrante = 0 bacilos
2.-Cuadrante = 0 bacilos
3.-Cuadrante = 0 bacilos
4.-Cuadrante = 0 bacilos
Cuadrante central = 0 cocos
Promedio Bacilos: 0 ufc
Promedio Cocos: 0ufc
Día 23/07/15 Hora=9:30
Muestra 10^-1
1.- Cuadrante = 2 bacilos
2x1x107
0.0625x 2
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 0 bacilos
3.-Cuadrante = 2 bacilos
2x 1x107
0.0625x 1
= 32x107 Ufc
4.-Cuadrante = 0 bacilos
Cuadrante central = 1 cocos
1x250.000= 0.25x106 ufc
Promedio Bacilos: 12x107 ufc
Promedio Cocos: 0.25x106ufc
Muestra 10^-2
1.- Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
3.-Cuadrante = 0 bacilos

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Hoja 6 de 13
4.-Cuadrante = 3 bacilos
3x1x107
0.0625x 2
= 24x107 Ufc
Cuadrante central = 6 cocos
6x250.000= 1.5x106 ufc
Promedio Bacilos: 14x107 ufc
Promedio Cocos: 1.5x106ufc
Muestra 10^-3
1.- Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
3.-Cuadrante = 0 bacilos
4.-Cuadrante = 0 bacilos
Cuadrante central = 0 cocos
Promedio Bacilos: 8x107 ufc
Promedio Cocos: 0ufc
Día 23/07/15 Hora=10:45
Muestra 10^-1
1.- Cuadrante = 4 bacilos
4x1x107
0.0625x 4
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 1 bacilo
1x 1x107
0.0625x 1
= 16x107 Ufc
3.-Cuadrante = 2 bacilos
2x 1x107
0.0625x 1
= 32x107 Ufc
4.-Cuadrante = 5 bacilos
5x1x107
0.0625x 2
= 40x107 Ufc
Cuadrante central = 7 cocos

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Hoja 7 de 13
7x250.000= 1.75x106 ufc
Promedio Bacilos: 12x107 ufc
Promedio Cocos: 1.75x106ufc
Muestra 10^-2
1.- Cuadrante = 0 bacilos
2.-Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
3.-Cuadrante = 3 bacilos
3x1x107
0.0625x 1
= 48x107ufc
4.-Cuadrante = 3 bacilos
3x1x107
0.0625x 2
= 24x107 Ufc
Cuadrante central = 5 cocos
5x250.000= 1.25x106 ufc
Promedio Bacilos: 22x107 ufc
Promedio Cocos: 1.25x106ufc
Muestra 10^-3
1.- Cuadrante = 3 bacilos
3x1x107
0.0625x 3
= 16x107ufc
2.-Cuadrante = 1 bacilo
1x1x107
0.0625x 1
= 16x107ufc
3.-Cuadrante = 0 bacilos
4.-Cuadrante = 0 bacilos
Cuadrante central = 2 cocos
2x250.000= 0.5x106 ufc
Promedio Bacilos: 8x107 ufc
Promedio Cocos: 0.5x106 ufc
Tabla de resultados
Bacilos. (Expresado en [
𝑼𝑭𝑪
𝒎𝒍
])

8. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y
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Hoja 8 de 13
Hora/Diluciones 10^-1 10^-2 10^-3
Miercoles 15:30:00 8x10^7 12x10^7 0
Jueves 9:30:00 12x10^7 14x10^7 8x10^7
Jueves 10:45:00 14x10^7 12x10^7 8x10^7
Grafica1.- #bacilos vs Tiempo
10^-1
Miercoles 3:30 pm , 8
Jueves 9:30 am, 12
Jueves 10:45 am, 14
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
10^-1
10^-1

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Hoja 9 de 13
Grafica2.- #bacilos vs Tiempo
10^-2
Grafic3.- #bacilos vs Tiempo
10^-3
Tabla de resultados
Miercoles 3:30 pm ,
12
Jueves 9:30 am, 14
Jueves 10:45 am, 22
0
5
10
15
20
25
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
10^-2
10^-2
Miercoles 3:30 pm , 8
Jueves 9:30 am, 12
Jueves 10:45 am, 14
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
10^-3
10^-3

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Hoja 10 de 13
Cocos. (Expresado en [
𝑼𝑭𝑪
𝒎𝒍
])
Hora/Diluciones 10^-1 10^-2 10^-3
Miercoles 15:30:00 1.25x10^6 0.75x10^6 0
Jueves 9:30:00 0.25x10^6 1.5x10^6 0
Jueves 10:45:00 1.75x10^6 1.25x10^7 0.5x10^6
Grafic4.- #cocos vs Tiempo
10^-1
Miercoles 3:30 pm , 0 Jueves 9:30 am, 0 Jueves 10:45 am, 00
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
10^-1
10^-1

11. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y
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FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO
Hoja 11 de 13
Grafic5.- #cocos vs Tiempo
10^-2
Grafic6.- #cocos vs Tiempo
10^-3
Miercoles 3:30 pm , 0 Jueves 9:30 am, 0 Jueves 10:45 am, 00
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
10^-2
10^-2
Miercoles 3:30 pm , 0 Jueves 9:30 am, 0 Jueves 10:45 am, 00
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
10^-3
10^-3

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Hoja 12 de 13
Observaciones:
 Los tubos eppendorf tiene una capacidad máxima de 1.5 ml, tener en cuenta eso y no sobrepasar la
medida ya que se haría muy difícil la agitación.
 Tener en cuenta que el probiótico no es muy efectivo por lo cual la carga bacteriana no será tan
grande.
 Al momentode hacerel conteofijarse bienenlaplaca;losbacilossonalargadosy loscocos enforma
redondeada.
Conclusión:
 La grafica muestra las diferentes fases en que se encuentran los bacilos y cocos.
 Los bacilos se encuentran en una fase log.
 Lo cocos se encuentran en una fase estacionaria
Bibliografía
Cruz, D. V. (2007). CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO. Lima.
Kiara Matias, J. L. (21 de 06 de 2015). Andara tuberculosa. Andara tuberculosa. Guayaquil.
Magallanes, P., Castillo, M., & Rodríguez, S. (2010). Cinética microbiana de Lactobacilos Acidophillus en un
medio de avena malteada con y sin sacarosa. Mexico.
Q, D. (21 de 06 de 2015). http://www.micromadrid.org. Obtenido de http://www.micromadrid.org:
http://www.micromadrid.org/pdf/tomo1_tema25.pdf
Valera, D. F. (2015). http://egg.umh.es/. Obtenido de http://egg.umh.es/:
http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf
Anexo:
Fig2.- diferencia entre probióticos, el más turbio contiene más bacilos y cocos.

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Hoja 13 de 13
Fig3.-Camara de neubauer, conteo de cocos.
Fig4.-Camara de neubauer, conteo de bacilos.