Presentación sobre la participación de las especies reactivas del nitrógeno en el espermatozoide bovino criopreservado.

1. PRODUCCION DE ANION SUPEROXIDO Y
OXIDO NITRICO DURANTE LA
CAPACITACION CON HEPARINA EN
ESPERMATOZOIDES BOVINOS
CRIOPRESERVADOS.
Rodriguez PC1
, Valdez LB2
, Zaobornyj T2
, Boveris A2
, Beconi MT1
1. Area de Química Biológica, INITRA, Facultad de Ciencias Veterinarias, U.B.A.
2. Area de Físico-Química, PRALIB, Facultad de Farmacia y Bioquímica, U.B.A.
X Jornadas Anuales
de la Sociedad
Argentina de Biología
3-Dic
2008

2. O2
-
H2O2
OONO-
FIV
REACCION
ACROSOMAL
MADURACION
DE OVOCITOS
IN VITRO
CAPACITACION
NO
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HEPARINA

3. X Jornadas Anuales
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OBJETIVO: estudiar la
producción de Anión
Superóxido (O2
-
) y Oxido
Nítrico (NO) durante la
Capacitación inducida con
Heparina en espermatozoides
bovinos criopreservados.

4. Diseño:
 Grupo CONTROL (sin heparina)
 HEPARINA (10 UI/ml)
 HEPARINA
(10 UI/ml)
 L-NAME (500 uM)
(inhibidor de NOS)
 DPI (2 uM)
(inhibidor de NADPH
oxidasa)
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5. Determinamos (a distintos tiempos):
 CAPACITACION
 CONSUMO DE OXIGENO
 PRODUCCION DE OXIDO NITRICO
 PRODUCCION DE ANION SUPEROXIDO
MOTILIDAD PROGRESIVA Y
VIABILIDAD ESPERMATICA
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6. 0
10
20
30
40
50
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Tiempo
Capacitación(%)
HEPARINA CONTROL
 En presencia de Heparina, la
Capacitación aumenta durante
los primeros 20 minutos,
alcanzando un plateau.
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2008
0
10
20
30
40
50
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Tiempo
Capacitación(%)
HEPARINA CONTROL
0
10
20
30
40
50
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Tiempo
Capacitación(%)
HEPARINA L-NAME CONTROL
 En presencia de Heparina, la
Capacitación aumenta durante
los primeros 20 minutos,
alcanzando un plateau.
 L-NAME disminuye la
capacitación confirmando la
participación de la enzima
NOS.
0
10
20
30
40
50
Hep L-NAME Control
Capacitation(%)
*

7.  Los espermatozoides del
grupo control (sin
heparina) no producen
óxido nítrico (NO).
 Los espermatozoides
incubados con heparina
producen NO durante la
capacitación.
 La producción de NO es
inhibida por L-NAME
(inhibidor de la NOS).
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8. 0
5
10
15
20
0 15 30 45
Tiempo (min)
ConsumodeOxígeno
(nmoles/min/108
esp)
Control Heparina
 El Consumo de Oxígeno
aumenta durante los
primeros 15 minutos,
alcanzando un plateau.
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3-Dic
2008
0
5
10
15
20
0 15 30 45
Tiempo (min)
ConsumodeOxígeno
(nmoles/min/108
esp)
Control Heparina
0
5
10
15
20
0 15 30 45
Tiempo (min)
ConsumodeOxígeno
(nmoles/min/108
esp)
Control Heparina Hep + L-NAME
0
5
10
15
20
15 30 45
Tiempo (min)
ConsumodeOxígeno
(nmoles/min/108
esp)
Control Heparina Heparina + L-NAME
*
*
*
*
**
 El Consumo de Oxígeno
aumenta durante los
primeros 15 minutos,
alcanzando un plateau.
 L-NAME no afecta el
Consumo de Oxígeno a
ninguno de los tiempos
evaluados.
 El Consumo de Oxígeno
aumenta durante los
primeros 15 minutos,
alcanzando un plateau.
 El Consumo de Oxígeno
aumenta durante los
primeros 15 minutos,
alcanzando un plateau.

9.  Los espermatozoides incubados con heparina producen
anión superóxido (O2
-
) durante la capacitación.
 Los espermatozoides del grupo control (sin heparina)
no producen O2
-
.
 La producción de O2
-
no es afectada por L-NAME.
 La producción de O2
-
es inhibida por DPI.
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Tiempo (min)
0 10 20 30 40
Producción de O2
-
(nmoles/min/107
esp) a
15 minutos
Control 0,226 ± 0,088 *
Heparina 1,173 ± 0,097 **
Heparina + L-NAME
(500μM) 1,031 ± 0,120 **
Heparina + DPI (2μM) 0,225 ± 0,026 *
Hep

10. X Jornadas Anuales
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Estos resultados indican que el
Anión Superóxido (O2
-
) y el
Oxido Nítrico (NO) son
producidos durante la
Capacitación inducida con
Heparina en espermatozoides
bovinos criopreservados.

11. Muchas gracias por su atención!
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Rodriguez PC1
, Valdez LB2
, Zaobornyj T2
, Boveris A2
, Beconi MT1
1. Area de Química Biológica, INITRA, Facultad de Ciencias Veterinarias, U.B.A.
2. Area de Físico-Química, PRALIB, Facultad de Farmacia y Bioquímica, U.B.A.
E-mail: prodriguez@fvet.uba.ar