ELISA es una técnica de inmunoensayo que utiliza anticuerpos o antígenos inmovilizados y enzimas unidas para detectar sustancias como anticuerpos o antígenos. Proporciona resultados cuantitativos rápidos y objetivos sobre el estado inmune o diagnóstico de una enfermedad. Existen varios tipos de ELISA que se utilizan comúnmente para detectar una variedad de patógenos y condiciones médicas.
2. Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno o anticuerpo
inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima
que reaccionando con un conjugado, es capaz de generar un producto
detectable, como cambio de color o algún otro tipo.
ELISA es generalmente una medición objetiva que proporciona resultados
numéricos que proporcionan información de diagnóstico y estado
inmune medida (por ejemplo, la detección de anticuerpos IgM total o
IgG).
El método ELISA utiliza las propiedades catalíticas de enzimas para
detectar y cuantificar reacciones inmunológicas. Se utiliza un anticuerpo
marcado con una enzima o conjugado antígeno marcado con enzima. La
enzima, con su sustrato, detecta la presencia y la cantidad de antígeno o
anticuerpo en una muestra del paciente. Los resultados de una prueba
típica se calculan comparando la lectura espectrofotométrica de suero del
paciente al de un control o suero de referencia.
ELISA
3. Este método utiliza una etiqueta no isotópico que ofrece la
ventaja de seguridad.
Prueba de enzimas es que los resultados no son
dependientes de un técnico de
interpretaciones.
El procedimiento es más rápido
Requiere menos trabajo de laboratorio que los métodos
comparables.
Pueden detectar sustancias en orden de nanogramos y
picogramos por decilitro.
Ventajas
4. Marcadores enzimáticos más comunes son: la
peroxidasa de rábano picante, la fosfatasa alcalina, la
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa,
y beta-galactosidasa.
Una enzima de ELISA debe cumplir los siguientes
criterios:
• Alto grado de estabilidad
• Extrema especificidad
• Ausencia de antígeno o anticuerpo
• Ninguna alteración por el inhibidor en el sistema
5. Es un ELISA heterogéneo no competitivo que está diseñado
para detectar un tipo específico de anticuerpo, tal como IgM o
IgG, IgM CMV, la rubéola IgM, o Toxoplasma IgM.
Esta técnica es ampliamente utilizada para cuantificar IgM, para
evitar la acción del factor reumatoide. El factor reumatoide es
un autoanticuerpo generalmente IgM específica para IgG. Este
factor es elevado en algunas situaciones, particularmente en las
enfermedades reumáticas. Este anticuerpo se puede unir la IgG
específica (en contra de la prueba de antígeno), presente en el
suero del paciente, generando así un resultado positivo falso si
utilizar un conjugado anti-IgM.
ELISA de captura
6. Anticuerpos específicos para IgM o IgG está unido a una superficie de
fase sólida (perla de plástico, placa de microtitulación).
La muestra del paciente que contiene potencialmente IgM o se añade
IgG.
*lavado
Se añade el antígeno específico.
*lavado
Se añade anticuerpo marcado con enzima.
*lavado
Finalmente, se añade el sustrato cromogénico, que cambia de color en
presencia de la enzima.
*Se lava para evitar que la sustancia que sobra no intervenga en las
reacciones.
* La cantidad de color que se desarrolla es
proporcional a la cantidad de antígeno específico de IgM o IgG
en el suero del paciente.
Técnica
7.
8.
9. •Borrelia burgdorferi (IgG &
IgM)
Citomegalovirus (IgG &IgM)
Hepatitis A virus (Ig total)
Hepatitis B virus (HBV)Anti-
HBs
Anti-HBc
Anti-HBe
Anti-HBc(IgM)
Hepatitis delta virus(total Ab)
HIV Ac
ELISA
•HTLV-I(human T-lymphotropic
virus)Ac
•HTLV-II AC
•Human B-lymphotropic virus
Ab
•Rubeola virus (IgG and
IgM)
• Toxoplasma gondii (Ig y IgM)
•Plasmodium falciparum
•Trypanosoma cruzi
•Toxoplasma Gondii
•Entamoeba histolytica