Protocolo diagnóstico covid-19 día 2

1. Protocolos para el diagnóstico
de covid-19 por laboratorio
clínico
DRA. SARA SORIA ESTRUGO
BIOQUÍMICA

2. Métodos inmunológicos
Durante la pandemia por COVID-19 se desarrollaron diversas técnicas para la detección del virus
SARS-CoV-2, ya hablamos de la técnica de PCR, por lo que nos queda hablar de las técnicas
inmunológicas, las cuales se basan en la detección de los antígenos o anticuerpos del y contra el
virus ya mencionado.
Una de las primeras utilizadas fue la prueba rápida, aunque las primeras que se lanzaron al
mercado por la emergencia sanitaria tenían especificidad y sensibilidad muy bajas (hasta 60%),
por lo cual sus resultados no eran muy confiables

3. Métodos inmunológicos
Entre las pruebas de diagnóstico inmunológico, las que existen en el mercado boliviano, son las
siguientes:
Prueba rápida para la detección cualitativa de anticuerpos.
Prueba rápida para la detección de antígenos.
Pruebas de inmunofluorescencia para la detección cuantitativa de anticuerpos (ELISA, IFA,
Quimioluminiscencia)

4. Pruebas rápidas para la detección
cualitativa de anticuerpos
Su sensibilidad y especificidad varía desde un
88% a un 99%
Han demostrado dar, en muchos casos, falsos
negativos, debido a que se las realizan en
estadíos inadecuados de la infección
Entre un 15 a 20% de pacientes no desarrolla
anticuerpos, por lo cual la prueba rápida no se
considera una prueba de diagnóstico.
Son de mucha utilidad a la hora de hacer un
tamizaje poblacional, dadas las condiciones
actuales ante la crisis mundial

5. Pruebas rápidas para la detección
cualitativa de anticuerpos
La inmunocromatografía se basa en la migración de una muestra a través de una membrana de nitrocelulosa. La muestra
es añadida en la zona del conjugado, el cual está formado por un anticuerpo específico contra uno de los epítopos del
antígeno a detectar y un reactivo de detección. Si la muestra contiene el antígeno problema, éste se unirá al conjugado
formando un complejo inmune y migrará a través de la membrana de nitrocelulosa. Si no, migrarán el conjugado y la
muestra sin unirse.
La zona de captura está formada por un segundo anticuerpo específico contra otro epítopo del antígeno. Al llegar la
muestra a esta zona, los complejos formados por la unión del antígeno y conjugado quedarán retenidos y la línea se
coloreará en este caso como rosa o azul (muestras positivas). En el caso contrario las muestras son negativas.
La zona control está formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de detección. Cuando el resto de
muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unirá al conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de captura.
Esta línea es un control de que el ensayo ha funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas y
negativas.

6. Pruebas rápidas para la detección
cualitativa de anticuerpos

7. Pruebas rápidas para la detección
cualitativa de anticuerpos
VENTAJAS:
• Rapidez
• Se puede utilizar muestra
capilar, por lo que se
puede realizar in situ
• Técnica bien establecida y
adaptable
• Producción masiva y
barata
DESVENTAJAS:
Limitada sensibilidad (posibles
falsos negativos y positivos por
reacción cruzada)
Problemas de reproducibilidad
Respuesta solamente
cualitativa
Mayor tiempo de días de
espera antes de tomarse la
muestra (entre 7 a 10 días)

8. Pruebas rápidas para la detección de
antígenos
• Esta prueba es también una prueba rápida para COVID-19.
• A diferencia de la anterior prueba descrita, esta prueba detecta antígenos de la superficie del
virus.
• Para esta prueba se necesita realizar la recolección de una muestra de hisopado nasofaríngeo
• Es mejor que las pruebas rápidas, ya que detectan proteínas en la superficie del virus, lo que
hace imposible una prueba cruzada con proteínas de las superficies de otros virus.
• Se la debe realizar igual a partir de los 7 días de empezada la sintomatología, ya que se
requiere de una buena cantidad de carga viral para que el antígeno sea detectable y leído por
la prueba.
• El fundamento de esta prueba es igual que el de la prueba de anticuerpos, solo que la lámina
de nitrocelulosa contiene anticuerpos en lugar de antígenos

9. Cómo realizar la prueba rápida de
anticuerpos

10. Cómo realizar la prueba rápida de
antígenos

11. Recomendaciones para la interpretación
•Hay que recalcar que el personal bioquímico es el encargado de la realización de las pruebas
rápidas
•Las tomas de muestras pueden ser realizadas por personal de salud (médicos, enfermeras,
técnicos de laboratorio, bioquímicos), pero el único personal capacitado para realizar una
verdadera interpretación de lo que marcan los tacos es el personal bioquímicos, ya que muchos
médicos presentan problemas, en ocasiones, al interpretar lo que marca la tira de nitrocelulosa.
•Se puede utilizar sangre capilar para la realización de las pruebas rápidas de anticuerpos, pero
siempre es mejor utilizar suero, ya que el suero contiene mayor cantidad de anticuerpos
circulantes que la sangre capilar.
•Utilizar sangre capilar en caso de urgencia

12. Pruebas ELISA, IFA o Quimioluminiscencia
para la detección cuantitativa de Anticuerpos
• Son pruebas más específicas para la detección de anticuerpos contra el virus SARS-CoV-2
• Tienen mejores resultados, ya que para la detección utilizan una reacción antígeno-anticuerpo
para la detección.
• Cada una está marcada con un reactivo luminiscente que el equipo lee, a mayor intensidad de
color, mayor cantidad de anticuerpos detectados
• Este test sirve para detectar la cantidad de anticuerpos.
• Esta prueba, al igual que las pruebas rápidas, son mejor realizarlas, en pacientes con sospecha
de infección por SARS-CoV-2 o luego de un contacto con un paciente positivo, entre 7 a 14 días
luego de aparecidos los primeros síntomas o del contacto.
• La interpretación es similar a la prueba rápida.

13. ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent
Assay)

14. ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent
Assay)

15. IFA (Immunofluorescence Assay)

16. Quimioluminiscencia

17. Pautas a seguir ante un resultado
positivo
•Demuestra que la persona sí posee anticuerpos contra el virus, o por un coronavirus relacionado
•No se sabía con certeza si los anticuerpos podían brindar protección, se cree que los anticuerpos
brindan protección por tres meses.
•Si el paciente no tiene síntomas, es posible que no tenga una infección activa (portador), se hace
control de seroconversión
•Si el paciente tiene síntomas, se debe utilizar otra técnica confirmatoria (PCR)
•Es muy probable que la persona esté infectada y no se haya infectado anteriormente, por lo cual la
persona puede tener una infección activa.
•Algunos pacientes demoran en formar anticuerpos, hay casos en los que incluso no los han llegado a
formar
•Las pruebas serológicas NO SON confirmatorias por sí solas, ya que puede haber reacción cruzada con
otras infecciones virales

18. Indicaciones del Ministerio de Salud

19. Pautas a seguir ante un resultado
negativo
•Es probable que la persona no esté infectada o no lo haya estado anteriormente, pero podría
tener una infección activa, por lo cuál hay que evaluar en qué día se le realizó la toma de
muestra (en caso de las pruebas rápidas y las cuantitativas)
•Hay que recordar que muchas personas pueden demorar más tiempo en originar anticuerpos, y
otras no los generan.
•Si el paciente presenta síntomas y su pruebas sale negativa, se debe realizar una prueba de rt-
PCR para confirmar
•Cabe recalcar que las pruebas rápidas son de descarte o tamizaje, no es una prueba
confirmatoria

20. Vigilancia epidemiológica
•Se está recabando datos recientes para estimar la cantidad total de pacientes infectados (CDC)
•Las pruebas rápidas serológicas solo pueden ser realizadas por personal de salud capacitado
para la interpretación de las mismas y guardando todas las medidas de bioseguridad.
•Se debe hacer un screening poblacional
•Determinar la cantidad de personas infectadas
•Determinar quiénes se harán las pruebas moleculares, para generar un uso racional de esta
prueba.

21. Red de laboratorios autorizados para
hacer la prueba molecular de covid-19

22. Recomendaciones
•Consultar al paciente, antes de tomar la muestra, para no dar un resultado erróneo, los días de
síntomas o de contacto con positivos
•Se debe orientar al paciente en caso de no estar dentro de los días recomendados para ofrecerle
un buen resultado
•Se debe acompañar a los pacientes en la evolución de la enfermedad.
•Nosotros somos el personal capacitado para poder ayudar al paciente a elegir cuál prueba es
mejor, de acuerdo a síntomas, para que nuestros resultados sean confiables.
•No debemos realizar las pruebas solo por realizarlas, debemos recordar que el laboratorio
clínico es un servicio importante dentro del diagnóstico de covid y, por lo tanto somos una guía
para el personal médico y los pacientes.

23. Ronda de preguntas

24. DRA. SARA SORIA ESTRUGO
BIOQUÍMICA
sara_soes@hotmail.com
Cel.: 78036482