El documento describe la citometría de flujo, una técnica de análisis celular que permite el estudio multiparamétrico de muestras biológicas mediante el uso de láseres y detección de señales de dispersión y fluorescencia. Se analizan parámetros como tamaño, complejidad y marcajes antigénicos o de fluorescencia para caracterizar poblaciones celulares de forma simultánea y cuantitativa.

1. Citometría de Flujo

6. FLUOROCROMO DESCRIPCION FITC Isotiocianato de Fluoresceína PE Ficoeritrina PerCP Proteína Clorofila Peridinina TRITC Isotiocianato de tetrametil rodamina 540---570 PEC Ficoeritrina cianina RT Rojo Texas 596----615nm PC Ficocianina 620---650nm APC Aloficocianina 650-----660nm TRICOLOR TRICOLOR 540--------570nm ALEXA-FLUOR FLUOROCROMO : Molecular Probes

7. CITOMETRO

8. SISTEMAS OPTICOS

12. FUNDAMENTOS DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO

13. ¿Qué es la citometría de flujo? FSC 90º 2- 4º Columna de muestra Meeting point Láser Detectores de luz Amplificación digitalización Representación y Analisis Flujo

15. 1.1. SISTEMA DE ABSORCION DE MUESTRA MUESTRA AIRE FLUJO MUESTRA

16. 1.2. Cámara de flujo FSC 90º Fluido envolvente Columna de muestra Luz dispersada lateralmente y luz fluorescente,  = 90 º Luz incidente Luz dispersada hacia delante,  = 2- 4º

17. Luz dispersada a 90 grados (Side SCattered light ) Detector FSC Detector de 90º SSC Laser

18. DETECCION DE LUZ DISPERSADA HACIA DELANTE (FORWARD SCATTERED LIGHT, FSC) El detector de FSC convierte luz dispersada hacia delante en un pulso de voltaje proporcional al tamaño de la célula/particula FSC SSC

19. DETECCION DE LUZ DISPERSADA LATERALMENTE (SIDE SCATTERED LIGHT, SSC) El detector de SSC convierte la luz dispersada lateralmente en un pulso de voltaje proporcional a l contenido en orgánulos membranosos (granularidad) FSC SSC

20. Granulocitos CD15+ Monocitos CD14+ Linfocitos CD3+ T2ab T1gd CD4+ CD8+ CD56+ CD19+ CD5+ CD5- Morfología y antígenos de diferenciación en el análisis de la heterogeneidad celular

21. Laser Detectores de fluorescencia Fluorescencia Detector Detector de fluorescencia (PMT3, PMT4 etc.)

22. Fluorescencia FSC FL-1 FL-2

26. DETECCIÓN DE FLUORESCENCIA TC PerCP QR Cy5 APC FL-1 FL-2 FL-3 FL-4 Detectores Fluorocromos

27. Escalas FSC Ej: Lineal FL-1 Ej: Logarítmica

29. Representación monoparamétrica de datos. Histogramas. Se representa en cada valor de x (intensidad de fluorescencia) el número de células que emiten esa intensidad.

30. Histogramas SSC FSC FL-1 FL-2 FL-3

31. Representación biparamétrica en 2D Diagrama de puntos / dot plot + + - - + + - - FL-1 FL-2

32. Representación 3D Countour plot / Diagramas de contornos X, Y más una tercera dimensión. La altura representa el número de células con una determinada combinación de ambos parámetros. Densidad=altura Diagrama de dot plot density Usa colores para representar densidad

33. Selección de subpoblaciones definidas en diagramas monoparamétricos Sitúan los valores límite superior e inferior de un parámetro que definen a las células de interés. Selección de la información Gates (Puertas) / ventanas (windows)