El citometría de flujo permite caracterizar células mediante el análisis de la luz y fluorescencia emitidas cuando atraviesan un rayo láser. Las células pasan una por una frente al láser, lo que induce variaciones ópticas detectadas por fotomultiplicadores. Esto permite medir parámetros como el tamaño celular, complejidad interna y marcadores de superficie mediante anticuerpos fluorescentes. La citometría de flujo se utiliza para cuantificar linfocitos, células madre y caracterizar leucem

1. WESTERN-BLOT
• Discriminación de
antígenos específicos
frente a los que se
dirigen los anticuerpos
presentes en una
muestra.
• Prueba confirmatoria de
infecciones virales (VIH,
Hepatitis C, HTLV-1).

2. PROCEDIMIENTO
• Lisado del cultivo del agente infeccioso
• Electroforesis: separación de antígenos en gel de poliacrilamida
• Transferencia a matriz superpuesta de nitrocelulosa
• Incubación con suero del paciente
• Unión de anticuerpos específicos radiomarcados o unidos a
enzima a proteína blanco
• Detección: bandas coloreadas por reacción enzimática en zonas
correspondientes a anticuerpos específicos que contenga la
muestra

9. Resultado:
• Positivo
• Negativo
• Indeterminado

10. • Técnica de análisis celular
multiparamétrico que permite
caracterizar fenotípicamente una
célula mediante el estudio de la
dispersión de la luz y
fluorescencia emitidas cuando
atraviesa un rayo láser.
• Permite analizar células, núcleos,
cromosomas, mitocondrias y otras
partículas en suspensión.

11. SISTEMA HIDRÁULICO: controles neumático y fluidos para establecer un flujo
laminar que permita a la suspensión celular atravesar la cámara de flujo.
SISTEMA ÓPTICO: láser (Argón con luz monocromática de
488nm, filtros, lentes y detectores.
SISTEMA ELECTROINFORMÁTICO: convierte la luz dispersa en señales
eléctricas y las procesa para su análisis.

12. • Principio: hacer pasar células u otras partículas en suspensión alineadas
y de una en una por delante de un haz luminoso, induciendo variaciones
ópticas que son detectadas por un sistema de fotomultiplicadores.

13. Señales de dispersión: interacción de la luz con una partícula que produce un cambio
de dirección en todas direcciones. Determinada por el tamaño celular, la membrana, el
núcleo y el material granular del interior de la célula, llamado complejidad.
- en ángulo cónico pequeño (0-10º) que casi coincide con la dirección de la luz
incidente, llamada FSC (Forward Scatter). Proporcional al tamaño de la partícula
que produce la dispersión.
- en ángulo recto llamada SSC (Side Scatter). Proporcional a la complejidad de la
estructura interna de la partícula.
Fluorescencia: fluorocromo interacciona con luz láser y emite energía radiante. Parte se
utiliza para la absorción y la luz emitida es de menor energía que la luz de excitación. La
diferencia entre la longitud de onda de absorción y emisión se denomina Stokes shiff.
Los CMF permiten detectar señales de fluorescencia procedentes de Ac marcados con un
fluorocromo y situados en una célula, siendo la cantidad de señal de fluorescencia
emitida igual a la proporción de la cantidad de componentes fluorescentes de la
partícula.

14. PARÁMETROS MEDIBLES POR CMF

17. Aplicaciones:
• Cuantificación de subpoblaciones linfocitarias para el Dx y
seguimiento de inmunodeficiencias (ej. VIH); LCD4+ y CD8+
• Cuantificación de SC, CD34+ para valorar injertabilidad en muestras
para TPH autólogo o alogénico.
• Diagnóstico, seguimiento, evaluación pronóstica y detección de EMR
de hemopatías malignas. Identificación de tipos de leucemia.
• Detección de antígenos HLA para ayudar el diagnóstico de
enfermedades autoinmunes con asociación estadística a
determinados alelos.